中國(guó)明對(duì)蝦血藍(lán)蛋白C末端片段在畢赤酵母中的表達(dá)及其抗菌活性

邱楚雯 , 劉 梅 王寶杰 蔣克勇 孫姝娟 孟曉林 , 駱作勇 , 王 雷

(1. 中國(guó)科學(xué)院 海洋研究所, 山東 青島266071; 2. 中國(guó)科學(xué)院大學(xué), 北京100049)

根據(jù)聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示,自20世紀(jì)80年代初以來全球?qū)ξr養(yǎng)殖產(chǎn)量不斷增加[1], 越來越多的消費(fèi)者把蝦作為重要的蛋白質(zhì)來源。目前蝦捕撈產(chǎn)量未見明顯增長(zhǎng), 消費(fèi)者日益增長(zhǎng)的需求量主要是通過水產(chǎn)養(yǎng)殖來滿足的。然而高密度養(yǎng)殖蝦導(dǎo)致了許多問題, 其中最為嚴(yán)重的是病毒、細(xì)菌和真菌病原體的感染性疾病。中國(guó)明對(duì)蝦(Fenneropenaeus chinensis)是中國(guó)主要的蝦類養(yǎng)殖品種之一。中國(guó)明對(duì)蝦養(yǎng)殖過程中疾病的爆發(fā)嚴(yán)重影響?zhàn)B殖產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。因此, 迫切需要找到有效的方法來防止和抑制蝦類養(yǎng)殖過程中疾病的發(fā)生[2]。

血藍(lán)蛋白是節(jié)肢動(dòng)物和軟體動(dòng)物血淋巴中的呼吸蛋白, 由 3個(gè)結(jié)構(gòu)域構(gòu)成, 分別是 hemocyanin_N結(jié)構(gòu)域, hemocyanin_M結(jié)構(gòu)域和hemocyanin_C結(jié)構(gòu)域[3]。第1個(gè)和第個(gè)3結(jié)構(gòu)域分別為蛋白的N端和C端, 第 2個(gè)結(jié)構(gòu)域?yàn)檠{(lán)蛋白的活性部位。近年來,研究表明血藍(lán)蛋白不僅參與氧的運(yùn)輸, 而且還參與能量?jī)?chǔ)存, 維持滲透壓, 蛻皮調(diào)控, 傷口愈合以及黑色素的合成。值得注意的是Destoumieux等[4-5]研究發(fā)現(xiàn)南美藍(lán)對(duì)蝦(Penaeus stylirostris)和凡納濱對(duì)蝦(Penaeus vannamei)的血藍(lán)蛋白及其降解片段參與非特異性免疫活動(dòng)。因此, 血藍(lán)蛋白被認(rèn)為有抗菌活性。

抗菌肽(Antimicrobial peptide, AMPs)是生物體內(nèi)產(chǎn)生的小肽類物質(zhì), 在先天性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用, 其抗菌譜廣, 對(duì)細(xì)菌、真菌、病毒等均有抑制作用?？咕闹苯悠茐哪さ姆€(wěn)定性并產(chǎn)生穿孔或裂解, 引起內(nèi)容物泄露, 導(dǎo)致細(xì)胞死亡[6]。自從Steiner等[7]首先在巨型蠶蛾中發(fā)現(xiàn)了天蠶素cecropin抗菌肽之后, 越來越多的抗菌肽被發(fā)現(xiàn)或預(yù)測(cè)出來。根據(jù)氨基酸組成、分子大小和結(jié)構(gòu)的不同, 將抗菌肽分為幾種類型, 其中包括α-螺旋、β-折疊結(jié)構(gòu)的抗菌肽等[8]。常見的抗菌肽多為陽離子抗菌肽(Cationic AMPs (CAMPs))。而Lai等[9]根據(jù)蟾蜍的基因序列克隆并合成了抗菌肽 Maximin H, 發(fā)現(xiàn)它是具有與陽離子抗菌肽類似功能的陰離子抗菌肽(Anionic AMPs(AAMPs))。

目前, 在脊椎動(dòng)物、無脊椎動(dòng)物和植物體內(nèi)均發(fā)現(xiàn)有陰離子抗菌肽。陰離子抗菌肽是動(dòng)植物體內(nèi)先天性免疫系統(tǒng)的重要組成部分[10]。陰離子抗菌肽的凈 電 荷 從 –1 到 –7, 由 5～70 個(gè) 殘 基 構(gòu) 成[11]。Destoumieux等[4]研究表明血藍(lán)蛋白的C-端片段具有陰離子抗菌肽活性。基于血藍(lán)蛋白 C端片段的抑菌活性, 本研究利用真核表達(dá)系統(tǒng)重組表達(dá)中國(guó)明對(duì)蝦血藍(lán)蛋白 C端基因片段。與傳統(tǒng)的分離與純化抗菌肽相比, 真核表達(dá)系統(tǒng)具有許多優(yōu)點(diǎn), 如產(chǎn)量高,易于純化, 培養(yǎng)基成分簡(jiǎn)單, 成本較低[12]。作為真核生物, 畢赤酵母具有高等真核表達(dá)系統(tǒng)的許多優(yōu)點(diǎn),如蛋白加工、折疊、翻譯后修飾等。不僅如此, 畢赤酵母(Pichia pastoris)具有與釀酒酵母相似的分子及遺傳操作優(yōu)點(diǎn), 且它的外源蛋白表達(dá)水平是后者的10倍以至 100倍, 這使得畢赤酵母成為非常有用的蛋白表達(dá)系統(tǒng)。實(shí)際上, 已有利用畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)重組表達(dá)抗菌肽的報(bào)道[13-16]。本研究構(gòu)建了中國(guó)明對(duì)蝦血藍(lán)蛋白-C端的部分片段(FcHC-C1和FcHC-C2)的畢赤酵母表達(dá)體系, 并初步研究這兩種重組多肽片段的抗菌活性。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 菌株、質(zhì)粒、引物

畢赤酵母表達(dá)菌株GS115購(gòu)自Invitrogen 公司,大腸桿菌Top10來自于本實(shí)驗(yàn)室。改造的pPIC9K酵母表達(dá)載體由中國(guó)科技大學(xué)周叢照教授饋贈(zèng)。引物均由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成, 引物序列見表1。2個(gè)基因片段(FcHC-C1和FcHC-C2)在中國(guó)明對(duì)蝦血藍(lán)蛋白基因FcHC(GenBank登錄號(hào):FJ594414)的相對(duì)位置分別為1741～1947和1936～2055,基因序列可參見NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)。

表1 引物序列Tab.1 Primer sequences

1.1.2 工具酶及主要試劑

Taq DNA Polymerase 購(gòu)自TIANGEN公司、T4 DNA Ligase 購(gòu)自 MBI公司,EcoR I、SaII、BamH I工具酶購(gòu)自大連寶生物公司, Tris、EDTA、核酸marker 、蛋白 marker、Agarose、Tryptone、Yeast Extract、Biotin、YNB、山梨醇、dNTP、UNIQ-10柱式DNA膠回收試劑盒等購(gòu)自上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 表達(dá)載體的構(gòu)建

本實(shí)驗(yàn)室已從中國(guó)明對(duì)蝦肝胰腺中克隆出血藍(lán)蛋白基因FcHC的全長(zhǎng)cDNA序列(GenBank登陸號(hào):FJ594414), 根據(jù)中國(guó)明對(duì)蝦血藍(lán)蛋白 cDNA序列設(shè)計(jì)特異性引物, 克隆兩個(gè)FcHC-C端片段, 分別命名為FcHC-C1和FcHC-C2。引物CPF23E/CPR23B和CPF13E/CPR13B 分別用來擴(kuò)增FcHC-C1和FcHC-C2。正向引物含有EcoR I限制性酶切位點(diǎn), 反向引物包含BamH I限制性酶切位點(diǎn)。PCR條件如下:95 ℃預(yù)變性5 min; 95 ℃變性30 s, 60℃退火30 s, 72 ℃延伸30 s, 36個(gè)循環(huán); 72 ℃繼續(xù)延伸10 min。用限制性內(nèi)切酶EcoR I和BamH I分別對(duì)純化后的PCR片段和含有組氨酸(His)標(biāo)簽的質(zhì)粒 pPIC9K進(jìn)行雙酶切, 采用 DNA凝膠回收試劑盒回收酶切片段, 采用T4 DNA連接酶連接酶切產(chǎn)物。連接產(chǎn)物分別轉(zhuǎn)化Escherichia coliTop10感受態(tài)細(xì)胞, 通過篩選獲得重組酵母表達(dá)載體pPIC9K-FcHC-C1和pPIC9K-FcHC-C2。用上游α-Factor引物(TACTATTGCCAG CATTG CTGC)為測(cè)序引物, 對(duì)重組載體進(jìn)行測(cè)序鑒定。

1.2.2 pPIC9K/FcHC-C轉(zhuǎn)化P. pastorisGS115及高拷貝轉(zhuǎn)化子篩選

用SalⅠ酶切重組質(zhì)粒 pPIC9K-FcHC-C, 根據(jù)Invirogen公司畢赤酵母表達(dá)手冊(cè), 采用PEG法將重組子轉(zhuǎn)化到畢赤酵母 GS115感受態(tài)細(xì)胞中, 并將轉(zhuǎn)化后的畢赤酵母GS115感受態(tài)細(xì)胞涂布于MD生長(zhǎng)培養(yǎng)基上, 30 ℃培養(yǎng)約2 d, 直至克隆出現(xiàn)。吸取2 mL無菌水收集 MD平板上的轉(zhuǎn)化子。一定濃度的轉(zhuǎn)化子涂布于含有不同濃度G418(0.5, 1.0, 1.5, 和2.0 g/L)的YPD(1%酵母提取物, 2%蛋白胨, 2%葡萄糖, 2%瓊脂)平板上, 30 ℃孵育2～5 d。挑取單菌落至YPD液體培養(yǎng)基, 30 ℃培養(yǎng) 24 h后提取 DNA, 用AOX-F/AOX-R 引物(表 1)進(jìn)行 PCR 鑒定, 使用pPIC9K空質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的畢赤酵母菌做陰性對(duì)照。

1.2.3 重組畢赤酵母GS115誘導(dǎo)表達(dá)FcHC-C

將篩選出的陽性克隆接種于50 mLBMGY培養(yǎng)基中(1%酵母提取物, 2%蛋白胨, 1.34%YNB, 1%甘油和0.4 g/ L的生物素和1%磷酸鉀緩沖液)[15], 28℃,轉(zhuǎn)速230 rpm條件下培養(yǎng)約 20 h, 直到培養(yǎng)物達(dá)到A600為2～5。培養(yǎng)物通過5 000 r/min離心5 min收集菌體。菌體用50 mL BMMY培養(yǎng)基(1%酵母提取物,2%蛋白胨, 1.34% YNB, 0.5%甲醇和0.4 mg/mL的生物素和1%磷酸鉀緩沖液)重新懸浮于500 mL三角瓶中28℃培養(yǎng), 轉(zhuǎn)速為230 rpm。每24 h添加甲醇溶液(100%)至最終質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%。

1.2.4 重組蛋白rFcHC-C1和rFcHC -C2的純化及鑒定

將培養(yǎng)96 h后的菌液, 12 000 r/min離心20 min,收集上清液, 上樣于用 20 mmol/L磷酸鈉, 0.5 mol/L氯化鈉, 20 mmol/L 咪唑(pH7.4)預(yù)平衡后的His-GraviTrap柱子, 用20 mmol/L磷酸鈉, 0.5 mol/L氯化鈉, 500 mmol/L咪唑(pH7.4)洗脫。純化的重組蛋白FcHC-C1和FcHC-C2透析脫鹽處理, 最終凍干備用。按Western blotting 常規(guī)方法制膠, 將純化后樣品經(jīng)Tricine-SDS-PAGE電泳[17]后, 30 V恒壓15 min轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上, 室溫下封閉1 h后加入一抗(兔抗His抗體 1: 50000比例), 4℃放置12 h以上。棄一抗, 用TBST洗膜4次。加入二抗(羊抗兔抗體1: 2000比例),平穩(wěn)搖動(dòng), 室溫下1 h。棄二抗, TBST洗膜4次。加入顯色液后避光顯影至出現(xiàn)條帶后終止反應(yīng)[18]。

1.2.5 重組蛋白rFcHC-C1和 rFcHC-C2的抗菌活性檢測(cè)

對(duì)純化后的重組蛋白rFcHC-C1和rFcHC-C2進(jìn)行抑菌活性鑒定。指示菌包括革蘭氏陽性細(xì)菌如藤黃微球菌(Micrococcus luteus), 革蘭氏陰性細(xì)菌如鰻弧菌(Vibrio anguillarum)、嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)以及銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa), 真菌如尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum)、終極霉菌(Pythium ultimum)、灰霉病菌(Botrytis cinerea)、柑桔綠霉病菌(Pestalotia diospyri)、黃瓜炭疽病菌(Colletotrichum orbiculare)以及核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum), 共10種菌。最小抑菌濃度(MIC)測(cè)定方法如下[19-21]: 將純化后的重組蛋白用 0.01%的乙酸和 0.2%的牛血清白蛋白稀釋成適當(dāng)倍數(shù)之后, 取10 μL樣品加入96孔板中, 同時(shí)加入 100 μL LB 培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)菌(2×105～7×105個(gè)/mL)或者加入80 μL PDB培養(yǎng)基培養(yǎng)的真菌孢子(104個(gè)/mL)。30℃振搖培養(yǎng)24 h后, 在600 nm下用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光值。

2 結(jié)果

2.1 pPIC9K-FcHC-C載體構(gòu)建

以本實(shí)驗(yàn)室保存的血藍(lán)蛋白(FcHC)cDNA為模板, PCR擴(kuò)增血藍(lán)蛋白基因的2個(gè)C末端基因片段FcHC-C1和FcHC-C2, 瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)可見在100～250 bp有兩個(gè)不同大小的條帶。FcHC-C1片段大小與預(yù)計(jì)的207 bp相符。FcHC-C2片段大小則與預(yù)計(jì)的120 bp相符(圖1)。膠回收的PCR產(chǎn)物酶切后連接到載體 pPIC9K。測(cè)序結(jié)果表明插入的外源基因與FcHC-C1和FcHC-C2序列相符, 重組 pPIC9KFcHC-C1與pPIC9K-FcHC-C2載體構(gòu)建成功。

圖1 FcHC-C基因片段的PCR擴(kuò)增Fig.1 PCR product of FcHC-C

2.2 PCR鑒定轉(zhuǎn)化子

pPIC9K/FcHC-C1、pPIC9K/FcHC-C2和 pPIC9K分別通過SalI酶切線性化之后采用 PEG法轉(zhuǎn)化GS115感受態(tài)細(xì)胞, 挑取單菌落至YPD液體培養(yǎng)基,30℃培養(yǎng)24 h后提取DNA, 用AOX-F/AOX-R引物進(jìn)行PCR鑒定。瓊脂糖凝膠電泳顯示陽性轉(zhuǎn)化子擴(kuò)增出兩個(gè)條帶(圖 2)。重組菌 GS115/pPIC9KFcHC-C1擴(kuò)增出約700 bp(pPIC9K上下游引物之間序列長(zhǎng)度與插入目的基因長(zhǎng)度之和)和2.2 kb(AOX1)條帶; 重組菌 GS115/pPIC9K-FcHC-C1擴(kuò)增出約610 bp和2.2 kb(AOX1)條帶。表明重組載體pPIC9K/FcHC-C已經(jīng)成功整合到酵母基因組DNA上。

2.3 FcHC-C1和 FcHC-C2在畢赤酵母中的表達(dá)

挑取G418質(zhì)量濃度為2 g/L的YPD平板上的單菌落, 甲醇誘導(dǎo)表達(dá) 96 h后, 發(fā)酵液經(jīng)過離心取上清液通過His-GraviTrap柱純化后的樣品通過蛋白凝膠電泳Tricine-SDS-PAGE, 可見在大約7 ku和5 ku附近出現(xiàn)條帶(圖3)。條帶大小與預(yù)計(jì)大小有些偏差是由于 SDS-PAGE蛋白電泳過程中, 蛋白的遷移受許多因素的影響, 蛋白電泳顯示的蛋白大小是蛋白的表觀大小并非實(shí)際大小, 蛋白大小的偏差的具體原因有待進(jìn)一步驗(yàn)證[22]。凝膠電泳 Tricine-SDS-PAGE結(jié)果表明外源基因在畢赤酵母系統(tǒng)中已表達(dá), Western Blot分析結(jié)果也發(fā)現(xiàn)目的條帶表明血藍(lán)蛋白C端的兩個(gè)片段(FcHC-C1和FcHC-C2)成功表達(dá)。

圖2 PCR鑒定重組載體整合入酵母基因組Fig.2 PCR Analysis of Pichia Integrants

圖3 純化的rFcHC-C1和rFcHC-C2的Tricine-SDS-PAGE分析Fig.3 Tricine-SDS-PAGE analysis of the expressed FcHCC1 and FcHC-C2

2.4 表達(dá)產(chǎn)物抗菌活性檢測(cè)

采用多種細(xì)菌和真菌對(duì)畢赤酵母重組表達(dá)產(chǎn)物rFcHC-C1和rFcHC-C2進(jìn)行抗菌活性檢測(cè), 所采用的指示菌包括6種真菌、1種革蘭氏陽性細(xì)菌和3種革蘭氏陰性細(xì)菌。結(jié)果表明 rFCHc-C1和rFcHC-C2具有一個(gè)相對(duì)寬的抗菌譜(表 2)。rFcHC-C1對(duì)黃瓜炭疽病菌、尖孢鐮刀菌最小抑菌濃度 MIC 分別為 1.1～2.1 μmol/L、10.6～21.2 μmol/L。rFcHC-C2對(duì)灰霉病菌和黃瓜炭疽病菌的最小抑菌濃度MIC為1.3～2.6 μmol/L, 而對(duì)尖孢鐮刀菌的最小抑菌濃度 MIC 為 13.0～26.0 μmol/L。rFcHC-C1和 rFcHC-C2對(duì)其他指示真菌抑菌活性較弱(MICrFcHC-C1＞21.2 μmol/L 和 MICrFcHC-C2＞26.0 μmol/L)。rFcHC-C1和rFcHC-C2可以抑制革蘭氏陽性細(xì)菌-藤黃微球菌生長(zhǎng)。然而, 這兩種重組蛋白對(duì)3種革蘭氏陰性菌抑菌效果比革蘭氏陽性菌和部分真菌弱。

表2 重組抗菌肽FcHC-C1和FcHC-C2最小抑菌濃度(MIC)Tab.2 Minimal growth inhibition concentrations (MIC)of rFcHC-C1 and rFcHC-C2

3 討論

目前, 甲殼類動(dòng)物, 如南美白對(duì)蝦[23]、斑節(jié)對(duì)蝦[24]血藍(lán)蛋白的基因已被克隆并測(cè)序。本課題組已經(jīng)克隆到中國(guó)明對(duì)蝦血藍(lán)蛋白 cDNA全長(zhǎng), 并命名為FcHC(GenBank登錄號(hào): FJ594414)。Destoumieux等研究表明血藍(lán)蛋白不僅負(fù)責(zé)氧氣輸送, 而且血藍(lán)蛋白及其降解片段參與各種先天免疫活動(dòng), 其中血藍(lán)蛋白的C-端參與抗菌肽的形成和釋放。Destoumieux等從南美藍(lán)對(duì)蝦(P. stylirostris)血清中純化抗菌肽PsHCt1和PsHCt2; 在凡納濱對(duì)蝦(P. vannamei)血清中發(fā)現(xiàn)抗菌肽PvHCt, 這3種血藍(lán)蛋白抗菌肽具有很強(qiáng)的抗真菌活性[4]。將 2個(gè)血藍(lán)蛋白 C末端片段(FcHC-C1和FcHC-C2)與Destoumieux等分離純化出的抗菌肽(PsHCt1、PsHCt2和 PvHCt)序列比對(duì)結(jié)果顯示本研究中 FcHC-C1氨基酸序列(FcHCC1--LVVAVTDGEADAAVEGLHDNTDFIHYGSHGK YPDNRPHGYPLD)與PsHCt1和PsHCt2有 67.7%和69.7%的相似性; FcHC-C2的氨基酸序列(FcHC-C2--FEVLPNFKHIQVKVFNHGEHIHHH)與PvHCt有91.3%的相似性。因此推斷中國(guó)明對(duì)蝦血藍(lán)蛋白 C-端可能具有潛在的抗菌活性, 其具體功能尚待闡明。甲殼類抗菌肽主要有3種類型, 分別是對(duì)蝦素(Penaeidins)、甲殼素(Crustins)和抗脂多糖因子(Anti-lipopolysaccharide factor)[25-27]。其中大部分抗菌肽為陽離子抗菌肽, 而陰離子抗菌肽的研究較少。FcHC-C1和FcHC-C2序列編碼蛋白的等電點(diǎn)估計(jì)為5.08和 6.77。陰離子抗菌肽的凈電荷從–1到–7, 由5～70個(gè)殘基構(gòu)成[11], 因而推斷 rFcHC-C1 和rFcHC-C2為陰離子抗菌肽。這為甲殼類動(dòng)物陰離子抗菌肽的研究提供參考。

畢赤酵母菌株 GS115的分泌表達(dá)系統(tǒng), 是通過信號(hào)肽 α-factor, 使外源蛋白實(shí)現(xiàn)胞外表達(dá)[28], 分泌表達(dá)的外源蛋白通過Kex2和Ste13酶切α-factor, 從而形成成熟肽, 有利于外源蛋白的純化利用。同時(shí)外源基因是整合到畢赤酵母基因組中, 有利于表達(dá)系統(tǒng)的保存[29]。由此表明, 本研究通過畢赤酵母真核表達(dá)系統(tǒng)用于表達(dá)血藍(lán)蛋白-C端抗菌 FcHC-C1和FcHC-C2具有可行性。

畢赤酵母重組表達(dá)的抗菌肽 rFcHC-C1和rFcHC-C2抗菌活性檢測(cè)結(jié)果與Destoumieux等純化出的抗菌肽PsHCt1, PsHCt2和PvHCt活性類似[4]。PsHCt1, PsHCt2和PvHCt的等電點(diǎn)為5.65～6.54, 為陰離子抗菌肽, 主要表現(xiàn)為抗真菌活性; rFcHC-C1和rFcHC-C2預(yù)測(cè)等電點(diǎn)為5.08和6.77, 也是陰離子抗菌肽。rFcHC-C1和rFcHC-C2對(duì)真菌抑菌活性分析表明, 兩者對(duì)黃瓜炭疽病菌作用效果最好, 其次是尖孢鐮刀菌和灰霉病菌。然而 rFcHC-C1和rFcHC-C2也表現(xiàn)出抗細(xì)菌的活性, 它們對(duì)革蘭氏陽性細(xì)菌抑菌效果優(yōu)于革蘭氏陰性細(xì)菌。此外根據(jù)最小抑菌濃度大小, rFcHC-C2抑菌活性整體強(qiáng)于rFcHC-C1, 推測(cè)原因可能是由于 rFcHC-C2的等電點(diǎn)更接近于 7.0, 表現(xiàn)出了陽離子抗菌肽的廣譜抗菌性。在畢赤酵母菌株GS115甲醇誘導(dǎo)表達(dá)過程中, 酵母細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢, 上清液有一定黏性, 空白對(duì)照無此現(xiàn)象, 表明這兩種重組表達(dá)蛋白對(duì)表達(dá)宿主有一定的抑制活性。

總之, 本研究通過畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng)重組表達(dá)中國(guó)明對(duì)蝦血藍(lán)蛋白-C端基因, 并研究表明此 2種陰離子抗菌肽抗菌活性較好; 可用于有植物和水生動(dòng)物疾病控制。然而, 中國(guó)明對(duì)蝦血藍(lán)蛋白 C末端片段在對(duì)蝦免疫防御機(jī)制中的功能有待進(jìn)一步研究。中國(guó)明對(duì)蝦血藍(lán)蛋白 C末端片段如何參與免疫反應(yīng), 并在免疫系統(tǒng)中扮演的角色尚存在疑問。深入研究中國(guó)明對(duì)蝦血藍(lán)蛋白 C末端抗菌肽在抗病反應(yīng)中的作用方式, 如何生產(chǎn)更多的抗菌肽FcHC-C對(duì)疾病的預(yù)防有深遠(yuǎn)的影響。

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