不同產(chǎn)地紅景天中紅景天苷提取工藝研究*

何寶佳，魏 蔚

(皖南醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，安徽 蕪湖 241002)

紅景天系薔薇目景天科紅景天屬(RadixetRhodiolaeCrenulatae)多年生草本或亞灌木植物，莖葉嫩綠，花、根、莖之浸液均呈紅色而得名．長期以來，民間用其根莖熬水、泡酒可消除疲勞，抵御嚴(yán)寒，尤以高原藏族人民應(yīng)用地域較廣、時(shí)間較長；《本草綱目》草部第20卷中注明紅景天為“草本上品”，主要功效是扶正固本、補(bǔ)氣養(yǎng)血、清熱潤肺．現(xiàn)代藥理學(xué)研究也證明紅景天屬植物具有抗輻射、預(yù)防高原反應(yīng)、抗缺氧、抗衰老、抗腫瘤、提高記憶力等作用,近年來國內(nèi)將紅景天作為強(qiáng)身健體的藥物逐步進(jìn)行深入研究和開發(fā)，已有了多種制劑、保健品及飲料，另外對心血管系統(tǒng)還有一定影響．藥理學(xué)研究也表明它們所含的紅景天苷、紅景天素、酪醇、二苯甲基六氫比啶、草質(zhì)素、巖石菜素等為其有效活性成分，而紅景天苷為其主要活性成分．本實(shí)驗(yàn)對不同產(chǎn)地紅景天的提取溶劑進(jìn)行研究比較，通過對紅景天苷的提取率比較，以篩選出最優(yōu)的提取溶劑，為紅景天藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的建立及提取工藝的研究提供一定的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)．

1 材料與設(shè)備

1.1 材料

西藏大花紅景天、青海大花紅景天、西藏圣地紅景天、四川大花紅景天、臨江高山紅景天，以上均由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)教授鑒定為景天科紅景天屬植物紅景天．

1.2 儀器設(shè)備與試劑

ALLTECH高效液相色譜儀，色譜柱：ODS-C18(4.6mm×250mm5um)，KQ-250DB型數(shù)控超聲波清洗器；乙腈、甲醇均為色譜醇，水(杭州產(chǎn)娃哈哈純凈水1.25L裝)經(jīng)微孔濾膜濾過，紅景天苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所．

1.3 色譜條件

流動(dòng)相:甲醇:水(12:58)；檢測波長:278nm;流速:0.70ml/min;柱溫:25℃;理論板數(shù)按紅景天苷峰計(jì)算,應(yīng)不低于2000．

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備

精密稱取紅景天苷對照品12.5mg于25ml容量瓶中，加甲醇超聲溶解，待冷至室溫后，定容至刻度，搖勻，即得紅景天苷對照品溶液(0.5mg.ml-1)．

2.2 樣品的處理

(1)水提.精密稱取粉碎藥材各0.5g，分別置50ml三角瓶中，分別加蒸餾水40、30、30ml，60℃下，超聲提取30min，合并提取液于100ml容量瓶中，放置室溫，蒸餾水定容至刻度，備用．

(2)醇提.精密稱取粉碎藥材各0.5g，分別置50ml三角瓶中，分別加30%、60%、90%乙醇40、30、30ml，30℃下，超聲提取30min，合并提取液于100ml容量瓶中，放置室溫，30%乙醇定容至刻度，備用．

(3)甲醇提取.精密稱取粉碎藥材各0.5g，分別置50ml三角瓶中，分別加甲醇30、20ml，30℃下，超聲提取30min，合并提取液于50ml容量瓶中，放置室溫，甲醇定容至刻度，備用．

2.3 樣品溶液的制備

水提：將已制備的水提樣品溶液轉(zhuǎn)移至已恒重的蒸發(fā)皿中，待蒸干樣品后，將其轉(zhuǎn)移至10ml容量瓶中，加少量甲醇超聲溶解，放置室溫，加甲醇定容至刻度備用．醇提：制備方法同水提．甲醇提：制備方法同水提．

2.4 方法學(xué)考察

(1)線性關(guān)系的考察.分別精密吸取對照品溶液0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、5.0、10.0ml，于10ml容量瓶中，并加甲醇定容至刻度，搖勻，備用．按照已經(jīng)確定的色譜條件，分別進(jìn)樣5μl，每樣重復(fù)進(jìn)樣3次，取峰面積的平均值；以峰面積為縱坐標(biāo)，紅景天苷進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，得方程為Y=2.192×106X+140359，相關(guān)系數(shù)R=0.9998，該條件下峰面積和紅景天苷量的線性關(guān)系良好，線性范圍為0.1～5μg．

(2)精密度試驗(yàn).精密吸取紅景天苷對照品溶液(0.5mg.ml-1)5μl，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定紅景天苷峰面積，得其RSD=1.37%．

(3)穩(wěn)定性試驗(yàn).精密吸取紅景天苷對照品溶5μl，每隔2h測定1次，結(jié)果表明樣品在8h內(nèi)穩(wěn)定，樣品紅景天苷峰面積的RSD=1.23%(n=5)．

(4)重現(xiàn)性試驗(yàn).取四川大花紅景天樣品，按2.2中的(2)制樣方法制樣5份，依次進(jìn)樣測定紅景天苷的含量，結(jié)果紅景天苷的RSD=1.33%(n=5)．

(5)回收率實(shí)驗(yàn).采取加樣回收法．取已知紅景天苷含量的四川大花紅景天粉末5份，每份約0.5g，精密稱定，分別加入紅景天苷對照品0.25mg，制備供試品溶液，計(jì)算回收率，測得紅景天苷平均回收率為97.19%，RSD=1.17%(n=5)．

2.5 含量測定與結(jié)果

圖1 紅景天苷標(biāo)準(zhǔn)品圖

圖2 紅景天樣品譜圖

在上述色譜條件下，分別進(jìn)樣測定紅景天藥材中紅景天苷的含量，進(jìn)樣量5μl．不同產(chǎn)地紅景天苷含量(見表1).

表1 不同提取溶劑提取紅景天苷的含量比較

2.6 結(jié)論

本試驗(yàn)對不同產(chǎn)地紅景天藥材樣品進(jìn)行分離，結(jié)果表明由于不同產(chǎn)地的紅景天藥材樣品成分不盡相同，因此不能對各個(gè)產(chǎn)地的樣品均達(dá)到良好的分離效果，而且出峰時(shí)間均較早，因此缺少一定的準(zhǔn)確度和精密度；但該流動(dòng)相對各個(gè)產(chǎn)地的樣品均能達(dá)到良好的分離效果，且峰形良好，也彌補(bǔ)了乙腈/水作為流動(dòng)相使紅景天苷出峰過早的缺點(diǎn)．故本實(shí)驗(yàn)選擇甲醇/水(18:52)作為最佳比例的流動(dòng)相，同時(shí)發(fā)現(xiàn)臨江地區(qū)紅景天樣品與其他產(chǎn)地樣品比較成分更為復(fù)雜，且紅景天苷的含量相對也要低一些，因此，從藥用價(jià)值角度考慮，推薦使用四川、西藏、青海等地的紅景天藥材．另外，不同產(chǎn)地紅景天其紅景天苷提取率隨溶劑極性的減小而升高，并在60%乙醇提取下達(dá)到最高，而后呈下降趨勢，這說明60%乙醇能夠比較完全的提取紅景天苷，而與一些文獻(xiàn)報(bào)道的水提紅景天苷提取率最高并不一致；且黃明立等選用不同比例的甲醇-水作為提取溶劑對紅景天苷進(jìn)行提取，發(fā)現(xiàn)甲醇-水(2:8)提取效果為最佳．

參考文獻(xiàn)：

[1]龔晨睿,李字紅,馬良.紅景天復(fù)合制劑抗疲勞作用研究[J].衛(wèi)生研究,2002,31(5):397．

[2]向進(jìn)樂.紅景天有效成分的提取與分離工藝研究[D].重慶:西南農(nóng)業(yè)大學(xué),2005.

[3]崔艷梅,婁安如,趙長琦.紅景天屬植物化學(xué)成分及藥理作用研究進(jìn)展[J].北京師范大學(xué)學(xué)報(bào),2004,44(3):17.

[4]包文芳,吳維春,李葆華.抗疲勞藥用植物紅景天[M].北京:人民軍醫(yī)出版社,2005.