老鸛草鞣質(zhì)體外抗氧化作用研究*

車環(huán)宇，劉 暢，孫仁爽

(1.通化師范學(xué)院 制藥與食品科學(xué)學(xué)院，吉林 通化 134002; 2.通化市藥檢所，通化市 134002)

N-亞硝基化合物(NDMA)，能引起人體和動(dòng)物肝臟等多個(gè)器官的病變，如惡性腫瘤等，現(xiàn)已成為令人非常頭疼的一類致癌物，原因在于其內(nèi)部在一系列酶的作用變化下，產(chǎn)生可使核酸烷化的自由基，成為親電子的烷基自由基，從而引起細(xì)胞發(fā)生遺傳性突變，顯示出致癌性[1]．通常在日常生活中人們吃食物時(shí)攝入亞硝胺是非常少的，但吃進(jìn)的食物在體內(nèi)的代謝消化會(huì)形成NDMA前體物質(zhì)，這種前體物質(zhì)會(huì)大量存在于代謝過程中，特別是在胃中更適于形成[2]．所以說阻斷其NDMA前體物質(zhì)的產(chǎn)生形成是預(yù)防腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵，即抗氧化的發(fā)生．

鞣質(zhì)分子結(jié)構(gòu)中具有較多的酚羥基，有較強(qiáng)的供氫能力，發(fā)揮抗氧化作用．鑒于此，本試驗(yàn)主要考察老鸛草提取液中的有效成分在一定濃度時(shí)對(duì)亞硝化反應(yīng)及亞硝基的清除作用，在體外研究其抗氧化能力．

1 試驗(yàn)儀器與材料和試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

CP224S型分析天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司)；ZF-C型三用紫外分析儀(上?？岛坦怆妰x器有限公司)；紫外可見分光光度計(jì)(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)；超聲波震蕩提取器(天津奧特塞恩斯儀器有限公司)．

1.2 實(shí)驗(yàn)材料與試劑

老鸛草(Nemesiastrumosa)牻牛兒苗科(Geraniaceae)老鸛草屬(Geranium)植物，老鶴草GeraniumwilfordiiMaxim的干燥帶果地上部份，鑒定人為通化師范學(xué)院制藥與食品科學(xué)學(xué)院于俊林教授．氯仿、乙酸乙酯、正丁醇(分析純)、碳酸鈉、亞硝酸鈉、對(duì)氨基苯磺酸，α-萘胺、萘乙二胺鹽酸鹽(試驗(yàn)用試劑均購于天津東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠)．

2 老鸛草提取物的制備

采用液料比1:12g/ml的70%丙酮在超聲頻率100KHz下超聲，提取時(shí)間為60min，提取液濾過，減壓蒸餾濃縮，濃縮液用氯仿、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取，乙酸乙酯和正丁醇萃取物分別減壓蒸餾濃縮并干燥，得到老鸛草總鞣質(zhì)、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物．上述粉末均取0.1g，分別置于容量瓶(100ml)中溶解并備用．

3 試驗(yàn)方法

3.1 亞硝胺的阻斷合成測(cè)定

在制備好的提取液(1、2、3、4、5、6、7、8、9mL)中分別加入PH=3.0的檸檬酸鈉鹽酸緩沖液25mL和2.5mL的1mmol/L二甲胺，并定容到50mL容量瓶中．一段時(shí)間后用移液管吸取該溶液1.0mL到培養(yǎng)皿中，并加入0.5mL 的0.5%的Na2CO3溶液，之后用365nm的紫外燈照射15min，取出后加1.5mL的1%對(duì)氨基苯磺酸溶液和0.1%的α-萘胺溶液并精確定量到5.0mL，搖勻，分光光度計(jì)來的測(cè)定阻斷率(525nm)．阻斷率公式為：阻斷率=(A0- Ax)/ A0×100%．

3.2 亞硝基的清除測(cè)定

在制備好的提取液(1、2、3、4、5、6、7、8、9mL)中分別加入PH=3.0的檸檬酸鈉鹽酸緩沖液25mL和5mL 的100mg/kg的NaNO2溶液，并定容到50ml容量瓶中，定容至刻度(蒸餾水)，一段時(shí)間后用移液管吸取該溶液1.0mL到培養(yǎng)皿中，并加入2mL 的0.4%的對(duì)氨基苯磺酸溶液和2mL的N-1-萘乙二胺鹽酸鹽溶液，搖勻，分光光度計(jì)來的測(cè)定清除率(540nm)．清除率公式為：清除率=(A0- Ax)/A0×100%．

4 結(jié)果與分析

4.1 老鸛草各部位提取物對(duì)NDMA合成阻斷作用的濃度效應(yīng)

不同濃度老鸛草總鞣質(zhì)、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物對(duì)NDMA合成的阻斷作用結(jié)果見表1．

4.2 老鸛草各部位提取物對(duì)NaNO2清除作用的濃度效應(yīng)

不同濃度老鸛草總鞣質(zhì)、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物對(duì)NaNO2清除作用的濃度效應(yīng)結(jié)果見表2．

表1 老鸛草各部位提取物對(duì)亞硝酸合成的阻斷率

表2 老鸛草各部位提取物對(duì)亞硝酸鈉的清除率

4.3 結(jié)論

由表1可知，隨著老鸛草總鞣質(zhì)、乙酸乙酯和正丁醇萃取物取樣量增加，其阻斷率的突變量也隨之增大，依次分別由34.36%、55.34%、45.68%躍遷到58.17%、68.07%、59.98%．當(dāng)取樣量達(dá)到5ml時(shí)，阻斷率提高緩慢，老鸛草總鞣質(zhì)及正丁醇萃取物的峰值出現(xiàn)在取樣量7ml處，最大阻斷率分別達(dá)到88.34%、90.57%．乙酸乙酯萃取物值出現(xiàn)在取樣量8ml處，最大阻斷率甚至達(dá)到95.97%．當(dāng)老鸛草總鞣質(zhì)及正丁醇萃取物的取樣量超過7ml，乙酸乙酯萃取物超過一定量時(shí)，N-亞硝基化合物的合成阻斷率會(huì)發(fā)生變化，變化趨勢(shì)下降．原因在于老鸛草中的黃酮化合物濃度過高時(shí)，易發(fā)生氧化從而聚合，因此良好的抑制作用應(yīng)該是適量的提取物．在同一濃度下，阻斷率：乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物>總鞣質(zhì)．

由表2可知，老鸛草總鞣質(zhì)、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物最大清除率依次分別為73.98%、92.98%、80.55%，隨著老鸛草總鞣質(zhì)、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物的取樣量增加時(shí)，對(duì)亞硝酸的清除率與對(duì)NDMA合成的阻斷率一樣呈下降趨勢(shì)，分析原因相同．在同一濃度下，其清除率：乙酸乙酯萃取物>正丁醇萃取物>總鞣質(zhì)．

在體外模擬胃液的條件下，老鸛草鞣質(zhì)的總鞣質(zhì)、乙酸乙酯和正丁醇萃取物對(duì)亞硝胺和亞硝酸鹽的合成、清除效果顯著，阻斷率依次為88.34%、95.97%、90.57%，清除率依次為73.98%、92.98%、80.55%．

參考文獻(xiàn)：

[1]曾瑤池,胡敏予.食物中N-亞硝基化合物與腫瘤關(guān)系的研究進(jìn)展[J].中華腫瘤防治雜志，2008,15(2):151-155.

[2]朱雨霏.亞硝胺類化合物的致癌作用及預(yù)防[J].環(huán)境保護(hù)與循環(huán)經(jīng)濟(jì),2008:34-45.