四黃降糖顆粒對(duì)胰島素抵抗模型大鼠降糖作用的研究

王永剛 ，尤金枝 ，尚俊平 ，齊 婧 ，于遠(yuǎn)望 ，鄭 剛 ，楊景鋒

（1.陜西中醫(yī)學(xué)院心腦血管病研究所，陜西 咸陽 712000；2.陜西中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院心腦血管病中心，陜西 咸陽 712000；3.陜西中醫(yī)學(xué)院2011級(jí)碩士研究生班，陜西 咸陽 712000；4.陜西中醫(yī)學(xué)院2009級(jí)碩士研究生班，陜西 咸陽 712000）

四黃降糖顆粒對(duì)胰島素抵抗模型大鼠降糖作用的研究

王永剛1，2，尤金枝3，尚俊平1，2，齊 婧4，于遠(yuǎn)望1，鄭 剛1，2，楊景鋒1

（1.陜西中醫(yī)學(xué)院心腦血管病研究所，陜西 咸陽 712000；2.陜西中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院心腦血管病中心，陜西 咸陽 712000；3.陜西中醫(yī)學(xué)院2011級(jí)碩士研究生班，陜西 咸陽 712000；4.陜西中醫(yī)學(xué)院2009級(jí)碩士研究生班，陜西 咸陽 712000）

目的 研究四黃降糖顆粒（Si-haung Hypoglycemic Granule，SHHG）對(duì)胰島素抵抗模型大鼠的降糖作用。方法 采用高脂飼料加地塞米松法建立實(shí)驗(yàn)性胰島素抵抗大鼠模型，觀察灌胃給藥1個(gè)月后大鼠血中的胰島素（Ins）和葡萄糖水平（FBG），以及血清甘油三酯(TG)、血漿總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）、C 反應(yīng)蛋白（CRP）變化。 結(jié)果 與正常組比較，模型組 Ins、FBG、CRP、TG、TC、LDL-C 均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;與模型組比較，羅格列酮組、SHHG 組 Ins、FBG、CRP、TG、TC、LDL 均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。羅格列酮組與SHHG組比較無顯著性差異（P＞0.05）。結(jié)論 四黃降糖顆粒能明顯降低Ins、FBG、hs-CRP、TG、TC、LDL-C的水平，具有一定的增強(qiáng)胰島素敏感性和改善胰島素抵抗的作用。

胰島素抵抗；四黃降糖顆粒；降糖作用；大鼠；黃芪；生地黃；大黃；黃連

2型糖尿病是胰島素分泌相對(duì)不足或靶器官對(duì)胰島素敏感性降低而引起的以高血糖為主要表現(xiàn)的代謝紊亂性疾病[1-2]。前期研究表明，2型糖尿病患者的基本病機(jī)是氣陰兩虛，病理機(jī)制在于毒瘀交阻，并始終貫穿于本病的全過程。我們?cè)谂R床上觀察了四黃降糖顆粒治療2型糖尿病患者的臨床療效，能夠明顯改善患者的臨床表現(xiàn)并具有輔助降糖作用[3]。基于此，本文旨在探討四黃降糖顆粒對(duì)胰島素抵抗模型大鼠的降糖作用機(jī)制。現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物與飼養(yǎng)環(huán)境 清潔級(jí)雄性Wistar大鼠，體質(zhì)量（120±15）g，共40只，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物合格證號(hào)：scxk(軍)002-005。大鼠飼養(yǎng)于懸吊式不銹鋼籠具中，以標(biāo)準(zhǔn)大鼠塊飼料喂養(yǎng)1周，室溫保持在18～28℃，相對(duì)濕度40%～70%，12 h/d光照，維持晝夜循環(huán)，飼養(yǎng)籠具、墊料、飼料、飲水均按清潔級(jí)試驗(yàn)動(dòng)物的要求消毒。

1.1.2 藥物 四黃降糖顆粒由黃芪、生地黃、黃連、大黃、鬼箭羽組成（質(zhì)量比例為 2∶2∶1∶0.5∶2），由陜西中醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院藥劑科中藥制劑室生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：ZY20090509。每包6 g（浸膏與生藥比例為1 g干浸膏含生藥量10.6 g）。地塞米松（天津天藥藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：20080523）。羅格列酮片（Rosiglitazone Hydrochloride）（成都恒瑞制藥有限公司，批號(hào)：20090509）。

1.1.3 試劑 大鼠胰島素(INS)ELISA試劑盒、血糖(GLU)ELISA試劑盒、超敏C反應(yīng) (hs-CRP)ELISA試劑盒 （批號(hào)：20090302）、TG檢測(cè)試劑盒 （批號(hào)：20090305）、TC 檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20090215）、LDLC檢測(cè)試劑盒 （批號(hào)：20090222）、HDL-C檢測(cè)試劑盒（批號(hào)：20090208），均由上海生研生物科技有限公司提供。

1.1.4 儀器 日立7180全自動(dòng)生化分析儀，日本日立公司；FT-630G微機(jī)多探頭放免儀，北京核儀器廠生產(chǎn)；標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀，美國(guó)SunriseF03900A酶標(biāo)儀。

1.2 方法

1.2.1 模型制備 高脂飼料以標(biāo)準(zhǔn)大鼠塊飼料加膽固醇2%，豬油10%，膽酸鈉0.2%，甲基硫氧嘧啶0.2%充分混勻，制成高脂飼料，食品加工機(jī)成形，烤熟備用。適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后進(jìn)行隨機(jī)分組，分為正常組(n=9)和造模組(n=31)；全部大鼠用基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)2周后，造模組采用高脂飼料喂養(yǎng)5周，同時(shí)予地塞米松(DEX)隔日腹腔注射（1mg/kg）建立實(shí)驗(yàn)性胰島素抵抗大鼠模型[4]。以造模大鼠空腹血糖值與空腹血胰島素值乘積的倒數(shù)取其數(shù)計(jì)算胰島素敏感性指標(biāo)，以此指標(biāo)降低20%為造模成功。

1.2.2 動(dòng)物分組及給藥方法 篩選造模成功大鼠25只，隨機(jī)分為模型組9只、SHHG組8只和陽性藥（羅格列酮）對(duì)照組8只。SHHG組按4 g/kg，每日2次，灌胃給藥，連續(xù)給藥1月。羅格列酮組按2.5mg/kg灌胃，每日2次，連續(xù)給藥1月；模型組、正常組以等容積蒸餾水給大鼠灌胃，每日2次，連續(xù)給藥1月。所有大鼠給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

1.2.3 樣本采集與檢測(cè)方法 末次灌胃后禁食12 h，戊巴比妥鈉（50mg/kg體質(zhì)量）腹腔內(nèi)注射麻醉，經(jīng)腹主動(dòng)脈取血3 mL，30min內(nèi)分離血清，置-20℃冰箱保存，2周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。血糖測(cè)定用葡萄糖氧化酶法；胰島素測(cè)定采用放射免疫測(cè)定法；TG、TC、HDL-C、LDL-C 和 CRP 等其他試劑均嚴(yán)格按說明書進(jìn)行測(cè)定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 四黃降糖顆粒對(duì)大鼠血清Ins、FBG和hs-CRP變化的影響

與正常組比較，模型組大鼠血清Ins、FBG、hs-CRP均明顯升高具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，羅格列酮組與SHHG組的大鼠血清Ins、FBG、hs-CRP均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。羅格列酮組與SHHG組比較無明顯差異（P＞0.05）。說明四黃降糖顆粒能夠降低胰島素抵抗模型大鼠的胰島素及血糖水平，改善hs-CRP水平，與羅格列酮相似。結(jié)果見表1。

表1 四黃降糖顆粒對(duì)大鼠血清胰島素、血糖和C反應(yīng)蛋白的影響 （）

表1 四黃降糖顆粒對(duì)大鼠血清胰島素、血糖和C反應(yīng)蛋白的影響 （）

注：與正常組比較*P<0.05；與模型組比較#P<0.05。

組 別正常組模型組羅格列酮組SHHG組n 9988劑量(mg/kg)— —2.54000 Ins(mu/L)13.78±3.4721.77±10.31*14.31±5.39#15.52±7.82#FBG(mmol/L)6.19±1.2127.35±1.28*20.28±0.96#21.11±1.58#hs-CRP(mg/L)2.41±3.0210.31±0.80*3.07±4.47#2.39±3.40#

2.2 四黃降糖顆粒對(duì)大鼠血脂變化的影響

與正常組比較，模型組TG、TC、LDL-C均明顯升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。與模型組比較，羅格列酮組與SHHG組TG、TC、LDL均明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。羅格列酮組與SHHG組比較無明顯差異（P＞0.05）。說明四黃降糖顆粒能明顯改善胰島素抵抗模型大鼠脂代謝水平，與羅格列酮相似。結(jié)果見表2。

表2 四黃降糖顆粒對(duì)大鼠血脂的影響 （，mmol/L）

表2 四黃降糖顆粒對(duì)大鼠血脂的影響 （，mmol/L）

注：與正常組比較*P<0.05；與模型組比較#P<0.05。

n 9988劑量(mg/kg)——2.54000 TC 1.32±0.205.21±0.43*1.98±0.41#2.12±0.32#TG 2.79±0.605.41±0.79*0.78±0.82#0.94±0.73#LDL-C 0.38±0.102.21±0.21*0.83±0.19#0.68±0.16#HDL-C 0.41±0.510.82±0.550.69±0.530.77±0.50組 別正常組模型組羅格列酮組SHHG組

3 討論

胰島素抵抗與β細(xì)胞功能缺陷是2型糖尿病患者主要的生理病理學(xué)特征，胰島素抵抗也是導(dǎo)致糖尿病及其合并癥的重要原因[1-2]。胰島素抵抗的發(fā)生與多種因素相關(guān)，其中脂肪組織與胰島素抵抗的發(fā)生關(guān)系密切，脂肪含量增多、分解加速，血中游離脂肪酸含量增加，抑制胰島素介導(dǎo)的糖原分解下降，最終導(dǎo)致糖尿病的發(fā)生。臨床研究提示，2型糖尿病常伴有多種炎癥因子的濃度升高，炎癥標(biāo)記物能夠預(yù)測(cè)2型糖尿病的發(fā)生，Leinonnen等通過試驗(yàn)證明2型糖尿病患者的CRP、白介素-6等炎癥因子水平較正常對(duì)照組明顯升高[5]。

目前臨床治療糖尿病常用的藥物有黃酰脲類、雙胍類等，雖然都有一定的降糖作用，但難以控制并發(fā)癥及胰島素抵抗，甚至具有嚴(yán)重的肝腎毒副作用。中醫(yī)藥具有相對(duì)安全、毒副作用小等特點(diǎn)，顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。四黃降糖顆粒以益氣的黃芪和養(yǎng)陰生地黃為君藥，以活血化瘀兼有清熱解毒的大黃為臣藥，佐以清熱解毒的黃連和鬼箭羽，具有益氣養(yǎng)陰、活血化瘀、清熱解毒的功效?，F(xiàn)代研究表明，黃芪具有一定的調(diào)節(jié)血糖代謝的作用[6]，可通過增加組織對(duì)葡萄糖的攝取和利用來介導(dǎo)的，黃芪多糖能夠減少KKAy糖尿病小鼠模型的肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激并恢復(fù)葡萄糖穩(wěn)態(tài)，增強(qiáng)糖尿病大鼠骨骼肌組織對(duì)胰島素的敏感性、提高PKB/Akt活性和葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白4轉(zhuǎn)位[7-8]。張瑞雪等研究地黃中活性成分地黃低聚糖，對(duì)四氧嘧啶誘導(dǎo)的糖尿病小鼠具有良好的降血糖作用[9]。成細(xì)華等研究生地黃為主藥組成的左歸降糖舒心方的降血糖作用表明，主要是通過間接改善脂代謝和炎癥反應(yīng)而起作用，直接作用目前尚不清楚[10]。黎磊石等對(duì)大黃的活性成分大黃酸進(jìn)行研究，結(jié)果表明其能逆轉(zhuǎn)胰島素抵抗，與胰島素增敏劑羅格列酮類似[11]，與辛伐他汀比較是一種兼有降脂作用的降糖藥物，對(duì)多個(gè)降糖環(huán)節(jié)具有調(diào)節(jié)作用[12]，而陳志強(qiáng)等研究發(fā)現(xiàn)活性成分脫氧土大黃苷也對(duì)2型糖尿病大鼠具有很好的降糖作用[13]。陳其明等在上世紀(jì)80年代就報(bào)道了黃連及其黃連素具有一定的降糖作用。最新的研究表明，黃連素和黃連總堿的降糖作用在于不是通過胰島素的分泌和釋放，而是通過受體后效應(yīng)增加胰島素敏感性[14-16]。趙蒙蒙等通過研究表明，鬼箭羽在能降低血糖的同時(shí)，對(duì)胰島β細(xì)胞具有一定的保護(hù)作用[17]。綜上所述，四黃降糖顆粒及其含中藥均具有一定的降血糖作用，能夠增加胰島素敏感性。

本實(shí)驗(yàn)通過觀察四黃降糖顆粒對(duì)2型糖尿病胰島素抵抗模型大鼠的降糖作用，進(jìn)一步驗(yàn)證了四黃降糖顆粒主要是通過間接改善脂代謝和炎癥反應(yīng)而起到降低血糖的作用，提示本藥具有增強(qiáng)胰島素敏感性和改善胰島素抵抗的作用，與胰島素增敏劑羅格列酮類似，值得進(jìn)一步研究，其直接作用機(jī)制尚不明確，為臨床應(yīng)用提供了初步的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

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Hypoglycemic effects of the Sihuang Gypoglycemic Granule(SHHG)on the rat model of insulin resistance

WANG Yong-gang1,2,YOU Jin-zhi3,SHANG Jun-ping1,2,QI Jing4,YU Yuan-wang1,ZHENG Gang1,2,YANG Jing-feng1
(1.Institute of Cardio-Cerebrovascular Diseases,Shanxi University of Chinese Medicine,Xianyang，Shanxi 712000,China;2.Center of Cardio-Cerebrovascular Diseases,Second Affiliated Hospital,Shanxi University of Chinese Medicine,Xianyang,Shanxi 712000,China;3.Master of 2011,Shanxi University of Chinese Medicine,Xianyang,Shanxi 712000,China;4.Master of 2009,Shanxi University of Chinese Medicine,Xianyang,Shanxi 712000,China)

insulin resistance;Sihuang Hypoglycemic Granule(SHHG);hypoglycemic effect;rat;Astragalus;Rehmannia glutinosa;Rhubarb;Coptis chinensis

R285.5

A

10.3969/j.issn.1674－070X.2012.11.004.016.03

〔Absrract〕Objective To study the hypoglycemic effects of the Sihaung Hypoglycemic Granule(SHHG)on rat model of insulin resistance.Methods The diabetic rat model was established by feeding high fat diet for a certain duration and intraperitoneal injection with Dexamethasone(DEX)(1mg/kg)every other day.The fast blood glucose，total cholesterol(TC),low-density lipoprotein cholesterol(LDL-C),high-density lipoprotein cholesterol(HDL-C),C-reactive protein(hs-CRP)and insulin content in bloods of these rats were evaluated after gastric lavaged with medicine for one month.Results Compared with control group,the contents of Ins,FBG,TG,TC,LDL-C andCRP in model group were significantly reduced(P<0.05).Compared with model group,the contents of Ins,FBG,TG,TC,LDL-C and CRP in SHHG group and rosiglitazone hydrochloride group were significantly reduced(P<0.05).But there were no significant difference between them.Conclusion SHHG can significantly reduce the contents of Ins,FBG,TG,TC,LDL-C and CRP,and enhance the sensitivity to insulin and improve insulin resistance.

2012－06－25

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目 （30973830，30901895）；陜西省教育廳項(xiàng)目 （09JK408）；陜西省 “13115”科技創(chuàng)新工程重大科技專項(xiàng)（2009ZDKG-78）；陜西省第五批重點(diǎn)?？菩哪X血管病科和陜西省第六批重點(diǎn)?？铺悄虿】瀑Y助項(xiàng)目。

王永剛（1977-），男，陜西合陽人，在讀博士研究生，副主任醫(yī)師，從事中西醫(yī)結(jié)合防治心腦血管病的研究。

（本文編輯 彭芝配）