羊角拗根脂溶性成分的GC-MS分析

晏小霞，李曉霞，張新蕊，王茂媛，王祝年

中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所農(nóng)業(yè)部華南作物基因資源與種質(zhì)創(chuàng)制重點實驗室，儋州571737

羊角拗［Strophanthus Divaricatus(Loureiro) Hooker et Arnott］為夾竹桃科(Apocynaceae)羊角拗屬(Strophanthus de Candolle)植物，在我國主要分布于海南、福建、廣東、廣西、貴州等地［1］。羊角拗為傳統(tǒng)民間草藥，其根、莖、葉、種子、花均可入藥［2］，具有強(qiáng)心、消腫、利尿、鎮(zhèn)靜、止痛、止癢、殺蟲等功效，用于治療風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛、小兒麻痹后遺癥、多發(fā)性膿腫、腱鞘炎、皮癬、毒蛇咬傷、跌打、骨折、乳癰、心力衰竭等癥［3］;其莖、葉民間也常用作殺蟲劑。

羊角拗全株均有毒，其毒性成分主要為強(qiáng)心苷。目前已分離鑒定了羊角拗苷、羊角拗異苷、夾竹桃糖苷、洋地黃糖苷、鈴蘭新苷、塔洛糖苷、鼠李糖苷、考多苷、考多異苷、毒毛旋花苷等20多種強(qiáng)心苷［4-8］。我國的羊角拗資源較為豐富，為有效開發(fā)羊角拗資源，尋找其中有藥用價值的生物活性成分，筆者采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)的方法對羊角拗根的脂溶性成分進(jìn)行分析。

1 材料與方法

1.1 材料

羊角拗根于2009年8月份采自海南省臨高縣和舍鎮(zhèn)，經(jīng)中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所王祝年研究員鑒定為夾竹桃科羊角拗屬植物羊角拗［Strophanthus Divaricatus(Loureiro)Hooker et Arnott］，憑證標(biāo)本(20090820)存放于中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所。

1.2 方法

1.2.1 脂溶性成分提取方法

取自然風(fēng)干羊角拗根粉碎后用95%乙醇室溫浸提3次，減壓回收乙醇至無醇味。將乙醇提取物分散于水中成懸濁液，經(jīng)石油醚萃取后減壓濃縮得到黑色油狀提取物備用。

1.2.2 GC-MS分析

試驗用毛細(xì)管氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(HP6890/ 5975C GC/MS聯(lián)用儀，美國安捷倫公司)對脂溶性成分進(jìn)行分析。

氣相色譜條件:色譜柱為Zebron ZB-5MSI，5% Phenyl-95%DiMethylpolysiloxane(30 m×0.25 mm ×0.25 μm)彈性石英毛細(xì)管柱，柱溫45℃(保留2 min)，以5℃/min升溫至320℃，保持2 min;汽化室溫度250℃;載氣為高純He(99.999%);柱前壓7.62 psi，載氣流量1.0 mL/min;進(jìn)樣量1 μL;分流比40∶1，溶劑延遲時間4 min。

質(zhì)譜條件:離子源為EI源;離子源溫度230℃;四極桿溫度150℃;電子能量70 eV;發(fā)射電流34.6 μA;倍增器電壓1108 V;接口溫度280℃;質(zhì)量范圍20～450 amu。

2 結(jié)果與分析

按上述條件對羊角拗根的脂溶性成分進(jìn)行GCMS分析，離子流程圖見圖1。通過HPMSD化學(xué)工作站，結(jié)合NIST05質(zhì)譜圖庫和WILEY275質(zhì)譜圖庫進(jìn)行鑒定，確認(rèn)了其中 27種成分，占總含量的60.86%。按峰面積歸一化法計算出各化學(xué)成分的相對含量，結(jié)果見表1。

圖1 羊角拗根脂溶性成分總離子流圖Fig.1 Total ion chromatogram of the liposoluble components from roots of Strophanthus Divaricatus

表1 羊角拗根脂溶性成分的GC-MS分析結(jié)果Table 1 Chemical constituents of the liposoluble components from roots of Strophanthus Divaricatus

2 3 4 0.4 3 麥角甾-5 -稀醇E r g o s t -5 -e n o l C 2 8 H 48 O 4 0 0 0.5 8 0 2 4 4 0.8 4 豆甾醇S t i g m a s t e r o l C 29 H 48 O 4 1 2 2.5 0 3 2 5 4 1.5 5 蒲公英賽酮T a r a x e r o n e C 30 H 48 O 4 2 4 2.8 4 4 2 6 4 2.6 8 α -香樹脂醇α -A m y r i n C 30 H 50 O 4 2 6 1.3 0 6 2 7 4 3.7 9 何帕-2 2 ( 2 9 ) -烯-3 β -醇H o p -2 2 ( 2 9 ) -e n -3 β -o l C 30 H 50 O 4 2 6 3 2.7 0 1

從表1可見，羊角拗脂溶性成分主要為三萜類，占總峰面積量的36.85%，此外還有酯類(9.02%)、脂肪酸(4.43%)、甾體(3.49%)等成分。在已鑒定的27個化學(xué)成分中，相對含量大于1%的有10個，其中含量較高的成分依次為何帕-22(29)-烯-3β-醇(32.70%)、棕櫚酸乙酯(6.35%)、2-十五烷酮(4.76%)、蒲公英賽酮(2.84%)、豆甾醇(2.50%)、棕櫚酸(2.08%)。

3 討論與結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)，在羊角拗根脂溶性成分中何帕-22 (29)-烯-3β-醇含量最高，占總量的32.70%。何帕烷三萜類化合物廣泛存在于細(xì)菌中，在真菌以及高等植物中也能發(fā)現(xiàn)此類化合物的蹤跡。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌源的何帕烷三萜類化合物對細(xì)胞膜的穩(wěn)定具有重要作用［9］，而植物源的何帕烷三萜類化合物作用研究較少。本研究發(fā)現(xiàn)羊角拗中何帕-22(29)-烯-3β-醇含量較高，為下一步研究提供了新的方向。

棕櫚酸具有特殊香氣和滋味，按我國GB2760-89規(guī)定，可用于配制各種食用香料，也用作消泡劑和其他食品添加劑的原料。棕櫚酸異丙酯、棕櫚酸異辛酯具有與皮膚相容性好、滋潤皮膚、滲透力強(qiáng)等優(yōu)點，被廣泛應(yīng)用于人體各種護(hù)膚品中［10］。此外，棕櫚酸還具有抗腫瘤、抗衰老活性［11，12］。羊角拗根脂溶性成分中棕櫚酸及其酯類含量較高(8.43%)，可以開發(fā)作為提取棕櫚酸的原料。

蒲公英賽酮廣泛存在于多個科屬的植物中，具有抗癌、消炎［13］、殺蟲［14］等活性，具有廣闊的開發(fā)前景。本研究發(fā)現(xiàn)羊角拗根脂溶性成分中含有一定量的(2.84%)蒲公英賽酮，為深入研究羊角拗在抗癌、抗病毒以及殺蟲、抑菌等方面的活性提供了理論依據(jù)。

本研究運用GC-MS的方法，對羊角拗根脂溶性成分進(jìn)行了分析，共鑒定出27個化合物，占其總量的60.86%，對其未鑒定出的成分有待進(jìn)行進(jìn)一步研究。

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