不同硒源及水平對肉雞組織硒含量及抗氧化功能的影響

田金可 Ahmad Hussain 李 偉 高 尚 王 恬

(南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，南京 210095)

硒作為谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的重要組分，是機體中一種必需的微量元素，它在細(xì)胞中的抗氧化作用類似于維生素E［1］。此外，硒在機體內(nèi)還參與細(xì)胞和體液免疫及內(nèi)分泌激素的調(diào)節(jié)［2］。在現(xiàn)代養(yǎng)殖業(yè)中，動物補硒一直使用的是價格低廉的無機硒源［以亞硒酸鈉(SS)為主］。但是它的生物利用率較低，毒性較大，而且動物排泄的硒易造成土壤和環(huán)境的污染［3］。甚至諸多報道認(rèn)為，無機硒可能有過氧化特性［4-5］。因此，生物利用率更高、毒性更小的有機硒的應(yīng)用受到了越來越多的關(guān)注。酵母硒(SY)就是其中一種，早在2001年就被美國食品和藥物管理局(FDA)批準(zhǔn)用于豬飼糧中。有研究表明，動物飼糧中添加有機硒不但能夠降低硒排泄量，而且能夠增加動物體組織中硒的沉積量［1］。近年來，關(guān)于不同硒源對畜禽生產(chǎn)性能、組織硒沉積量、抗氧化功能及肉品質(zhì)影響的報道較多，然而對不同硒源的比較應(yīng)用效果的研究較少。為此，本試驗旨在研究并比較肉雞飼糧中添加不同硒源(亞硒酸鈉和酵母硒)及水平對機體組織硒含量和抗氧化功能的影響，并探討較低水平的有機硒替代無機硒的可行性。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

亞硒酸鈉(分析純)，硒含量為45.5%，天津市化學(xué)試劑研究所產(chǎn)品;酵母硒，硒含量為1 000 mg/kg，武漢新華揚生物股份有限公司提供。

AFS-310雙道原子熒光光度計，北京科創(chuàng)海光儀器有限公司生產(chǎn);全波長酶標(biāo)儀，美國Thermo Scientific公司生產(chǎn);智能樣品處理器，北京萊伯泰科儀器有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗設(shè)計與飼糧配制

選用1日齡健康、體重相近(P＞0.05)的愛拔益加(AA)肉仔雞600只，按單因子完全隨機設(shè)計分為5組，每組6個重復(fù)，每個重復(fù)20只雞。對照組(Cont):飼喂基礎(chǔ)飼糧(不添加硒，測得硒含量為0.11 mg/kg);試驗1組(SS組):飼喂基礎(chǔ)飼糧+0.30 mg/kg硒(以亞硒酸鈉形式);試驗2組(SYⅠ組):飼喂基礎(chǔ)飼糧+0.20 mg/kg硒(以酵母硒形式);試驗3組(SYⅡ組):飼喂基礎(chǔ)飼糧+0.30 mg/kg硒(以酵母硒形式);試驗 4組(MS組):飼喂基礎(chǔ)飼糧 +0.30 mg/kg混合硒(0.15 mg/kg亞硒酸鈉 +0.15 mg/kg 酵母硒)。試驗期42 d，期間共進行2次稱重(21和42 d)，稱重前1天18:00斷料(不斷水)，第2天06:00空腹稱重和結(jié)料，分別計算平均日采食量(ADFI)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

基礎(chǔ)飼糧參照NRC(1994)標(biāo)準(zhǔn)配制，其組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets(air-dry basis) %

每千克飼糧提供 One kilogram of the diets contained the following:Fe 60 mg，Cu 7.5 mg，Zn 65 mg，Mn 110 mg，I 1.1 mg，桿菌肽鋅 bacitracin zinc 30 mg，VA 4 500 IU，VD31 000 IU，VE 30 IU，VK 1.3 mg，VB12.2 mg，VB210 mg，VB310 mg，氯化膽堿 choline chloride 400 mg，VB550 mg，VB64 mg，生物素 biotin 0.04 mg，VB111 mg，VB121.013 mg。

1.3 飼養(yǎng)管理

飼養(yǎng)試驗在南京康欣禽業(yè)有限公司進行。試驗前對雛舍及器具進行沖洗和燒堿水噴霧消毒，福爾馬林和高錳酸鉀(每立方米加30 mL福爾馬林、15 g高錳酸鉀)熏蒸12 h，凈化1周后開始試驗。試驗雞采用籠養(yǎng)，自由采食和飲水，喂料遵循少喂勤添的原則。1～14 d溫度控制在32～34℃，以后每周下調(diào)2℃，直至26℃。12 h光照周期(06:00—18:00光照)。

1.4 樣品的采集與制備

分別于試驗第21天和第42天06:00(此前停飼12 h，自由飲水)每個重復(fù)隨機抽取1只雞，稱重后頸靜脈采血，收集于加有肝素鈉的試管中，4℃、3 500 r/min離心10 min制備血漿，-20℃保存?zhèn)溆谩Ａ⒓磳㈦u只放血致死(注意要放血完全)，迅速剖開腹腔取出肝臟，剝離胸肌，裝入自封袋中。將肝臟和胸肌制成10%的組織勻漿液，于-20℃冰箱保存。

1.5 測定指標(biāo)及方法

1.5.1 抗氧化功能指標(biāo)的測定

血漿和肝臟中GSH-Px活性測定采用二硫代硝基苯甲酸法;總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性測定采用黃嘌呤氧化酶法;總抗氧化能力(T-AOC)測定采用菲啉比色法;過氧化氫酶(CAT)活性測定采用鉬酸銨比色法;丙二醛(MDA)含量測定采用硫代巴比妥比色法。上述指標(biāo)的測定均采用商業(yè)化的試劑盒(南京建成生物工程研究所提供)，操作按試劑盒說明書進行。

1.5.2 組織硒含量的測定

參照GB/T 13883—2008的方法處理樣品并定容，同時分別用超純水和硒標(biāo)準(zhǔn)液做空白對照和標(biāo)準(zhǔn)參照物對照，利用氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測定飼糧、血漿、肝臟、肌肉中硒含量。

1.6 數(shù)據(jù)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示。用one-way ANOVA比較各組間的差異。采用最小顯著極差法(LSD)對差異顯著的數(shù)據(jù)進行多重比較。

2 結(jié)果

2.1 不同硒源及水平對肉雞生長性能的影響

從表2可以看出，與對照組相比，飼糧添加0.30 mg/kg的有機硒(SYⅡ組)顯著降低了肉雞前期(1～21 d)的ADFI(P＜0.05);較對照組及無機硒組(SS組)，飼糧添加各水平有機硒(SYⅠ、SYⅡ和MS組)均顯著降低了全期(1～42 d)的ADFI(P ＜0.05或 P ＜0.01);同時，各添加有機硒組后期(22～42 d)的ADFI也有降低趨勢(P＞0.05)。雖各試驗組肉雞的ADG及F/G均無顯著變化(P＞0.05)，但F/G均在一定程度上低于對照組;其中，前期SS組和SYⅡ組、后期及全期SYⅠ組和MS組的F/G均較低。

2.2 不同硒源及水平對肉雞組織硒含量的影響

就前期而言，與對照組相比，SYⅠ組和SYⅡ組肉雞血漿中的硒含量均顯著提高(P＜0.05)，SYⅠ組肉雞肝臟中的硒含量顯著提高(P＜0.05);較對照組與SS組，MS組、SYⅠ組和SYⅡ組肉雞胸肌中的硒含量分別提高了107.69%、123.08%和176.92%(P ＜0.01);而較 SYⅠ組與MS組，SYⅡ組肉雞胸肌中的硒含量也顯著提高了(P＜0.01)。在試驗后期，與對照組、SS組和MS組相比，SYⅠ組和SYⅡ組肉雞血漿中的硒含量均顯著提高(P＜0.01或P＜0.05);較對照組和 SS組，MS組、SYⅠ組和SYⅡ組肉雞肝臟中的硒含量也顯著提高(P＜0.01或 P＜0.05);后期胸肌中硒含量的變化規(guī)律與前期一致，較對照組和SS組，MS組、SYⅠ組和SYⅡ組肉雞胸肌中的硒含量均顯著提高(P＜0.01)，且3組中SYⅡ組含量最高。然而，與對照組相比，飼糧中添加0.30 mg/kg的無機硒均未顯著影響各組織的硒含量(P＞0.05)。

2.3 不同硒源及水平對肉雞抗氧化功能的影響

由表4可以看出，就前期而言，與對照組相比，SS組和SYⅠ組肉雞肝臟T-SOD的活性顯著提高(P＜0.01);SYⅡ組肉雞血漿GSH-Px的活性及肝臟T-SOD的活性提高也達到了顯著水平(P＜0.05);而MS組的各抗氧化指標(biāo)均無顯著變化(P＞0.05)。同樣在前期，與SS組相比，SYⅠ組肉雞血漿T-SOD的活性顯著提高(P＜0.05);SYⅡ組肉雞血漿T-SOD和GSH-Px的活性均顯著提高(P＜0.05);MS組肉雞血漿GSH-Px的活性顯著提高(P＜0.05)，但肝臟T-SOD的活性卻顯著降低了(P＜0.05)。在試驗后期，較對照組，SS組肉雞血漿及肝臟GSH-Px的活性均顯著提高(P＜0.01或P＜0.05);SYⅠ組肉雞血漿及肝臟GSHPx的活性也均顯著提高(P＜0.01)，血漿MDA的含量顯著降低(P＜0.05);SYⅡ組肉雞血漿及肝臟GSH-Px的活性均顯著提高(P＜0.05或 P＜0.01)，血漿MDA的含量也顯著降低(P＜0.05);而MS組肉雞肝臟 GSH-Px(P＜0.01)和 CAT(P＜0.05)的活性也均顯著提高，血漿MDA的含量顯著降低(P＜0.01)。而與SS組相比，僅 MS組肉雞血漿MDA含量顯著降低(P＜0.05)。與MS組相比，SYⅠ組肉雞血漿GSH-Px的活性也顯著提高(P ＜0.05)。

表2 不同硒源及水平對肉雞生長性能的影響Table 2 Effects of different selenium sources and levels on growth performance of broilers

表3 不同硒源及水平對肉雞組織硒含量的影響Table 3 Effects of different selenium sources and levels on selenium content in tissue of broilers

3 討論

3.1 不同硒源及水平對肉雞生長性能的影響

本研究發(fā)現(xiàn)，添加有機硒顯著降低了全期肉雞ADFI，而各試驗組對ADG及F/G均未產(chǎn)生顯著影響，表明添加有機硒在一定程度上可以節(jié)約飼料量，降低生產(chǎn)成本。關(guān)于硒能改善肉雞生長性能的報道，多見于改善其F/G。Wang等［6］研究發(fā)現(xiàn)，添加0.2 mg/kg的無機硒或酵母硒均顯著降低了肉雞的F/G;也有報道認(rèn)為有機硒不但能顯著降低F/G，還能顯著提高肉雞的體重［7］;夏枚生等［8］也報道，飼糧添加 0.4 ～1.0 mg/kg 硒(納米硒、亞硒酸鈉)時，納米硒組肉雞生長性能顯著高于亞硒酸鈉組。然而，也有諸多研究認(rèn)為，飼糧添加不同硒源均未對肉雞的生長性能產(chǎn)生顯著影響［9-10］。這也可能是由試驗動物、試驗條件等不同造成的。

表4 不同硒源及水平對肉雞抗氧化功能的影響Table 4 Effects of different selenium sources and levels on antioxidant capacity of broilers

3.2 不同硒源及水平對肉雞組織硒含量的影響

本試驗中，飼糧添加有機硒不同程度地提高了各組織硒含量，而無機硒則沒有這樣的效果。Wang 等［9］在羅斯肉雞飼糧中添加 0.15 mg/kg 的無機硒或硒代蛋氨酸，結(jié)果表明，較無機硒，有機硒顯著提高了肉雞血清、肝臟及胸肌中的硒含量。?evcˇíková 等［11］也報道，與對照組相比，飼糧添加0.3 mg/kg的酵母硒顯著提高了肉雞肝臟和胸肌中的硒含量。在其他動物(育肥豬、羔羊、肉牛)的試驗［12-14］中也得到了類似的結(jié)果。這說明有機硒的生物利用率較無機硒高，而就其機理而言，這應(yīng)該與不同硒源的代謝途徑有關(guān)。有報道認(rèn)為:在無機硒的代謝途徑中，僅有很少量的無機硒結(jié)合入體蛋白中，大多數(shù)未能用于合成硒蛋白的硒則進入腎臟，最終排出體外;而有機硒中的硒與含硫氨基酸類似，在蛋白質(zhì)的合成中硒代氨基酸常常替代含硫氨基酸而結(jié)合入蛋白質(zhì)中，因此有機硒(酵母硒、硒代蛋氨酸等)能增加機體總硒的貯存量，為硒在組織中的貯存提供了一個硒庫，硒以有機的形式貯存［15］。本試驗中添加有機硒極顯著提高了胸肌中的硒含量，這與Pan等［16］在羅曼蛋雞上得到的結(jié)果相類似。有機硒能顯著提高肌肉或雞蛋中硒的含量，這也為提高人類硒的攝入量、改善硒的補充水平提供了可行的措施［17］。

3.3 不同硒源及水平對肉雞抗氧化功能的影響

機體的抗氧化體系由酶促體系和非酶促體系共同組成。酶促抗氧化體系主要包括GSH-Px、谷胱甘肽還原酶(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和CAT等，非酶促抗氧化體系主要有維生素E、胡蘿卜素、維生素C、蛋氨酸和乳鐵蛋白等［18-19］。硒在酶促抗氧化體系中扮演了重要角色，并通過具有酶功能的含硒蛋白、硒核酸等發(fā)揮作用。本試驗結(jié)果顯示，飼糧添加硒對機體的酶促體系發(fā)揮抗氧化功能起到了促進作用。MDA是自由基觸發(fā)脂質(zhì)過氧化物反應(yīng)生成的終產(chǎn)物，它能使含氨基的蛋白質(zhì)、核酸、腦磷脂等失活，其含量可反映機體脂質(zhì)過氧化的程度，間接反映細(xì)胞的受損程度［20］。本試驗中各添加有機硒組肉雞后期血漿MDA的含量顯著降低。Wang等［6］報道，飼糧添加不同硒源(亞硒酸鈉、酵母硒)均顯著提高了肉雞血漿和肝臟GSH-Px的活性，且較添加相同水平的無機硒，各添加有機硒組肉雞的血漿GSH-Px的活性也顯著提高;夏枚生等［8］在嶺南黃肉雞的研究中也發(fā)現(xiàn)納米硒組肉雞全血GSH-Px的活性顯著高于亞硒酸鈉組;這均與本試驗的結(jié)果相一致。Mikulski等［21］報道，較對照組和添加同水平的無機硒組，飼糧添加0.3 mg/kg酵母硒顯著提高了8周齡火雞全血T-SOD的活性，與本試驗結(jié)果也是相符的。Zhan等［12］對育肥豬的試驗研究表明，0.3 mg/kg的不同硒源均顯著提高了豬肝臟和肌肉中GSH-Px的活性，顯著降低了MDA的含量，且有機硒效果更好。在本試驗中，飼糧中添加0.20 mg/kg的酵母硒在提高血漿抗氧化能力方面顯著好于0.30 mg/kg的無機硒，而混合硒在后期對肝臟CAT活性有顯著提高，說明了混合硒改善了肝臟清除過氧化氫等有害自由基的能力。

4 結(jié)論

①飼糧添加有機硒顯著降低了肉雞全期ADFI，改善了肉雞的抗氧化功能;與無機硒相比，有機硒的效果更好。

②飼糧添加各水平有機硒不同程度地提高了肉雞各組織硒含量。

③ 飼糧添加0.20 mg/kg的有機硒替代0.30 mg/kg無機硒，在改善肉雞的生長性能、提高組織硒含量和抗氧化功能方面是可行的。

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