HPLC法測(cè)定蒙藥止吐六味散中甘草酸的含量

那順布和 包同力嘎

(內(nèi)蒙古民族大學(xué)，內(nèi)蒙古通遼028007)

常用蒙藥止吐六味散由甘草、大米、柿子、蔓荊子、小茴香、芫荽果組成的散劑。具有止吐功能;主要用于嘔吐，妊娠嘔吐等病癥。臨床療效良好。收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·蒙藥分冊(cè)》〔1〕。其藥品標(biāo)準(zhǔn)草案仍缺含量測(cè)定項(xiàng)，為補(bǔ)充藥品標(biāo)準(zhǔn)草案，對(duì)君藥甘草以其含有效成分甘草酸為典型，采用高效液相色譜法對(duì)蒙藥止吐六味散進(jìn)行含量測(cè)定研究，為該藥的深入研究提供試驗(yàn)方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 :LC－10AT高效液相色譜儀(日本島津)，SPD—10AVP檢測(cè)器(日本島津)，N3000色譜工作站(浙江大學(xué)智能信息研究所);AUY120電子天平(max2208/82g d=0.1mg/0.01mg，日本島津);KQ －100 型超聲波清洗器(昆山);DiamonsilC18色譜柱(250mm ×4.6mm，5μm，迪馬公司)。

1.2 試藥:蒙藥止吐六味散由內(nèi)蒙古蒙藥股份有限公司(批號(hào)120622)、內(nèi)蒙古庫倫蒙藥廠(批號(hào) 120716)、烏蘭浩特中蒙制藥有限公司(批號(hào)120310)提供。甘草酸單銨鹽對(duì)照品(批號(hào)110731－200615，供含量測(cè)定用)，由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。甲醇為色譜純;水為高純水;其它所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件〔2－6〕:色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(Diamonsil C18 5μm 4.6mm ×250mm);流動(dòng)相:甲醇－0.2mol/L醋酸銨溶液 －冰醋酸(67:33:1);檢測(cè)波長(zhǎng):250nm;流速:1.0ml/min;柱溫:30℃。在該色譜條件下，樣品中甘草酸可達(dá)基線分離，其它成分對(duì)測(cè)定無干擾，理論板數(shù)按甘草酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2000。

2.2 試驗(yàn)溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備:取甘草酸單銨鹽對(duì)照品4.05mg，精密稱定，置10ml量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取0.5ml，置10ml量瓶中，加流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含甘草酸單銨鹽0.2069mg，折合甘草酸0.2025mg)。

2.2.2 供試品溶液的制備:取樣品粉末約1.2g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入流動(dòng)相50ml，超聲處理(功率250W，頻率40KHz)30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2.3 缺甘草陰性對(duì)照品溶液的制備:取缺甘草陰性對(duì)照品粉末約1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，照上述2.2.2項(xiàng)下方法制備，即得。

2.3 線性關(guān)系及其工作范圍的考察:精密吸取甘草酸對(duì)照品溶液 2.5、5.0、7.5、10.0、12.5μ，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積(A)。并以峰面積(Y)對(duì)甘草酸的進(jìn)樣量(X)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:y=37004 x+439.1，相關(guān)系數(shù)r=0.999 8。結(jié)果表明，甘草酸對(duì)照品進(jìn)樣量在0.506 5～3.543 8μ范圍內(nèi)，與峰面積具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)性顯著。

2.4 精密度試驗(yàn):精密吸取同一份供試品溶液10μ，在上述色譜條件下依法重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積積分值。結(jié)果其RSD為1.26%，表明精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn):同一份供試品溶液，分別于0、2、4、6、8、10小時(shí)，精密吸取10μ，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積積分值。結(jié)果其RSD為1.13%，表明供試品溶液在10小時(shí)內(nèi)測(cè)定穩(wěn)定性良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn):精密稱取同一批供試品，按上述供試品溶液的制備方法制備供試品溶液6份，分別精密吸取10?l，注入液相色譜儀，測(cè)定其峰面積值。結(jié)果甘草酸的RSD值為0.96%。表明該含量測(cè)定方法具有良好的重復(fù)性。

2.7 回收率試驗(yàn):取已知含量的樣品約0.6g，計(jì)6份，精密稱定，分別加入一定量的甘草酸對(duì)照品溶液，照供試品溶液制備方法制得供試品溶液后進(jìn)樣測(cè)定峰面積，并計(jì)算回收率，結(jié)果甘草酸平均回收率為98.63%、RSD為0.96%。

2.8 樣品測(cè)定:取止吐六味散約1.2g，精密稱定，置具塞三角瓶中，精密加入流動(dòng)相50ml，超聲處理(功率250W，頻率40KHz)30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，用流動(dòng)相補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。照高效液相色譜法(《中國(guó)藥典》2010年版一部附錄VI D)測(cè)定。精密吸取供試品溶液10?l，注入液相色譜儀，測(cè)定其峰面積值，計(jì)算甘草酸(C42H62O16)含量。結(jié)果表明止吐六味散中甘草酸的平均含量不低于0.33%，其結(jié)果見表2。

表1 止吐六味散中甘草酸的含量(n=5)

3 小結(jié)

選用HPLC法對(duì)止吐六味散中甘草所含甘草酸的含量進(jìn)行測(cè)定研究。結(jié)果表明，該方法精密度高、穩(wěn)定性好、重復(fù)性佳、結(jié)果準(zhǔn)確。甘草酸的平均回收率為98.63%，RSD為0.96%(n=6)，高效液相色譜法測(cè)定本品中甘草酸含量的方法可用于止吐六味散質(zhì)量的定量控制。

〔1〕中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)·蒙藥分冊(cè)〔S〕.北京:1998，65.

〔2〕國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典·一部〔S〕.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005，59.

〔3〕史桂蘭，胡志浩.甘草酸作用及臨床應(yīng)用研究〔J〕.天津藥學(xué)，2001，13(1):10 ～12

〔4〕黃能惠，李誠(chéng)秀，羅俊，等.甘草酸銨的藥理作用〔J〕.貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1995，20(1):26

〔5〕惠壽年，董阿玲.國(guó)內(nèi)對(duì)甘草酸的化學(xué)成分研究進(jìn)展〔J〕.中草藥雜志，1999，30(4):313