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    電項(xiàng)針干預(yù)對(duì)老年性癡呆大鼠5-HT及CHATmRNA的影響

    2012-11-24 06:37:48金,韓數(shù)
    針灸臨床雜志 2012年4期
    關(guān)鍵詞:風(fēng)池穴督脈電針

    霍 金,韓 數(shù)

    (黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第二醫(yī)院,黑龍江哈爾濱150001)

    老年性癡呆(Senile Dementia),即阿爾茨海默病(Alzheimer's disease,AD)是一種發(fā)生于老年前期或老年期,以進(jìn)行性認(rèn)知障礙和記憶能力損害為主的中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病。主要臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性認(rèn)知功能障礙和記憶力減退、性格和行為改變、社交障礙、生活自理能力喪失,最終死亡。目前我國(guó)正逐漸步入老齡化社會(huì),因而研究老年性癡呆的防治方法已成為社會(huì)迫切需要[1]。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化及原位雜交法觀察電項(xiàng)針干預(yù)對(duì)AD大鼠海馬區(qū)5-h(huán)ydroxytryptamine(5-HT)及乙酰膽堿轉(zhuǎn)移酶(CHATmRNA)的影響,探討電項(xiàng)針治療AD的作用機(jī)制。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠40只,體重(350±50)g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。按組編號(hào)分籠,自由飲水進(jìn)食。

    1.2 藥品及試劑

    無(wú)水氯化鋁(天津市永大化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心),D-半乳糖(上海源聚生物科技有限公司),兔抗多克隆抗體(武漢博士德生物工程有限公司)。

    1.3 主要實(shí)驗(yàn)儀器

    德國(guó)菜卡2135型切片機(jī),美國(guó)moticam3000顯微攝影成像系統(tǒng),上海一恒電熱恒溫箱,針灸針用華佗牌直徑0.40 mm、長(zhǎng)25 mm無(wú)菌針灸針,電針采用DJ-6805型脈沖電針儀。

    1.4 實(shí)驗(yàn)方法

    1.4.1 動(dòng)物分組及造模方法

    將40只大鼠隨機(jī)分為空白組、假損傷組、模型對(duì)照組、電項(xiàng)針治療組,每組10只??瞻捉M給予常規(guī)飲水飼食;假損傷組給予常規(guī)飲食飼料,并胃飼及腹腔注射與模型對(duì)照組等容量之生理鹽水;模型對(duì)照組每只大鼠每日胃飼 20 mg·ml-1的 AlCl3水溶液 2 ml,腹腔注射D-半乳糖(48 mg·kg-1),連續(xù)8周;電項(xiàng)針治療組造模處理同模型對(duì)照組。

    1.4.2 治療方法

    穴位與針具常規(guī)消毒,按照中國(guó)針灸學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)部提供的大鼠穴位圖譜及比較解剖學(xué)取穴[2],取大鼠項(xiàng)部雙側(cè)的“風(fēng)池穴”、“供血穴”(頸4夾脊,深層布有椎動(dòng)脈);使用0.40 mm×25 mm毫針直刺3 mm,后接DJ-6805型脈沖電針儀,導(dǎo)線分別上下連接針柄,正極連“風(fēng)池穴”,負(fù)極連“供血穴”。采用疏密波,頻率為5~30 Hz,疏密周期6 s,強(qiáng)度以項(xiàng)部肌肉出現(xiàn)輕微抽動(dòng)為度,持續(xù)刺激20 min,每日1次,每針刺6天,休息1天,連續(xù)治療4周。

    空白組、假損傷組、模型對(duì)照組不進(jìn)行針刺治療,4組同步飼養(yǎng)。

    1.4.3 陽(yáng)性表達(dá)分析

    使用美國(guó)motica3000顯微攝影成像,于400倍鏡下選取海馬CA1-CA3區(qū)攝影,每組選取10例照片,在Motic image 3.2圖像分析軟件下進(jìn)行分析,計(jì)算陽(yáng)性表達(dá)的灰度平均值和平均光密度進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

    1.4.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    2 結(jié)果

    2.1 電項(xiàng)針對(duì)AD大鼠5-HT活性的影響

    模型對(duì)照組較空白組、假損傷組5-HT灰度平均值增高,平均光密度值下降(P<0.05),表明造模后5-HT陽(yáng)性表達(dá)降低;電項(xiàng)針治療后較模型對(duì)照組5-HT灰度平均值降低,平均光密度值增高(P<0.05),說(shuō)明5-HT陽(yáng)性表達(dá)有所恢復(fù)。見(jiàn)表1、圖1。

    表1 電項(xiàng)針對(duì)AD大鼠5-HT陽(yáng)性表達(dá)的影響

    圖1 各組大鼠海馬區(qū)5-HT的陽(yáng)性表達(dá)

    圖2 各組大鼠海馬區(qū)CHATmRNA的陽(yáng)性表達(dá)

    2.2 電項(xiàng)針對(duì)AD大鼠CHATmRNA的影響

    模型對(duì)照組較空白組、假損傷組CHATmRNA灰度平均值增高,平均光密度值下降(P<0.05),表明造模后CHATmRNA陽(yáng)性表達(dá)降低;電項(xiàng)針治療后較模型對(duì)照組CHATmRNA灰度平均值降低,平均光密度值增高(P<0.05),說(shuō)明CHATmRNA陽(yáng)性表達(dá)增強(qiáng)。見(jiàn)表2、圖2。

    表2 電項(xiàng)針對(duì)AD大鼠CHATmRNA陽(yáng)性表達(dá)的影響

    3 討論

    老年性癡呆常見(jiàn)的病因病機(jī)為年老體衰、腎精不足、痰瘀阻絡(luò)、髓??仗?,而其病性特點(diǎn)則以“本虛標(biāo)實(shí),督脈不通,瘀血阻脈”為要。督脈“起于下極之俞”,為元?dú)庵矗叭虢j(luò)腦”將臟腑精微輸注入腦,充溢腦髓,奉養(yǎng)元神,督脈不通則臟腑精微輸布受阻,髓海失養(yǎng),元神失調(diào),引起“善忘”、“失智”等癡呆病的典型表現(xiàn)。針對(duì)于此本實(shí)驗(yàn)采用針刺雙側(cè)“風(fēng)池穴”及“供血穴”,輔以電針儀的電項(xiàng)針療法治療本病。“風(fēng)池穴”屬于足少陽(yáng)膽經(jīng),其經(jīng)筋在額角與陽(yáng)蹺脈并行進(jìn)行左右交叉,而陽(yáng)蹺脈又從風(fēng)府入腦,因此選取風(fēng)池穴可使清陽(yáng)得升,腦髓得補(bǔ),其神自明[3]。“供血穴”為“新穴”,從其定位(風(fēng)池穴下1.5寸,平下口唇處)上來(lái)說(shuō),足太陽(yáng)、足少陽(yáng)、督脈,三陽(yáng)經(jīng)皆縱貫與旁,而頭為“諸陽(yáng)之會(huì)”,陽(yáng)經(jīng)皆上參入腦,因而供血穴對(duì)“脈絡(luò)瘀滯,髓海失養(yǎng)”所致的癡呆具有很好的治療效果?!帮L(fēng)池穴”及“供血穴”位于督脈兩側(cè),針刺兩穴符合“近部選穴”和“對(duì)癥選穴”的選穴原則,通過(guò)電針可促使督脈輸布順暢,精微上達(dá)髓海奉養(yǎng)元神,元神得養(yǎng),則癡呆對(duì)腦造成的損害均可得到改善。

    5-HT作為單胺類神經(jīng)遞質(zhì),在腦內(nèi)參與多種生理功能和病理狀態(tài)調(diào)節(jié),并與情緒智能密切相關(guān)。有研究證實(shí),大部分AD患者腦內(nèi)伴有5-HT系統(tǒng)損害,在額葉5-HT含量?jī)H為原有的39%[4]。CHAT為膽堿能神經(jīng)元的標(biāo)志酶,在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)參與合成Ach,也可作為Ach含量的間接指標(biāo)及膽堿能標(biāo)志[5]。大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),AD患者常伴有膽堿能神經(jīng)元缺失和變性,ChAT、AChE和Ach多功能在AD的發(fā)病中均有不同程度的損害[6]。在本實(shí)驗(yàn)?zāi)P蛯?duì)照組中,5-HT及ChATmRNA在復(fù)合損傷造模后均出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)減弱,與空白組及假損傷組差異顯著(P<0.05)。經(jīng)過(guò)治療后,5-HT及ChATmRNA的陽(yáng)性表達(dá)均有不同程度的增強(qiáng),與模型對(duì)照組有明顯差異(P<0.05)。

    綜上所述,本實(shí)驗(yàn)證明電項(xiàng)針治療能夠提高中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)代謝,并通過(guò)增強(qiáng)CHAT的陽(yáng)性表達(dá)改善AD大鼠海馬內(nèi)膽堿能系統(tǒng)功能,從而發(fā)揮防治老年性癡呆的作用。

    [1]陳可冀.老年性癡呆基礎(chǔ)和臨床研究進(jìn)展思考[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志,1998,18(6):324 -326

    [2]包新民,舒斯云.大鼠腦立體定位圖譜[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1991:44-45

    [3]王麗娟,王亞麗.獨(dú)一味對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,20(7):1761 -1762

    [4]馬滌輝,劉曉亮,張昱,等.實(shí)驗(yàn)性Alzheimer模型鼠腦組織5-羥色胺含量改變的研究[J].中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志,1996,13(3):150

    [5]Bisaglia M,Venezia V,Piccioli P,et al.Acetaminophen protects hipp-ocampal neurons and PC12 cultures from amyloid beta-peptides induced oxidative stress and reduces ChAT activation[J].Neurochem Int,2002,41(1):43 -54

    [6]望廬山,周麗莎.電針治療對(duì)阿爾茨海默病大鼠Ach、ChAT、AchE的影響[J].針灸臨床雜志,2009,25(6):40-42

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