正交試驗(yàn)優(yōu)選茅莓總皂苷的提取工藝

賀紅軍，邱宗蔭（重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，重慶400016）

正交試驗(yàn)優(yōu)選茅莓總皂苷的提取工藝

賀紅軍＊，邱宗蔭#（重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，重慶400016）

目的：優(yōu)選茅莓總皂苷的提取工藝。方法：在單因素考察的基礎(chǔ)上，以乙醇濃度、固液比、提取溫度和提取時(shí)間為考察因素，以茅莓總皂苷提取率為指標(biāo)，優(yōu)選茅莓總皂苷的提取工藝。結(jié)果：最佳提取工藝為乙醇濃度80%，提取時(shí)間為3h，固液比為1∶20，提取溫度為80℃。在此條件下，茅莓總皂苷提取率達(dá)到1.994%。結(jié)論：該工藝穩(wěn)定、可行，可為工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。

茅莓總皂苷；正交試驗(yàn)；提取工藝

茅莓又名紅梅消、天青地白草等，系薔薇科懸鉤子屬植物茅莓Rubus parvifolius L.的干燥全草。茅莓根、莖、葉均可作藥用，具有清熱涼血、止血、散結(jié)止痛、利尿消腫等功效，其中含有皂苷、糖、酚類物質(zhì)和鞣質(zhì)、揮發(fā)油、微量元素等多種成分[1]。藥理研究表明，茅莓總皂苷具有多種重要的藥理活性[2～4]。

由于茅莓中皂苷的含量較低，因此茅莓中的皂苷類活性成分能否被有效利用，與皂苷的分離提取、純化方法戚戚相關(guān)，如何建立一種高效、實(shí)用的茅莓總皂苷提取純化工藝就成為該有效部位進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究的主要環(huán)節(jié)，所以有必要對(duì)其提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。

1 儀器與試藥

UV-2450紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；analytic A200s電子天平（德國(guó)Sartorius公司）；真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申科機(jī)械研究所）；CS501超級(jí)恒溫水浴鍋（重慶市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠）。

茅莓藥材樣品，采集于重慶市璧山縣（2009年），經(jīng)重慶市中藥研究院生藥室鑒定為薔薇科懸鉤子屬植物茅莓Rubus parvifolius L.的全草，將部分切段，分別置50℃烘箱烘干，備用，齊墩果酸對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：0709-9803，供含量測(cè)定用）；香草醛、冰醋酸、高氯酸、甲醇、無(wú)水乙醇、石油醚（分析純，成都科龍化工試劑廠）。

2 樣品的制備及茅莓總皂苷含量測(cè)定

2.1 樣品溶液的制備

取干燥茅莓藥材粗粉25g，置于索氏提取器中，經(jīng)石油醚脫脂至無(wú)色，自然揮干石油醚，加200mL70%乙醇80℃水浴加熱回流提取2次，過(guò)濾，濾液減壓濃縮至無(wú)醇味，用蒸餾水定容至100mL左右，再用等體積水飽和正丁醇萃取3次，合并正丁醇萃取液，用300mL正丁醇飽和的水洗滌，棄去水洗液，將正丁醇液水浴減壓蒸干，殘?jiān)眉状既芙?，轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中，定容，搖勻，備用。

2.2 茅莓總皂苷含量測(cè)定方法

精密吸取樣品溶液0.5mL，置10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻，再取稀釋后的樣品溶液200μL，置于20mL具塞比色管中，水浴揮干溶劑，冷卻至室溫，依次加入0.2mL新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8mL高氯酸，搖勻，于60℃水浴加熱15min，立即取出，流水冷卻；再加入5mL冰醋酸，搖勻，20min后于546nm波長(zhǎng)處測(cè)定，并將結(jié)果代入以齊墩果酸為對(duì)照的回歸方程（A＝1.806c－0.0063（r＝0.9985））計(jì)算含量（式中，A為吸光度；c為齊墩果酸檢測(cè)濃度）。

2.3 茅莓總皂苷提取率的計(jì)算

在“2.1”項(xiàng)下方法的基礎(chǔ)上，按單因素試驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)的參數(shù)進(jìn)行樣品制備，按“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)其含量，按下式計(jì)算茅莓總皂苷提取率：提取率（%）＝提取液中茅莓總皂苷的總量/所用原料的總量×100%。

3 茅莓提取工藝研究

3.1 單因素試驗(yàn)

3.1.1 提取溶劑的考察 取茅莓藥材粗粉25g，分別以蒸餾水和50%、60%、70%、80%、90%乙醇作為溶劑，80℃水浴回流提取2h。結(jié)果，70%乙醇作為提取溶劑時(shí)提取率最高。乙醇濃度對(duì)茅莓總皂苷提取率的影響見(jiàn)圖1。

3.1.2 固液比的考察 固定其他提取條件，取茅莓藥材粗粉25g，用70%乙醇分別以1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30體積比，80℃水浴回流提取2h。結(jié)果，當(dāng)固液比在1∶20以上時(shí)，茅莓總皂苷的提取率高于1.7%，固液比繼續(xù)增加對(duì)提取率影響不大，從節(jié)約資源角度考慮，選擇1∶20為茅莓總皂苷的最終固液比例。固液比對(duì)提取茅莓總皂苷提取率的影響見(jiàn)圖2。根據(jù)茅莓總皂苷的特性，考慮到甲醇毒性較大，本試驗(yàn)采用乙醇回流法提取茅莓總皂苷，確定工藝的優(yōu)化工藝參數(shù)。所采用提取工藝簡(jiǎn)單，無(wú)需特殊設(shè)備。所用溶劑具有無(wú)毒、無(wú)污染、安全、價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn)，且方法簡(jiǎn)便、易于操作。

茅莓皂苷類成分的法定對(duì)照品國(guó)內(nèi)目前尚無(wú)，而茅莓皂苷類成分主要為三萜皂苷，故以齊敦果酸作對(duì)照品，采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定茅莓總皂苷含量。雖然與實(shí)際含量相比較所得的結(jié)果有一定差異，但是在尚無(wú)茅莓皂苷類成分法定標(biāo)準(zhǔn)品的情況下，利用顯色原理一致，選擇齊敦果酸作對(duì)照品仍不失為一種較佳的選擇。

[1] 中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志（第37卷）[M].北京：科學(xué)出版社，1985：61.

[2] 鄭振洨，張玲菊，黃常新，等.茅莓總皂苷體外抗腫瘤作用研究[J].浙江臨床醫(yī)學(xué)，2007，19（5）：611.

[3] 王繼生，邱宗蔭.茅莓總皂苷對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠興奮性氨基酸含量的影響[J].中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2007，27（8）：1029.

[4] 王繼生，邱宗蔭.茅莓總皂苷對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞缺氧損傷后胞內(nèi)鈣超載的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2007，23（7）：934.

Study on the Extraction Process of the Total Saponins of Rubus parviflolius

HE Hong-jun，QIU Zong-yin（College of Pharmacy，Chongqing Medical University，Chongqing，400016）

OBJECTIVE：Find out the optimal extraction process of total saponins of Rubus rviflolius（TGRP）to provide a foundation for the future research of it.METHODS：Based on the single factors research，throughl orthogonal design to optimize the extraction process of TGRP.RESULTS：The optimal extraction process of TGRP were：the concentration of ethanol solution was 80%；ratio to solid was 1∶20；extraction temperature was 80℃；extraction time was 3h.Under this condition the extraction rate of TGRP achieved 1.994%.CONCLUSION：The process gotten in the research is suitable for industrial production.

The total saponins of Rubus parviflolius；Orthogonal test；Extraction process

R284.2；R283

A

1001-0408（2012）07-0611-03

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.07.12

＊碩士研究生。研究方向：藥物分析。電話：023-86977192。E-mail：hehongjun666@yahoo.com.cn

#通訊作者：教授，博士研究生導(dǎo)師。研究方向：生物分析化學(xué)、新藥藥理與質(zhì)量控制。電話：023-68485272。E-mail：zongyin@163.com

2011-05-17

2011-07-10）