賀紅軍,邱宗蔭(重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,重慶400016)
正交試驗(yàn)優(yōu)選茅莓總皂苷的提取工藝
賀紅軍*,邱宗蔭#(重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,重慶400016)
目的:優(yōu)選茅莓總皂苷的提取工藝。方法:在單因素考察的基礎(chǔ)上,以乙醇濃度、固液比、提取溫度和提取時(shí)間為考察因素,以茅莓總皂苷提取率為指標(biāo),優(yōu)選茅莓總皂苷的提取工藝。結(jié)果:最佳提取工藝為乙醇濃度80%,提取時(shí)間為3h,固液比為1∶20,提取溫度為80℃。在此條件下,茅莓總皂苷提取率達(dá)到1.994%。結(jié)論:該工藝穩(wěn)定、可行,可為工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)。
茅莓總皂苷;正交試驗(yàn);提取工藝
茅莓又名紅梅消、天青地白草等,系薔薇科懸鉤子屬植物茅莓Rubus parvifolius L.的干燥全草。茅莓根、莖、葉均可作藥用,具有清熱涼血、止血、散結(jié)止痛、利尿消腫等功效,其中含有皂苷、糖、酚類物質(zhì)和鞣質(zhì)、揮發(fā)油、微量元素等多種成分[1]。藥理研究表明,茅莓總皂苷具有多種重要的藥理活性[2~4]。
由于茅莓中皂苷的含量較低,因此茅莓中的皂苷類活性成分能否被有效利用,與皂苷的分離提取、純化方法戚戚相關(guān),如何建立一種高效、實(shí)用的茅莓總皂苷提取純化工藝就成為該有效部位進(jìn)一步開發(fā)研究的主要環(huán)節(jié),所以有必要對(duì)其提取工藝進(jìn)行優(yōu)化。
UV-2450紫外分光光度計(jì)(日本島津公司);analytic A200s電子天平(德國Sartorius公司);真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海申科機(jī)械研究所);CS501超級(jí)恒溫水浴鍋(重慶市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠)。
茅莓藥材樣品,采集于重慶市璧山縣(2009年),經(jīng)重慶市中藥研究院生藥室鑒定為薔薇科懸鉤子屬植物茅莓Rubus parvifolius L.的全草,將部分切段,分別置50℃烘箱烘干,備用,齊墩果酸對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院,批號(hào):0709-9803,供含量測(cè)定用);香草醛、冰醋酸、高氯酸、甲醇、無水乙醇、石油醚(分析純,成都科龍化工試劑廠)。
2.1 樣品溶液的制備
取干燥茅莓藥材粗粉25g,置于索氏提取器中,經(jīng)石油醚脫脂至無色,自然揮干石油醚,加200mL70%乙醇80℃水浴加熱回流提取2次,過濾,濾液減壓濃縮至無醇味,用蒸餾水定容至100mL左右,再用等體積水飽和正丁醇萃取3次,合并正丁醇萃取液,用300mL正丁醇飽和的水洗滌,棄去水洗液,將正丁醇液水浴減壓蒸干,殘?jiān)眉状既芙?,轉(zhuǎn)移至100mL容量瓶中,定容,搖勻,備用。
2.2 茅莓總皂苷含量測(cè)定方法
精密吸取樣品溶液0.5mL,置10mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,搖勻,再取稀釋后的樣品溶液200μL,置于20mL具塞比色管中,水浴揮干溶劑,冷卻至室溫,依次加入0.2mL新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8mL高氯酸,搖勻,于60℃水浴加熱15min,立即取出,流水冷卻;再加入5mL冰醋酸,搖勻,20min后于546nm波長(zhǎng)處測(cè)定,并將結(jié)果代入以齊墩果酸為對(duì)照的回歸方程(A=1.806c-0.0063(r=0.9985))計(jì)算含量(式中,A為吸光度;c為齊墩果酸檢測(cè)濃度)。
2.3 茅莓總皂苷提取率的計(jì)算
在“2.1”項(xiàng)下方法的基礎(chǔ)上,按單因素試驗(yàn)和正交設(shè)計(jì)的參數(shù)進(jìn)行樣品制備,按“2.2”項(xiàng)下方法測(cè)其含量,按下式計(jì)算茅莓總皂苷提取率:提取率(%)=提取液中茅莓總皂苷的總量/所用原料的總量×100%。
3.1 單因素試驗(yàn)
3.1.1 提取溶劑的考察 取茅莓藥材粗粉25g,分別以蒸餾水和50%、60%、70%、80%、90%乙醇作為溶劑,80℃水浴回流提取2h。結(jié)果,70%乙醇作為提取溶劑時(shí)提取率最高。乙醇濃度對(duì)茅莓總皂苷提取率的影響見圖1。
3.1.2 固液比的考察 固定其他提取條件,取茅莓藥材粗粉25g,用70%乙醇分別以1∶10、1∶15、1∶20、1∶25、1∶30體積比,80℃水浴回流提取2h。結(jié)果,當(dāng)固液比在1∶20以上時(shí),茅莓總皂苷的提取率高于1.7%,固液比繼續(xù)增加對(duì)提取率影響不大,從節(jié)約資源角度考慮,選擇1∶20為茅莓總皂苷的最終固液比例。固液比對(duì)提取茅莓總皂苷提取率的影響見圖2。根據(jù)茅莓總皂苷的特性,考慮到甲醇毒性較大,本試驗(yàn)采用乙醇回流法提取茅莓總皂苷,確定工藝的優(yōu)化工藝參數(shù)。所采用提取工藝簡(jiǎn)單,無需特殊設(shè)備。所用溶劑具有無毒、無污染、安全、價(jià)廉等優(yōu)點(diǎn),且方法簡(jiǎn)便、易于操作。
茅莓皂苷類成分的法定對(duì)照品國內(nèi)目前尚無,而茅莓皂苷類成分主要為三萜皂苷,故以齊敦果酸作對(duì)照品,采用紫外-可見分光光度法測(cè)定茅莓總皂苷含量。雖然與實(shí)際含量相比較所得的結(jié)果有一定差異,但是在尚無茅莓皂苷類成分法定標(biāo)準(zhǔn)品的情況下,利用顯色原理一致,選擇齊敦果酸作對(duì)照品仍不失為一種較佳的選擇。
[1] 中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志(第37卷)[M].北京:科學(xué)出版社,1985:61.
[2] 鄭振洨,張玲菊,黃常新,等.茅莓總皂苷體外抗腫瘤作用研究[J].浙江臨床醫(yī)學(xué),2007,19(5):611.
[3] 王繼生,邱宗蔭.茅莓總皂苷對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠興奮性氨基酸含量的影響[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2007,27(8):1029.
[4] 王繼生,邱宗蔭.茅莓總皂苷對(duì)大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞缺氧損傷后胞內(nèi)鈣超載的影響[J].中國藥理學(xué)通報(bào),2007,23(7):934.
Study on the Extraction Process of the Total Saponins of Rubus parviflolius
HE Hong-jun,QIU Zong-yin(College of Pharmacy,Chongqing Medical University,Chongqing,400016)
OBJECTIVE:Find out the optimal extraction process of total saponins of Rubus rviflolius(TGRP)to provide a foundation for the future research of it.METHODS:Based on the single factors research,throughl orthogonal design to optimize the extraction process of TGRP.RESULTS:The optimal extraction process of TGRP were:the concentration of ethanol solution was 80%;ratio to solid was 1∶20;extraction temperature was 80℃;extraction time was 3h.Under this condition the extraction rate of TGRP achieved 1.994%.CONCLUSION:The process gotten in the research is suitable for industrial production.
The total saponins of Rubus parviflolius;Orthogonal test;Extraction process
R284.2;R283
A
1001-0408(2012)07-0611-03
DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.07.12
*碩士研究生。研究方向:藥物分析。電話:023-86977192。E-mail:hehongjun666@yahoo.com.cn
#通訊作者:教授,博士研究生導(dǎo)師。研究方向:生物分析化學(xué)、新藥藥理與質(zhì)量控制。電話:023-68485272。E-mail:zongyin@163.com
2011-05-17
2011-07-10)