精制銀翹解毒片中對乙酰氨基酚的溶出度測定

屈 蓉（泰州市食品藥品檢驗所，江蘇泰州 225300）

精制銀翹解毒片收載于《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)（中藥成方制劑）》第三冊[1]，是由對乙酰氨基酚、桔梗、連翹、淡豆豉、甘草、淡竹葉、金銀花、牛蒡子、荊芥穗、薄荷腦等組成的中西復(fù)方制劑，具有清熱散風(fēng)、解表退熱的功效。用于治療流行性感冒、發(fā)冷發(fā)熱、四肢酸懶、頭痛咳嗽、咽喉腫痛。對乙酰氨基酚為其主要成分之一，標(biāo)準(zhǔn)中仍以崩解時限作為該藥的檢查項之一，而崩解時限合格并不說明生物利用度合格。為了穩(wěn)定和提高產(chǎn)品質(zhì)量，確保藥效的充分發(fā)揮，本文建立了該品種中對乙酰氨基酚含量的高效液相色譜（HPLC）測定方法，并參照日本“藥品品質(zhì)再評價”工程在溶出度研究中所擬定的模擬人體消化道內(nèi)體液的4中基本介質(zhì)[2]，采用漿法，轉(zhuǎn)速為75 r·min-1，測定國內(nèi)3個廠家不同包衣片劑的體外溶出度，以為改進(jìn)其生產(chǎn)工藝，評價其內(nèi)在質(zhì)量提供方法和參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

RC-3B藥物溶出儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；1260 HPLC儀（美國安捷倫科技有限公司）；AG135電子天平（瑞士梅特勒-托利多儀器有限公司）；pHS-25型酸度計（北京華瑞博遠(yuǎn)科技發(fā)展有限公司）；對乙酰氨基酚對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100018-200408）；精制銀翹解毒片（A廠：糖衣片，批號：20100101；B廠：糖衣片，批號：10215001；C廠：薄膜衣片，批號：091101）；甲醇為色譜純，水為純化水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 對乙酰氨基酚含量測定方法建立

2.1.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗色譜柱：島津C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水（20∶80）；檢測波長：249 nm；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量：10 μL；柱溫：30 ℃。對乙酰氨基酚的保留時間為6.788 min，陰性對照在對乙酰氨基酚色譜峰相應(yīng)的保留時間處無吸收峰。理論板數(shù)按對乙酰氨基酚色譜峰計算應(yīng)為6 500。色譜見圖1。

2.1.2 溶出介質(zhì)的制備[2]溶出介質(zhì)Ⅰ（pH 1.2人工胃液）：取氯化鈉2.0 g，加水適量使溶解，加鹽酸7 mL，再加水稀釋至1 000 mL，即得；溶出介質(zhì)Ⅱ（pH 4.0醋酸鹽緩沖液）：0.05 mol·L-1醋酸-0.05 mol·L-1醋酸鈉（16.4∶3.6）；溶出介質(zhì)Ⅲ（pH 6.8磷酸鹽緩沖液）：取磷酸二氫鉀3.4 g和無水磷酸氫二鈉3.55 g，加水適量使溶解，定容至1 000 mL，再用水稀釋1倍，即得；溶出介質(zhì)Ⅳ（水）：純化水。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 取對乙酰氨基酚對照品約25 mg，精密稱定，置200 mL量瓶中，分別用上述4種介質(zhì)溶解后定容，作為貯備液。分別精密量取各貯備液0.1、0.5、2.5、10、25、50、75、100 mL，置100 mL量瓶中，加各溶出介質(zhì)稀釋至刻度，配成濃度約為0.125、0.625、3.125、12.500、31.250、62.500、93.750、125.000 μg·mL-1的系列溶液，按上述色譜條件分別進(jìn)樣測定。以不同溶出介質(zhì)中乙酰氨基酚檢測濃度（c）為橫坐標(biāo)，峰面積積分值（A）為縱坐標(biāo)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線，得對乙酰氨基酚在溶出介質(zhì)Ⅰ～Ⅳ中的回歸方程分別為A＝36.465c－0.196 5（r＝0.999 9）、A＝36.282c+2.132 4（r＝0.999 9）、A＝35.940c－3.384 3（r＝0.999 9）、A＝36.419c+3.427 3（r＝0.999 9）。結(jié)果表明，對乙酰氨基酚檢測濃度在0.125～125.000 μg·mL-1范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系。

2.1.4 供試品溶液的制備 取供試品10片，除去包衣，研細(xì)，取約1/3片重量，精密稱定，置200 mL量瓶中，加各溶出介質(zhì)適量，超聲（功率：200 W，頻率：53 kHz）處理20 min，放冷，用相應(yīng)的溶出介質(zhì)定容，取干燥濾紙迅速過濾，棄去初濾液，取續(xù)濾液，即得。

2.1.5 精密度試驗 取“2.1.3”項下各溶出介質(zhì)中濃度為93.750 μg·mL-1的對照品溶液，分別重復(fù)進(jìn)樣6次，測定對乙酰氨基酚的峰面積。結(jié)果，RSD分別為0.1%、0.1%、0.5%、0.4%（n均為6），表明儀器精密度良好。

2.1.6 重復(fù)性試驗 取C廠樣品適量，按“2.1.4”項下方法分別加4種溶出介質(zhì)制得供試品溶液各5份，照“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析。結(jié)果，RSD分別為1.1%、0.8%、1.3%、1.5%（n均為5），表明方法重復(fù)性良好。

2.1.7 穩(wěn)定性試驗 取“2.1.4”項下供試品溶液，按“2.1.1”項下色譜條件測定，分別于0、2、4、8、12 h進(jìn)樣，測定對乙酰氨基酚峰面積。結(jié)果，RSD分別為0.1%、0.3%、1.0%、0.5%（n均為5），表明供試品溶液均在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.1.8 加樣回收率試驗 稱取1/6片樣品（C廠，每片中對乙酰氨基酚標(biāo)示量為44 mg）約50 mg，共6份，精密稱定，分別精密加入對乙酰氨基酚對照品約8 mg，按“2.1.1”項下色譜條件測定，計算加樣回收率。結(jié)果，4種介質(zhì)下對乙酰氨基酚的平均回收率分別為100.4%、100.9%、100.1%、100.9%，RSD分別為1.6%、2.1%、1.7%、2.0%（n均為6）。

2.1.9 定量限 以信噪比10∶1為指標(biāo)，測得定量限為0.015 μg·mL-1。

2.1.10 樣品含量測定 取A、B、C廠家的樣品各10片，按“2.1.4”項下方法制備供試品溶液，照“2.1.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，以外標(biāo)法計算樣品中對乙酰氨基酚的含量（按標(biāo)示量計算），結(jié)果見表1。

表1 樣品含量測定結(jié)果Tab 1 Results of content determination of sample

2.2 溶出度考察

2.2.1 溶出介質(zhì)的制備[1]同“2.1.2”項下方法制備。

2.2.2 溶出介質(zhì)體積的選擇 以水為溶出介質(zhì)，選用漿法測定，介質(zhì)體積選用600、900 mL[3]，轉(zhuǎn)速為75 r·min-1，分別對3個廠家的樣品進(jìn)行考察。結(jié)果，A、B廠樣品在取樣時間為10 min時的供試品溶液濃度未能達(dá)到儀器的定量限，故溶出介質(zhì)體積選用600 mL。

3.1.3 溶出度測定 根據(jù)2010年版《中國藥典》（二部）附錄溶出度測定法，選用第二法漿法測定。取A、B、C 3個廠家的樣品各6片，分別以不同溶出介質(zhì)Ⅰ～Ⅳ各600 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為75 r·min-1，溫度為（37±0.5）℃，依法測定。取樣時間為10、20、30、45、60、90、120、150、180 min，每次取樣5 mL，經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過，同時補(bǔ)充同體積同溫度的溶出介質(zhì)。取供試品溶液按HPLC法分別測定，計算出每片的累積溶出率。溶出曲線見圖2。

2.3 數(shù)據(jù)處理及分析

采用美國FDA推薦使用的相似因子法。相似因子法的基本假設(shè)是試驗制劑與對照制劑的累積溶出度差的平方和最小，相似因子（f2）的數(shù)學(xué)表達(dá)式為：

式中：f2為相似因子；Rt為t時間參比制劑累積溶出百分率；Tt為t時間受試制劑累積溶出百分率；n為取點數(shù)目。

f2值在50～100之間時可以認(rèn)為樣品與參比制劑之間的溶出行為具有相似性，其值越接近100，相似性越高；越接近0，相似度越低；f2值＜50時，則說明樣品與參比制劑的溶出度不相似。選用A廠的產(chǎn)品為對照，評價其他兩家藥廠的產(chǎn)品在各個溶出介質(zhì)條件下的溶出度，統(tǒng)計分析結(jié)果見表2；以溶出介質(zhì)Ⅰ為對照，評價各藥廠制劑在其他3個溶出介質(zhì)中的溶出度，統(tǒng)計分析結(jié)果見表3。

圖2 不同廠家精制銀翹解毒片在不同溶出介質(zhì)中的溶出曲線A.A廠；B.B廠；C.C廠Fig 2 Dissolution curve of Prepared yinqiao jiedu tablets produced by different manufacturers in different medium factoryA.factoryA；B.factory B；C.factory C

從HPLC圖中可看出，除對乙酰氨基酚峰外，其余僅檢出1～2個色譜峰，說明在本文所考察的4種溶出介質(zhì)中，樣品大部分成分未能溶出。由于本文僅對對乙酰氨基酚的溶出指標(biāo)進(jìn)行測定，未考察其余成分適宜的溶出介質(zhì)，故該方法下一步可繼續(xù)深入研究。

試驗中考察了轉(zhuǎn)籃法和漿法兩種方法，采用轉(zhuǎn)籃法時，發(fā)現(xiàn)制劑的包衣會附著于轉(zhuǎn)籃的籃網(wǎng)上，影響片劑的溶出，因此選用漿法。

在進(jìn)行溶出度測定時，B廠制劑在溶出介質(zhì)Ⅳ中一開始出現(xiàn)倒溶現(xiàn)象，10 min時溶出率為0.6%，而20 min時溶出率為0.2%，在溶出介質(zhì)Ⅲ中也存在此現(xiàn)象，可能是藥物中添加的輔料導(dǎo)致了藥品釋放的不穩(wěn)定，尚有待進(jìn)一步研究，但仍建議該廠對影響制劑溶出度的輔料及生產(chǎn)工藝進(jìn)行改進(jìn)，以進(jìn)一步提高產(chǎn)品質(zhì)量。

試驗中發(fā)現(xiàn)，A廠和B廠制劑在60 min后對乙酰氨基酚的溶出率才能達(dá)到40%以上，120 min達(dá)到85%以上，而C廠制劑在30 min后溶出率已能達(dá)到40%以上，90 min后能達(dá)到85%以上，說明薄膜衣較糖衣體外溶出快，但是否會引起體內(nèi)生物利用度及臨床療效不同，有待進(jìn)一步研究證實。

中藥制劑生產(chǎn)多為傳統(tǒng)工藝，產(chǎn)品質(zhì)量參差不齊，出現(xiàn)的問題也比化學(xué)藥品多。因此，藥品標(biāo)準(zhǔn)中有必要增加溶出度檢查項目，對制劑質(zhì)量進(jìn)行控制。

表2 以A廠制劑為對照的其他各藥廠制劑的相似因子Tab 2 f2of preparations from different factories using factoryAas control

由表2可看出，以A廠制劑為對照，僅僅B廠產(chǎn)品在溶出介質(zhì)Ⅰ中的f2值＞50，其余所得f2值均＜50，說明各藥廠制劑質(zhì)量水平存在顯著性差異。由表3看出，以溶出介質(zhì)Ⅰ為對照，A藥廠制劑在溶出介質(zhì)Ⅱ、Ⅳ中f2值均＞50，在溶出介質(zhì)Ⅲ中f2值也接近50，說明A廠制劑在患有該疾病的各種體質(zhì)人群中溶出情況相似，其質(zhì)量較穩(wěn)定；而B藥廠和C藥廠制劑在溶出介質(zhì)Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ中的f2值均＜50，說明B藥廠和C藥廠制劑在不同體質(zhì)人群中的溶出情況存在顯著性差異。

表3 以溶出介質(zhì)Ⅰ為對照的其他各溶出介質(zhì)中的相似因子Tab 3 f2of different mediums using mediumⅠas control

3 討論

[1]中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會.中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑（第三冊）[S].1991：198.

[2]謝沐風(fēng).簡介日本“藥品品質(zhì)再評價”工程（溶出度研究系列一）[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2005，6（6）：42.

[3]張 波，李清箐，潘慶東.益肝靈滴丸溶出度測定[J].中國藥房，2010，21（43）：4 103.