IL－17在子宮頸上皮內(nèi)瘤變患者組織中的表達(dá)及意義

郝曉玲，陶林，張文杰，2

（1石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理系／新疆地方與民族高發(fā)病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，石河子832002；2華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院生殖醫(yī)學(xué)中心，武漢430030）

子宮頸癌是世界范圍內(nèi)女性第三高發(fā)惡性腫瘤，居乳腺癌和大腸癌之后。據(jù)國(guó)際癌癥研究組織（IARC）2008年的數(shù)據(jù)估計(jì)，我國(guó)有7.5萬(wàn)子宮頸癌新發(fā)病例，占全球新發(fā)病例的14%；而宮頸癌死亡病例高達(dá)3.3萬(wàn)，占全球死亡病例的12%。2011年一項(xiàng)調(diào)查顯示，全球子宮頸癌新發(fā)病例在過(guò)去的30 年 間 （1980－2010）逐 年 上 升，年 增 長(zhǎng) 率 達(dá)0.6%［1］；因此，研究和闡明子宮頸癌，尤其是癌前病變的發(fā)生、發(fā)展的分子機(jī)制對(duì)子宮頸癌的預(yù)防和靶向性治療具有重要意義。

IL－17（Interleukin－17）是一種主要由 Th17細(xì)胞亞群和中性粒細(xì)胞分泌產(chǎn)生的促炎細(xì)胞因子（proinflammatory cytokine）。它可以招募中性粒細(xì)胞，促進(jìn)多種細(xì)胞釋放炎性因子，促進(jìn)細(xì)胞增殖和血管生成，是參與慢性炎癥和腫瘤發(fā)生的重要炎癥因子［2］。對(duì)人類腫瘤與小鼠的多種惡性腫瘤模型的研究發(fā)現(xiàn)，慢性炎癥是腫瘤的主要誘發(fā)因素［3］。

為了深入研究IL－17與子宮頸癌癌前病變（CIN）的發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用免疫組化法檢測(cè)不同CIN病變組織中IL－17的表達(dá)情況，探討其在子宮頸癌癌前病變的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中潛在的生物學(xué)意義。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源與臨床資料

收集石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科2008年至2011年石蠟包埋宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）90例及子宮頸對(duì)照組織30例，按2009年WHO子宮頸腫瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)（其中CIN1、CIN2、CIN3及子宮頸對(duì)照組織各30例），所有病例均在病理醫(yī)生原始診斷的基礎(chǔ)上進(jìn)行了二次復(fù)查診斷。

1.2 試劑

兔抗人IL－17多克隆抗體（美國(guó)Santa Cruz公司）；DAB顯色試劑盒（Dako公司，ZLI－9019）；S－P法試劑盒、抗原修復(fù)液：EDTA緩沖液（0.01mol／L，PH 0.8～0.9）均購(gòu)于北京中杉金橋生物有限公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法及結(jié)果判讀

實(shí)驗(yàn)方法：采用免疫組織化學(xué)S－P法。所有載玻片預(yù)先經(jīng)丙酮、APES防脫片膠處理。組織標(biāo)本經(jīng)過(guò)10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，4μm連續(xù)切片。脫蠟水化后，于EDTA緩沖液（0.01mol／L，PH 0.8～0.9）中微波加熱進(jìn)行抗原修復(fù)15 min。其余步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明書操作（IL－17抗體稀釋濃度為1∶200）。PBS代替一抗（其余步驟完全一樣）作陰性對(duì)照，由試劑公司提供的照片作陽(yáng)性對(duì)照。

結(jié)果判斷：IL－17組織切片顯示以胞漿染色為淺黃色至棕色顆粒者為陽(yáng)性，于光學(xué)顯微鏡（400倍）下隨機(jī)選取4個(gè)有代表性的不同視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)腫瘤細(xì)胞，得分由陽(yáng)性染色細(xì)胞所占面積和細(xì)胞染色強(qiáng)度兩者計(jì)分乘積來(lái)判斷。染色面積計(jì)分為：陽(yáng)性染色細(xì)胞＜5%計(jì)0分；6～25% 計(jì)1分；26～50% 計(jì)2分；51～75% 計(jì)3分；76～100%計(jì)4分。細(xì)胞染色強(qiáng)度：無(wú)著色計(jì)0分；淺黃色計(jì)1分；黃色計(jì)2分；棕黃色計(jì)3分；棕色計(jì)4分。兩項(xiàng)記分相乘0～1分為（－），2～4分為（＋），5～8分為（＋＋），9～12分為（＋＋＋），13～16分為（＋＋＋＋）。（－）為陰性，（＋）為弱陽(yáng)性表達(dá)，（＋＋）～（＋＋＋＋）為強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)［4］。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)數(shù)資料之間的差異顯著性采用χ2檢驗(yàn)法。

2 結(jié)果

IL－17在子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）中的表達(dá)情況見(jiàn)表1。

表1 IL－17在子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）中的表達(dá)Tab.1 The expression of IL－17 in cervical intraepithelial neoplasias（CINs）

由表1可知：IL－17主要表達(dá)在子宮頸鱗狀上皮（CIN病變組織）細(xì)胞的細(xì)胞漿，在子宮頸對(duì)照組織、CIN1、CIN2、CIN3中高表達(dá)的（＋＋以及以上）分別 是 1（3.3%），2（6.7%），19（63.3%），27（90.0%），4組間差異顯著（P＜0.05），而且隨著CIN病變程度的增加IL－17高表達(dá)的陽(yáng)性率也逐漸增加（表1，圖1）。

圖1 IL－17在子宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）中的表達(dá)（S－P×100）Fig.1 The expression of IL－17 in cervical intraepithelial neoplasias（CINs）（S－P×100）

3 討論

IL－17是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一種具有強(qiáng)致炎性作用的細(xì)胞因子，其中，CD4＋T細(xì)胞亞群中Th17細(xì)胞是IL－17的主要來(lái)源細(xì)胞［5］。但最近研究發(fā)現(xiàn)多種細(xì)胞均可以產(chǎn)生IL－17，如上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等。Steiner等［6］通過(guò)免疫組化和 RT－PCR法研究發(fā)現(xiàn)IL－17在正常前列腺組織中表達(dá)極少，且局限在淋巴細(xì)胞，而在79%的前列腺增生組織及58%的前列腺癌組織中高表達(dá)。說(shuō)明IL－17主要是由前列腺上皮細(xì)胞產(chǎn)生的。

慢性炎癥例如炎癥性腸病（inflammatory bowel diseases，IBD）、幽門螺桿菌感染、和乙肝病毒感染均可致腫瘤的發(fā)生，稱為炎癥相關(guān)性腫瘤［7］，而在這類腫瘤中都發(fā)現(xiàn)IL－17表達(dá)增高。克羅恩?。–rohn’s disease，CD）和潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）作為一類慢性炎癥性腸病，與CD4＋T細(xì)胞的過(guò)度激活相關(guān)，活化的CD4＋T細(xì)胞釋放一系列促炎癥因子，如IL－6、IL－12、IL－23和IL－17，誘導(dǎo)特異性Th17細(xì)胞的分化［8－9］。幽門螺桿菌感染誘導(dǎo)的胃的慢性炎癥是胃癌的主要病因之一，在感染的幽門胃粘膜上可見(jiàn)IL－17的高表達(dá)［10］。這些研究表明，IL－17在炎癥相關(guān)性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮了關(guān)鍵性的作用。

目前，已知HPV病毒感染是子宮頸癌的主要病因，從HPV病毒感染到子宮頸上皮內(nèi)瘤變到癌變是一個(gè)慢性炎癥過(guò)程，因此子宮頸癌也是一種與炎癥相關(guān)的腫瘤，應(yīng)該具有與其它病毒感染，如乙肝病毒感染，相同或相似的慢性炎性特征。體外實(shí)驗(yàn)研究已經(jīng)證實(shí)，IL－17在有HPV感染的子宮頸癌細(xì)胞中的表達(dá)比在只有HPV感染的子宮頸上皮細(xì)胞和正常子宮頸上皮細(xì)胞都要高。在子宮頸癌活檢組織中，IL－17的表達(dá)水平也高于子宮頸上皮內(nèi)瘤變組織和正常子宮頸組織［11］，最近的一項(xiàng)研究［12］報(bào)告了52例子宮頸癌活檢組織中IL－17的表達(dá)情況，結(jié)果顯示從子宮頸上皮內(nèi)瘤變到子宮頸癌的進(jìn)展過(guò)程中，IL－17的表達(dá)明顯增加。綜上所述，IL－17的過(guò)表達(dá)可能在子宮頸癌及其癌前病變的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要的作用。

本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用免疫組化方法檢測(cè)了子宮頸上皮內(nèi)瘤變組織及正常子宮頸對(duì)照組織中IL－17的表達(dá)情況，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，IL－17主要在子宮頸鱗狀上皮（CIN病變組織）細(xì)胞的胞漿表達(dá)，在正常子宮頸對(duì)照組織中不表達(dá)，而且在CIN病變組織中IL－17高表達(dá)的陽(yáng)性率隨著CIN病變級(jí)別的增高而逐漸增高，提示IL－17可能參與了子宮頸上皮內(nèi)瘤變的發(fā)生及發(fā)展，但本研究不能說(shuō)明IL－17的表達(dá)變化是原發(fā)性還是繼發(fā)于與其有關(guān)的分子的表達(dá)。IL－17在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)的現(xiàn)象在其他研究中也有提出：Chang等［13］發(fā) 現(xiàn) IL－17 在 非 小 細(xì) 胞 性 肺 癌 （NSCLC）腫瘤細(xì)胞胞漿中有表達(dá)，而在正常組織中沒(méi)有表達(dá)，我們推測(cè)病變的腫瘤細(xì)胞可能產(chǎn)生IL－17，也就是說(shuō)，IL－17可能參與了宮頸腫瘤的發(fā)生或發(fā)展。但是，由于免疫組化方法的局限性，還需使用其它方法，如mRNA的表達(dá)，并擴(kuò)大樣本量對(duì)這一觀察結(jié)果進(jìn)行證實(shí)。

總之，IL－17作為炎癥相關(guān)性腫瘤微環(huán)境中的重要因子，可能與子宮頸癌癌前病變的發(fā)生或發(fā)展有關(guān)。IL－17與子宮頸癌及其癌前病變病情進(jìn)展和患者預(yù)后的關(guān)系，以及同其他細(xì)胞因子的相互作用有待進(jìn)一步研究。對(duì)IL－17的進(jìn)一步研究有可能使IL－17成為評(píng)價(jià)子宮頸癌及其癌前病變病情和治療療效的一個(gè)新的免疫學(xué)指標(biāo)。相關(guān)的臨床應(yīng)用及標(biāo)準(zhǔn)方案都尚未見(jiàn)明確報(bào)道，因此，深入研究IL－17家族及其相關(guān)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在CIN病變中的作用很有前途，可能為闡明子宮頸癌及其癌前病變的發(fā)生和發(fā)展提供分子機(jī)制，也可能為靶向性生物治療開辟新的思路。

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