CIP2A在肝癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

麥 聰 唐云強(qiáng) 洪 健 湯凱雯 唐 輝

廣州醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院腹外二科，廣東廣州 510095

CIP2A在肝癌組織中的表達(dá)及其臨床意義

麥 聰 唐云強(qiáng) 洪 健 湯凱雯 唐 輝

廣州醫(yī)學(xué)院附屬腫瘤醫(yī)院腹外二科，廣東廣州 510095

目的 探討CIP2A在肝癌組織中表達(dá)的臨床意義。 方法 選取筆者所在醫(yī)院2008年7月～2011年8月收治的80例原發(fā)性肝癌患者的臨床資料，應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)肝癌組織、癌周組織及正常肝組織的CIP2A含量，并分析其與肝癌病理特征之間的關(guān)系。 結(jié)果 在本組80例患者中，肝癌組織CIP2A表達(dá)陽(yáng)性57例，陽(yáng)性率為71.2%，癌旁組織表達(dá)陽(yáng)性19例，陽(yáng)性率為23.8%，正常組織中未見(jiàn)CIP2A表達(dá)，CIP2A含量與肝癌直徑、組織分化及TNM分期有密切相關(guān)性。結(jié)論 CIP2A在肝癌組織中表達(dá)較高，有特異性，與肝癌的病理特征有相關(guān)性，可以作為預(yù)測(cè)肝癌組織診斷、治療的分子標(biāo)記物。

肝癌組織；分化程度；CIP2A；臨床意義；免疫組化

目前隨著我國(guó)飲食結(jié)構(gòu)的調(diào)整、診斷水平的不斷提高，原發(fā)性肝癌（primary liver cancer，PLC）在全球的發(fā)病率已經(jīng)升到第3位，并呈逐年上升的趨勢(shì)，可見(jiàn)肝癌研究的重要性。在目前的診斷中，甲胎蛋白（AFP）是診斷肝癌的重要標(biāo)準(zhǔn)，但是特異性不高[1]，AFP在重癥肝炎、脂肪肝等肝臟疾病中均有表達(dá)，因此尋求一種診斷標(biāo)記物及治療靶點(diǎn)成為研究的熱點(diǎn)。蛋白磷脂酶2A（PP2A）的抑癌因子（cancerous inhibitor of protein phosphatase 2A，CIP2A）是近年來(lái)被識(shí)別的一種癌蛋白，可以抑制PP2A對(duì)c-Myc的絲氨酸的脫磷酸化作用[2]，穩(wěn)定細(xì)胞內(nèi)c-Myc的表達(dá)，在人類(lèi)頭頸部、結(jié)腸癌、胃癌中均有表達(dá)，但是其與肝癌的關(guān)系研究較少，本研究回顧性分析80例肝癌患者CIP2A的含量，探討其在人類(lèi)肝癌中的生物學(xué)意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取筆者所在醫(yī)院2008年7月～2011年8月收治的80例原發(fā)性肝癌患者的臨床資料，男57例，女23例；年齡36～72歲，平均（54.4±4.8）歲；所有患者均為手術(shù)病理確診，術(shù)前常規(guī)檢查，未進(jìn)行放療、化療治療。另收集20例正常肝組織手術(shù)患者的肝組織石蠟標(biāo)本進(jìn)行對(duì)照。

1.2 方法

獲取組織標(biāo)本后-80℃低溫保存，免疫組化標(biāo)本放入甲醛溶液中固定石蠟包埋。主要試劑：CIP2A多克隆抗體，生物素標(biāo)記的羊抗小鼠二抗由北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司提供，小牛血清由杭州四季青生物材料有限公司提供，RNAFast200總RNA試劑盒、采用Primer軟件設(shè)計(jì)PCR引物，以β-actin基因表達(dá)產(chǎn)物為參照引物。組織標(biāo)本經(jīng)甲醛溶液固定，石蠟包埋，對(duì)石蠟行4μm切片，檸檬酸加熱至95℃，20 min抗原修復(fù)，正常非免疫血清封閉30 min，纖維鏡下觀察成像系統(tǒng)拍照對(duì)陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行分析，染色強(qiáng)度評(píng)分：強(qiáng)為3分，中度為2分，弱為1分，0分為陰性。按照Fast200總DNA極速提取試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟提取組織中總RNA[3]，溶于無(wú)iRNase酶水中，應(yīng)用PrimeScript反轉(zhuǎn)錄試劑盒取1μg總DNA以O(shè)ligo dT Orimer為引物，轉(zhuǎn)錄合成cDNA，反應(yīng)條件為94℃預(yù)變性5 min，退火30 s，72℃延伸30 s，共進(jìn)行30個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸5 min，保存產(chǎn)物。CIP2A基因與β-actin比值作為CIP2A的相對(duì)表達(dá)量。采用Keisuke統(tǒng)計(jì)方法，以CIP2A≥0.57記為高轉(zhuǎn)錄組，以CIP2A＜0.57記為低轉(zhuǎn)錄組。應(yīng)用RT-PCR法檢測(cè)肝癌組織、癌周組織及正常肝組織的CIP2A含量，并分析其與肝癌病理特征之間的關(guān)系。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS13.0對(duì)各項(xiàng)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（± s）表示，使用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同肝組織CIP2A表達(dá)

在本組80例患者中，肝癌組織CIP2A表達(dá)陽(yáng)性（圖1）57例，陽(yáng)性率為71.2%，癌旁組織表達(dá)陽(yáng)性（圖2）19例，陽(yáng)性率為23.8%，正常組織中未見(jiàn)CIP2A表達(dá)。見(jiàn)表1。

表1 不同肝組織CIP2A表達(dá)

圖1 肝癌組織CIP2A表達(dá)陽(yáng)性病理圖片

圖2 癌旁組織表達(dá)陽(yáng)性病理圖片

2.2 不同CIP2A轉(zhuǎn)錄水平與肝癌組織病理學(xué)對(duì)照

高轉(zhuǎn)錄組患者瘤體直徑大、HBV陽(yáng)性率高，同時(shí)合并肝硬化及門(mén)靜脈癌栓浸潤(rùn)發(fā)生率高，與低轉(zhuǎn)錄組患者比較差異顯著（P＜0.05），說(shuō)明CIP2A含量與肝癌直徑、組織分化及TNM分期有密切相關(guān)性。見(jiàn)表2。

表2 不同CIP2A轉(zhuǎn)錄水平與肝癌組織病理學(xué)對(duì)照

3 討論

原發(fā)性肝癌是消化系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，流行病學(xué)研究表明，肝細(xì)胞癌已經(jīng)成為嚴(yán)重危害人類(lèi)生命的主要疾病，但是其發(fā)病機(jī)制尚不明了，其發(fā)生、發(fā)展是一個(gè)涉及多基因的表達(dá)過(guò)程。CIP2A是近年來(lái)被識(shí)別的一種癌蛋白，可以抑制PP2A對(duì)c-Myc的絲氨酸的脫磷酸化作用，同時(shí)c-Myc作為核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子調(diào)節(jié)其轉(zhuǎn)錄水平的變化，形成一個(gè)反饋環(huán)路[4]。本研究表明，CIP2A在人肝癌組織中有高表達(dá)，肝癌組織的陽(yáng)性率明顯高于癌周組織，在正常肝組織中未見(jiàn)表達(dá)，同時(shí)CIP2A表達(dá)量與癌病理組織學(xué)關(guān)系密切，提示CIP2A與肝癌的惡性生物學(xué)特性相關(guān)[5-6]，可能參與肝癌的發(fā)展及浸潤(rùn)過(guò)程，為進(jìn)一步研究CIP2A與肝癌的發(fā)展，提示其具有調(diào)節(jié)機(jī)制，為肝癌的早期診斷提供了新思路。CIP2A在肝癌組織中表達(dá)較高，有特異性，與肝癌的病理特征有相關(guān)性，可以作為預(yù)測(cè)肝癌組織診斷、治療的分子標(biāo)記物[7-8]。

[1] 范永衛(wèi)．hTERT、c-myc、Ki-67在肝癌組織中的表達(dá)及意義[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2009，25（4）：338-340．

[2] Vita M，Henriksson M.The Myc oncoprotein as a therapeutic target for human cancer[J].Semin Cancer Biol，2009，16（4）：318-330.

[3] 秦艷茹，李永欣，王立東，等.食管癌和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織中c-myc，hTERT和c-MET蛋白的表達(dá)[J].鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2010，41（1）：34-36.

[4] 李靜，樸云峰，蔣政，等.Survivin基因在人原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá)及其意義 [J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2008，34（3）：495-498.

[5] 游經(jīng)宏，周凱，黃品助，等. CIP2A在肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義[J].中華肝膽外科雜志，2011，17（3）：75-76.

[6] 楊雪，宋濤，楊威，等.CIP2A在肝癌組織中的表達(dá)及其臨床意義[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2011，32（4）：71-72.

[7] 董千澤，王恩華.CIP2A在非小細(xì)胞肺癌中過(guò)表達(dá)并且促進(jìn)肺癌細(xì)胞增殖[C].中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)2009年學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編，西安：中華醫(yī)學(xué)會(huì)病理學(xué)分會(huì)，2009：321-322．

[8] 李靜，樸云峰，蔣政，等.Survivin基因在人原發(fā)性肝癌組織中的表達(dá)及其意義 [J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2009，34（3）：495-498.

Expression and clinical significance of CIP2A in liver cancer tissue

MAI Cong TANG Yunqiang HONG Jian TANG Kaiwen TANG Hui
Division Ⅱ of Abdominal Surgery,Cancer Hospital Affiliated Guangzhou Medical University,Guangzhou 510095,China

ObjectiveThe clinical significance of CIP2A expressed in liver cancer tissue is discussed in this paper.Methods80 cases with primary liver cancer,receiving a treatment from cancer hospital affiliated to Guangzhou medical university from July 2008 to August 2011,were selected as clinical data of this paper.CIP2A contents of liver cancer tissue,cancerous peripheral tissue and normal liver cancer tissue of these 80 cases were tested with RT-PCR,and also the relationship between CIP2A and liver cancer pathologic features was analyzed.ResultsAmong 80 cases,57 cases(71.2%) had positive CIP2A expression in liver cancer tissue;19 cases (23.8%) had positive CIP2A expression in cancerous peripheral tissue;CIP2A expression was not seen in normal tissue. CIP2A content had a close correlation with liver cancer diameter,tissue differentiation,and TNM staging.ConclusionCIP2A is highly expressed in liver cancer tissue,possesses specificity,and maintains an correlation with liver cancer pathologic features. Therefore,CIP2A can be used as molecular marker for diagnosis and treatment of liver cancer tissue.

Liver cancer tissue;Differentiation degree;CIP2A;Clinical significance;Immunohistochemistry

R735.7

A

2095-0616（2012）11-35-02

2012-03-15）