三七中黃酮類成分的研究進展

李 媛，李 強，姜 澤

(1.東營市藥品檢驗所，山東東營257091;2.吉林省食品藥品檢驗所，吉林長春130033)

三七［Panax pseudoginseng var notoginseng(Burk.)Hoo＆Tweng或Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen］為五加科人參屬植物，又名參三七、田七、山漆、滇三七、金不換等，分布于我國云南文山及廣西壯族自治區(qū)靖西等極小范圍內(nèi)，是我國傳統(tǒng)的名貴藥材之一［1］?！侗静菥V目》記載:三七“頗似人參之味”，“止血散血定散”，能治一切血癥。《本草綱目拾遺》稱“三七頗似人參，人參補氣第一，三七補血第一，味同而功亦同”。三七味甘、微苦，性溫，歸肝、胃經(jīng)，主要功能為散瘀止血，消腫定痛，用于咯血、吐血、衄血、便血、崩漏、外傷出血、胸腹刺痛、跌打腫痛等［2］。

三七化學(xué)成分的研究是從上世紀(jì)30年代開始的，80年代的大量研究表明，三七含有多種有效成分，皂苷為主要有效成分之一，具有多種生理活性;此外，三七還含有止血的有效成分三七素，以及多糖、氨基酸、揮發(fā)油、脂肪酸、植物甾醇、黃酮、脂肪族炔烴化合物及微量元素等［3～5］。目前對于三七皂苷的研究已經(jīng)非常深入，但對于黃酮類成分的研究卻非常少。本文對目前有關(guān)三七黃酮類成分的研究做一綜述，為以后進一步研究三七黃酮類成分提供參考。

1 三七中的黃酮類成分

黃酮類成分是廣泛存在于自然界的一大類化合物，是一類具有C6－C3－C6基本母核的天然產(chǎn)物。上世紀(jì)末魏均嫻等［6，7］從三七莖葉中首次分離得到一種黃酮醇苷，經(jīng)鑒定該黃酮醇苷為槲皮素－3－O－槐糖苷，從三七絨根中分離得到槲皮素(Quercetin)、山柰酚(Kaempferol)兩種黃酮醇類成分。之后關(guān)于三七黃酮類成分的研究沒有大的突破，也沒有再發(fā)現(xiàn)新的黃酮類成分。2004年鄭瑩［8］在其畢業(yè)論文中提到從三七莖葉中分離得到了7種黃酮類成分，并利用IR、UV、MS、1H－NMR、13C－NMR等現(xiàn)代光譜學(xué)手段輔以其他的定性方法鑒定出了6種黃酮類化學(xué)成分的結(jié)構(gòu)。它們分別是山柰酚(Kaempferol)，山柰酚 －3－O－β－D－半乳糖苷(Kaempferol 3－O－β－D－galactopyranoside)，山柰酚 －3－O－β－D－半乳糖(2→1)葡萄糖苷［Kaempferol 3－O－(2``－β－D－glucpyranosyl)－β－D－galactopyranoside］，山柰酚－7－O－α－L－鼠李糖苷(Kaempferol 7－O－α－L－rhamnoside)，槲皮素(Quercetin)，槲皮素－3－O－β－D－半乳糖(2→1)葡萄糖苷［Quercetin 3－O－(2``－β－D－glucpyrano-syl)－β－D －galactopyranoside］。除山柰酚和槲皮素之外，其余化合物皆是首次從三七莖葉中分離得到。

結(jié)構(gòu)式如圖1，表1。

圖1 三七黃酮類成分的母核

表1 三七黃酮類各結(jié)構(gòu)式對應(yīng)成分名稱

2 三七黃酮類成分的提取、分離、純化的研究

2.1 三七黃酮類成分的提取 由于各種黃酮類化合物在植物體中存在的部位不同，結(jié)合的狀態(tài)也可能不一樣。在花、葉、果等組織中主要以苷的形式存在，在木部的堅硬組織中則多為非苷類的游離狀態(tài)，即苷元或黃酮配糖基形式。根據(jù)黃酮類成分在植物中的不同部位采取不同的提取方法，由植物的心材中提取黃酮類成分，可以用乙醚或石油醚為溶劑直接提取;由植物的樹皮或根中提取黃酮類成分，多采用脂溶性溶劑提取后再用極性溶劑提取;由植物花、果或葉中提取黃酮類成分(多含苷類)，常用水或乙醇為溶劑進行提取，為了比較方便的除去伴存的葉綠素雜質(zhì)，減少對黃酮苷類精制的困難，一般多用熱水自原料中提取。三七中黃酮類成分的提取方法主要有以下幾種方法:

2.1.1 溶劑提取法 魏均嫻等［7］從三七絨根中提取出三七黃酮，主要用乙醇對三七絨根進行提取，得乙醇提取物再加熱水溶解，溶于熱水部分加入堿式醋酸鉛溶液使之沉淀，得沉淀物混懸于水中加入稀硫酸脫鉛，脫鉛后的水溶液上聚酰胺層析柱，用20%乙醇洗脫，得三七黃酮A部分和黃酮B部分。黃酮A部分硅膠柱層析，用三氯甲烷－甲醇(98∶2)洗脫得槲皮素;黃酮B部分溶于丙酮，反復(fù)除去丙酮不溶物，進行硅膠柱層析，三氯甲烷－甲醇(85∶15)洗脫得三七黃酮B。三七黃酮B的化學(xué)結(jié)構(gòu)還有待于進一步研究。

2.1.2 堿水提取法 張志信［9］對堿水提取的pH值、溫度、液料比以及提取時間進行了正交實驗，最終優(yōu)化出堿水提取三七總黃酮的條件。用pH=10的稀堿液做溶劑，液料比為30∶1，浸提溫度為80℃，提取兩次，每次40 min。采取此工藝提取三七黃酮類成分成本低，易于工業(yè)化生產(chǎn)。

2.1.3 微波－堿水提取法 工藝參數(shù):pH=8、微波功率為中檔、液料比為1 g∶40 mL、微波作用時間為10 min、提取2次。張志信等［9］做了微波－堿水提取法和堿水提取法的比較實驗，得出微波－堿水提取法的提取率遠遠高于堿水提取法，主要是因為微波處理可以提高細胞的破壁率，從而使黃酮類化合物的提取率大幅度上升。但是這種方法不適合工業(yè)化生產(chǎn)。

2.2 三七黃酮類成分的分離及純化 黃酮類化合物分離純化的方法主要有大孔樹脂吸附法、各種柱層析法、HPLC法、離心薄層層析法、制備薄層層析法、紙層層析法和超臨界色譜法等［10］。

2.2.1 大孔樹脂分離純化法 大孔吸附樹脂具有物理化學(xué)穩(wěn)定性高、吸附選擇性獨特、吸附容量大、解吸容易、機械強度高、耐污染、流體阻力小、可以多次反復(fù)使用、再生比較容易、節(jié)省費用等特點。廣泛用于工業(yè)脫色、廢水處理、藥物分析、臨床鑒定、抗生素及生化物質(zhì)的分離純化等領(lǐng)域［11～13］。

大孔樹脂是20世紀(jì)60年代發(fā)展起來的一種新型吸附劑，它是一類不含交換基團且具有大孔結(jié)構(gòu)的分離材料。具有很好的大孔網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)和較大的比表面積，通過物理吸附從溶劑中有選擇的吸附有機物質(zhì)，從而達到分離的目的［14］。

AB－8大孔吸附樹脂為聚苯乙烯型，弱極性聚合物吸附劑，研究表明AB－8樹脂對黃酮類物質(zhì)的分離、富集能力較好［15］。

通過測定分析3種吸附樹脂對三七黃酮的吸附特性綜合考慮多方面因素，AB－8樹脂具有適當(dāng)孔徑、較高比表面積、較大比重、三七黃酮吸附量大、解吸容易、吸附后浸膏黃酮含量高等特點，其性能優(yōu)于其他幾種樹脂。AB－8樹脂是一種性能良好的三七黃酮吸附劑。為使樹脂吸附法成功的應(yīng)用于三七黃酮的生產(chǎn)，除選用性能優(yōu)良(特別是增大對黃酮的選擇性吸附)的吸附劑外，還要配合最佳的工藝條件，才能取得最佳的分離效果［16］。

2.2.2 柱層析分離純化法

2.2.2.1 聚酰胺分離純化法 聚酰胺(polyamide)是通過酰胺基聚合而成的一類高分子化合物。自20世紀(jì)90年代發(fā)現(xiàn)聚酰胺對酚性物質(zhì)的層析分離性能后，首先應(yīng)用于黃酮、酚類等天然產(chǎn)物的分離。目前，聚酰胺層析是分離黃酮苷及黃酮苷元的最有效的方法［17］。因此，三七黃酮類成分的分離純化多用聚酰胺法。

2.2.2.2 其他柱層析法 硅膠柱層析法，此方法的應(yīng)用范圍最廣，不僅可以分離黃酮苷，也可以分離各種黃酮苷元［18］。葡聚糖凝膠柱層析，主要是靠分子篩作用分離黃酮苷類，在洗脫時，一般按分子大小順序洗出柱體。李文魁等［19］用此法從朝鮮淫羊藿地上部分分離得到2種黃酮苷類化合物。

2.2.3 其他方法 應(yīng)用HPLC法、離心薄層層析法、制備薄層層析法、紙層層析法和超臨界色譜法分離黃酮苷及其苷元的實驗有很多，但是沒有上述兩種方法常用，而且大孔樹脂法和柱層析法使用方便成本較低。

3 三七黃酮類成分的藥理研究

三七黃酮類成分能直接擴張動脈血管，增強心肌收縮力和穩(wěn)定心率，改善血循環(huán)及防治血栓等［20］。另有實驗表明三七黃酮類成分能對抗垂體后葉素引起的T波改變，因此，可以對缺血心肌起到保護作用［21］。魏均嫻等［7］指出三七黃酮類成分與皂苷合用，生理活性最強，分開使用則證明黃酮類成分能顯著增加心肌冠脈流量。槲皮素對P388白血病細胞有一定活性［22］。槲皮素不僅對多種致癌劑、促癌劑有拮抗作用，而且可以抑制多類惡性腫瘤細胞的生長［23］。

三七黃酮類成分對人肝癌SMMC－7721有一定的抑制作用，并呈時間及劑量依賴性關(guān)系。三七莖葉黃酮類成分可以改變SMMC－7721細胞的周期分布，即G1期細胞百分率有所下降，S期百分率增加，動員SMMC－7721由G0/G1期進入S期，使細胞堆積，阻止S期細胞進入G2/M期，從而抑制細胞增殖［9］。

4 小結(jié)與討論

三七是我國的傳統(tǒng)中藥材之一，由于三七中黃酮類成分含量過少，所以研究的很少更沒有將其開發(fā)成為商品。三七黃酮類成分含量低，若要單獨以黃酮類成分作為目標(biāo)產(chǎn)物單一的開發(fā)三七黃酮類成分，必將會使成本大幅度提高，而且會造成資源浪費。因此，要考慮在開發(fā)三七皂苷的同時來開發(fā)三七黃酮類成分。王興文教授的水提三七皂苷工藝已經(jīng)非常成熟，并且實現(xiàn)了產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)［24］。若要在該水提工藝基礎(chǔ)上來開發(fā)三七黃酮類成分會使成本降低，并且容易實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，也為三七黃酮類成分開發(fā)成藥品、保健品及化妝品提供保證。

［1］熊輔信，寸樹芬.現(xiàn)代中藥研究薈萃［M］.第1版.昆明:云南科技出版社，2002:202－208.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2005年版(一部)［S］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

［3］李琦，葉蘊華，邢其毅.三七水溶性化學(xué)成分及其藥理研究新進展［J］.高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報，1996，17(2):1886－1892.

［4］林琦，趙霞，劉鵬，等.三七脂溶性化學(xué)成分的研究［J］.中草藥，2002，33(6):13 －15.

［5］饒高雄，王興文，金文.三七總皂苷中的聚炔醇成分

［J］.中藥材，1997，20(6):298 －299.

［6］魏均嫻，王菊芬.三七葉黃酮類成分的研究［J］.中國中藥雜志，1987，11:33 －35.

［7］魏均嫻，王菊芬，張良玉，等.三七的化學(xué)研究——Ⅰ.三七絨根的成份研究［J］.藥學(xué)學(xué)報，1980，15(6):359－364.

［8］鄭瑩.三七莖葉黃酮成分的研究［D］.長春:吉林大學(xué)，2004.

［9］張志信.三七莖葉中黃酮類化合物初步研究［D］.重慶:重慶大學(xué)，2005.

［10］渠桂榮，郭海明.黃酮苷類化合物分離鑒定的研究進展［J］.中草藥，2000，31(4):72 －74.

［11］米靖宇，宋純清.大孔吸附樹脂在中草藥研究中的應(yīng)用進展［J］.中成藥，2001，23(12):58 －61.

［12］王躍生，王洋.大孔吸附樹脂研究進展［J］.中國中藥雜志，2006，12:961 －965.

［13］崔九成，蒙躍龍，楊鈞.大孔樹脂分離葛根總黃酮研究［J］.西北藥學(xué)雜志，1999，14(4):154 －155.

［14］李平華，王興文.大孔吸附在中藥有效成分分離純化中的研究進展［J］.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2003，26(3):43－46.

［15］徐家毅，郭賢權(quán).大孔樹脂孔結(jié)構(gòu)的測定［J］.高分子通報，1999，2:54 －62.

［16］聶麗，羅萬芳，王興文.大孔樹脂分離純化三七黃酮類成分研究［J］.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2007，30(1):10－12.

［17］中國科學(xué)院上海藥物研究所.中草藥有效成分提取與分離［M］.上海:上海科學(xué)技術(shù)出版社，1983:107－110.

［18］姚新生.天然藥物化學(xué)［M］.第2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，1997:201.

［19］李文魁，肖培根，廖矛川，等.朝藿苷E的分離和結(jié)構(gòu)［J］.高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報，1995，16(12):1892 －1895.

［20］魏均嫻，杜元沖.三七——現(xiàn)代科學(xué)研究及應(yīng)用［M］.昆明:云南科技出版社，1996.

［21］顏正華.中藥學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，1999:729.

［22］毛雪石.黃酮類化合物的抗腫瘤活性［J］.國外醫(yī)學(xué)(藥學(xué)分冊)，1995，22(2):92 －96.

［23］孔令泉.槲皮素抗腫瘤作用的研究進展［J］.四川醫(yī)學(xué)，1999，20(1):56 －58.

［24］王興文.水提三七總苷［J］.云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2001，24(3):1－3.