復(fù)方氫氯噻嗪片劑的質(zhì)量控制

鄧紫薇，盧 欣，李美珍，房志仲

（天津醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥劑學(xué)教研室，天津市臨床藥物關(guān)鍵技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，天津300070）

纈沙坦（valsartan）是一個(gè)非肽類(lèi)口服有效的特異性血管緊張素…受體拮抗劑，對(duì)AT1受體亞型有高親和力。臨床應(yīng)用時(shí)不影響高血壓患者的總膽固醇、甘油三酯、血糖和尿酸水平[1]，同時(shí)不影響心率。若突然終止其治療，不引起高血壓“反跳”或其他副作用[2]。氫氯噻嗪(hydrochlorothiazide)為噻嗪類(lèi)利尿劑，屬于中效利尿劑。它影響電解質(zhì)在腎小管中的再吸收，導(dǎo)致鈉和氯排泄增加，使得降低血漿量。氫氯噻嗪主要作用于遠(yuǎn)曲小管和集合管，通過(guò)阻斷Na+-Cl-共轉(zhuǎn)運(yùn)體，阻礙NaCl的重吸收而產(chǎn)生利尿作用[3]。兩藥聯(lián)用能降低藥物毒性和副作用，維持穩(wěn)定、持久的血藥濃度，提高療效，提高高血壓患者的適應(yīng)性。復(fù)方氫氯噻嗪片劑的研制可以使患者用藥方便，減輕患者用藥的成本，提高順應(yīng)性，以達(dá)到良好的治療效果。為控制本品的質(zhì)量，分別以纈沙坦和氫氯噻嗪為指標(biāo)，采用HPLC法建立制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

1 材料與方法

1.1 儀器 高效液相色譜儀（Spectra-Physics，美國(guó)），Spectra Focus紫外檢測(cè)器，輸液泵SP8810，色譜柱KromasilC18（Φ200mm×4.6mm，5μm），Anastar色譜工作站，紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（U3310 Spectrophotometer HitachiHigh-TechologiesCorporation），2DY-…-…IKVA型高精度單相交流穩(wěn)壓電源（國(guó)營(yíng)啟動(dòng)電訊廠），KQ-100B型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），ALC-210.4型電子分析天平（北京賽多利斯系統(tǒng)儀器有限公司），80-2B型臺(tái)式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器有限公司），微孔濾膜（Φ=13mm，孔徑0.45μm，天津市雙吉色譜儀器經(jīng)營(yíng)部）。

1.2 試藥 纈沙坦原料藥（浙江新賽科藥業(yè)，批號(hào)：100401），氫氯噻嗪原料藥（常州制藥廠有限公司，批號(hào)：090604），纈沙坦對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100651-200902），氫氯噻嗪對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：10309-0001），復(fù)方氫氯噻嗪片劑（自制），乙腈（天津市康科德科技有限公司，色譜純），其它試劑均為市售分析純，重蒸水（自制）。

1.3 方法

1.3.1 色譜條件的選擇 色譜柱：Kromasil-C18柱，（Φ200mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水-冰醋酸（500∶500∶1）；檢測(cè)波長(zhǎng)[4-5]：以流動(dòng)相為空白，用紫外分光光度計(jì)在200～400 nm掃描，發(fā)現(xiàn)兩種藥物的檢測(cè)波長(zhǎng)接近，在230 nm左右均有最大吸收，因此選擇230 nm為測(cè)定波長(zhǎng)；流速：0.5mL/min；進(jìn)樣量：20μL；柱溫：室溫。

1.3.2 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 分別以甲醇作溶劑，配制復(fù)方氫氯噻嗪片劑的溶液，纈沙坦、氫氯噻嗪的原料藥溶液及各種輔料的溶液。將所配溶液按照確定色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。

1.3.3 片劑含量測(cè)定方法[6-13]

1.3.3.1 對(duì)照品溶液的制備：精密稱(chēng)取纈沙坦標(biāo)準(zhǔn)品12.5mg，用流動(dòng)相稀釋定容至25mL量瓶中，濃度為500μg/mL，即為纈沙坦對(duì)照溶液。另精密稱(chēng)取氫氯噻嗪標(biāo)準(zhǔn)品12.5mg，用流動(dòng)相稀釋定容至10mL，濃度為125μg/mL，即為氫氯噻嗪對(duì)照溶液。

1.3.3.2 供試品溶液的制備：取20片樣品研細(xì)后，精密稱(chēng)定260mg（相當(dāng)于纈沙坦64mg），放入100mL棕色量瓶中，用流動(dòng)相稀釋?zhuān)?0min，靜置至室溫，用流動(dòng)相稀釋定容。取一定量的溶液，2 000 r/min離心5min后取上清液，用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾。取續(xù)濾液0.5mL至10mL棕色量瓶中，用流動(dòng)相稀釋定容，即得纈沙坦供試品。另取20片樣品研細(xì)后，精密稱(chēng)定260mg（相當(dāng)于氫氯噻嗪5mg），樣品處理過(guò)程與纈沙坦供試品相同，最終取續(xù)濾液2mL轉(zhuǎn)移至10mL棕色量瓶中，用流動(dòng)相稀釋定容至刻度，即得氫氯噻嗪供試品。

1.3.3.3 檢測(cè)限、定量限的測(cè)定：將纈沙坦、氫氯噻嗪對(duì)照品用流動(dòng)相溶解配制成溶液，藥物信號(hào)強(qiáng)度為S，噪音強(qiáng)度為N，記錄S/N=3時(shí)對(duì)照品溶液的濃度為檢測(cè)限，S/N=10時(shí)對(duì)照品溶液的濃度為定量限。

1.3.3.4 線性關(guān)系考察：按照“1.3.3.2”項(xiàng)下分別取纈沙坦供試品 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mL，用流動(dòng)相稀釋定容至10mL，濃度分別為10、15、20、25、30、35、40 μg/mL，分別進(jìn)樣 20 μL，測(cè)定峰面積，對(duì)纈沙坦線性關(guān)系進(jìn)行考察。另按照“1.3.3.2”項(xiàng)下分別取氫氯噻嗪 0.04、0.06、0.08、0.10、0.12、0.14、0.16mL用流動(dòng)相稀釋定容10mL，濃度分別為5、7.5、10、12.5、15、17.5、20 μg/mL，分別進(jìn)樣 20 μL，測(cè)定峰面積，對(duì)氫氯噻嗪線性關(guān)系進(jìn)行考察。

1.3.3.5 精密度：按照“1.3.3.2項(xiàng)下方法處理片劑，所得溶液按照“1.3.1”項(xiàng)下色譜條件同一天內(nèi)平行進(jìn)樣6次，計(jì)算RSD值，得到日內(nèi)精密度。連續(xù)進(jìn)樣6 d，計(jì)算RSD值，得到日間精密度。

1.3.3.6 穩(wěn)定性：按照“1.3.3.2”項(xiàng)下方法處理片劑，所得溶液分別于 0、3、6、9、12、24 和 48 h 進(jìn)樣，計(jì)算RSD值。

1.3.3.7 重現(xiàn)性：按照“1.3.3.2”項(xiàng)下方法處理片劑，纈沙坦的樣品溶液濃度為32μg/mL，氫氯噻嗪的樣品濃度為10μg/mL，溶液在確定色譜條件下重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算RSD值。

1.3.3.8 回收率：按照纈沙坦處方量加入輔料，加入一定量的流動(dòng)相溶解后分別加入3.2mL、4.0mL、4.8 mL的 16.0 mg/mL的母液作為 80%、100%、120%的回收率試驗(yàn)的溶液。按照“1.3.3.2”項(xiàng)下處理纈沙坦供試品溶液方法進(jìn)行提取，得到3種不同濃度的溶液。按照“1.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積(A)，根據(jù)外標(biāo)一點(diǎn)法，計(jì)算濃度，并將測(cè)得值與加入值比較，計(jì)算纈沙坦回收率。另按照氫氯噻嗪處方量加入輔料，加入一定量的流動(dòng)相溶解，分別加入 4.0mL、5.0mL、6.0mL的 1.0mg/mL的母液作為80%、100%、120%的回收率試驗(yàn)的溶液。與纈沙坦回收率測(cè)定及計(jì)算方法相同，計(jì)算氫氯噻嗪回收率。

1.3.3.9 含量測(cè)定：分別按照“1.3.3.2”項(xiàng)下方法處理片劑，按照“1.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積(A)，按照外標(biāo)一點(diǎn)法，計(jì)算濃度，分別測(cè)定纈沙坦及氫氯噻嗪的含量。

2 結(jié)果

2.1 分離效果 按照HPLC測(cè)定法及相應(yīng)濃度，繪制色譜圖，見(jiàn)圖1～4。由圖可知，在該液相條件下纈沙坦、氫氯噻嗪分離度良好，且輔料對(duì)二者無(wú)干擾。

2.2 檢測(cè)限、定量限 纈沙坦的檢測(cè)限為0.38 ng，定量限為0.64 ng；氫氯噻嗪的檢測(cè)限為0.20 ng，定量限為0.40 ng。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線 按“1.3.3.4”條件測(cè)定，以峰面積(A)對(duì)濃度（C）做線性回歸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，纈沙坦和氫氯噻嗪回歸方程分別為：Y=31 028X+4 489.3（r=0.999 6，n=9）和 Y=40 626X+10 347（r=0.999 2，n=9）。結(jié)果表明，纈沙坦在10～40μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性良好，氫氯噻嗪在5～20μg/mL的濃度范圍內(nèi)線性良好。

2.4 精密度 纈沙坦的日內(nèi)精密度試驗(yàn)RSD值為0.59%，日間精密度試驗(yàn)RSD值為0.44%；氫氯噻嗪的日內(nèi)精密度試驗(yàn)RSD值為0.33%，日間精密度試驗(yàn)RSD值為0.90%，結(jié)果表明，方法重現(xiàn)性良好，均小于2%，符合規(guī)定。

2.5 穩(wěn)定性 纈沙坦穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD值為0.23%，氫氯噻嗪穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD值為0.39%，結(jié)果表明供試品溶液在48 h內(nèi)基本穩(wěn)定，均小于2%，符合規(guī)定。

2.6 重現(xiàn)性 纈沙坦重現(xiàn)性試驗(yàn)RSD值為0.55%，氫氯噻嗪重現(xiàn)性試驗(yàn)RSD值為1.74%，表明樣品溶液中兩種藥物重現(xiàn)性良好，均小于2%，符合規(guī)定。

2.7 回收率 纈沙坦和氫氯噻嗪的回收率均在98.00%～102.00%之間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2%，符合規(guī)定，測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1～2。

表1 纈沙坦回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)Tab1 Resultsof recovery testof valsartan(n=9)

表2 氫氯噻嗪回收率試驗(yàn)(n=9)Tab2 Resultsof recovery testof hydrochlor othiazide(n=9)

2.8 含量測(cè)定 結(jié)果見(jiàn)表3。根據(jù)2010年版《中國(guó)藥典》（二部）規(guī)定，纈沙坦含量應(yīng)在90.00%～110.00%之間，氫氯噻嗪含量應(yīng)在93.00%～107.00%之間，本試驗(yàn)測(cè)得復(fù)方氫氯噻嗪片劑中纈沙坦的平均含量為94.55%，氫氯噻嗪的平均含量為96.63%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2%，符合要求。

表3 纈沙坦、氫氯噻嗪含量測(cè)定結(jié)果(n=3)Tab3 Content determ ination ofvalsartan and hydrochlorothiazide

3 討論

3.1 增大第1次的稀釋倍數(shù) 試驗(yàn)過(guò)程中，分別稱(chēng)取樣品于50mL和100mL量瓶中，加流動(dòng)相稀釋。結(jié)果表明：稀釋至100mL量瓶中的樣品纈沙坦提取較完全，含量明顯高于稀釋至50mL。

3.2 超聲時(shí)間 試驗(yàn)過(guò)程中，分別選擇超聲5min、10min、20min，結(jié)果表明：超聲20min的纈沙坦的含量高于其他兩種方法，由此可見(jiàn)超聲時(shí)間越長(zhǎng)樣品中纈沙坦提取越充分。

3.3 改變?nèi)軇?選擇乙腈、甲醇、乙腈∶甲醇=1∶1、乙腈∶水=1∶1、乙腈∶水=8∶2、丙酮、丙酮∶水=1∶1、流動(dòng)相分別為提取溶劑。結(jié)果顯示乙腈、甲醇、丙酮為提取溶劑時(shí)，對(duì)纈沙坦主峰有干擾，其他幾種提取溶劑提取率無(wú)差異，為了試驗(yàn)的方便，因此選擇流動(dòng)相為提取溶劑。

3.4 色譜條件的選擇 以乙腈-水-冰醋酸（500:500:1）為流動(dòng)相可以作為分析氫氯噻嗪和纈沙坦的流動(dòng)相，因兩種藥物的檢測(cè)波長(zhǎng)接近，選擇λ=230nm。

本試驗(yàn)建立了高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方氫氯噻嗪片劑中各主藥的含量。結(jié)果顯示本試驗(yàn)方法簡(jiǎn)便可行、重復(fù)性好，適用于復(fù)方氫氯噻嗪片劑的質(zhì)量控制。

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