毛泡桐皮黃酮提取物抗氧化作用研究

中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院 王占斌 趙德明

鄭州鐵路職業(yè)技術(shù)學(xué)院 劉 紅 毛 薇

黃酮類化合物又稱黃酮體，是自然界存在的一類多酚類物質(zhì)，屬于植物次級(jí)代謝產(chǎn)物，在植物的葉、根、皮、花和果實(shí)中含量較高，具有多種生物活性，包括抗氧化、抗突變、抗衰老、抗腫瘤、抗菌等，其中最為重要的是抗氧化活性（李杰等，2011；Thomas，2004；Aiejandry 等，2003；Steean 和 Zeev，2003；Craig，1999；Kanazawa 等，1999）。 研究表明，毛泡桐花中含有大量黃酮類化合物活性成分，對(duì)豬油具有抗氧化作用（孟志芬等，2008；杜欣和師彥平，2004）。而毛泡桐皮中活性成分黃酮的抗氧化性研究鮮報(bào)道。本試驗(yàn)研究了毛泡桐皮黃酮提取物的抗氧化作用，旨在為開發(fā)利用這一天然抗氧化劑提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 毛泡桐皮原粉、毛泡桐皮黃酮粗提物、毛泡桐皮黃酮純化物。豬油，新鮮豬板油切成小塊，低溫濕法熬制，雙層紗布過濾備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 毛泡桐皮黃酮提取物的制備 新鮮毛泡桐皮采自洛陽(yáng)市郊區(qū)，將30 kg毛泡桐皮洗凈后干燥，粉碎，過200目篩，即得毛泡桐皮原粉；將毛泡桐皮原粉用95%的乙醇提取。提取液在50～55℃溫度下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，至適量后，再用95%乙醇沉淀高分子化合物，過濾，濾液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，蒸發(fā)到一定濃度后，用真空干燥箱干燥，干燥后粉碎，即為毛泡桐皮黃酮粗提物；將毛泡桐皮黃酮粗提物用一定濃度的乙醇溶解，在30℃，溶液pH5～6，上樣液流速3 BV/h，上樣液用量為6 BV/次的條件下，用LS-303大孔吸附樹脂進(jìn)行吸附，然后用80%的乙醇解吸，解吸液經(jīng)濃縮、蒸干后即得毛泡桐皮黃酮純化物。

1.2.2 抗氧化指標(biāo)的測(cè)定

1.2.2.1 過氧化值 （POV）測(cè)定油脂在常溫下保存，酸敗的速度比較慢，為了縮短酸敗的時(shí)間，加速油脂的酸敗速度，本試驗(yàn)采用最經(jīng)典的方法——烘箱加溫法來加速油脂的酸敗。取毛泡桐皮提取物加入到50 g油脂中，充分?jǐn)嚢杈鶆蚝?，敞口放入?0±1）℃的恒溫箱中，每隔12 h攪拌一次，并交換各份豬油在烘箱中的位置，以確保環(huán)境條件相同。每隔48 h測(cè)定一次過氧化值，方法參照GB/T 601-2002方法測(cè)。

在錐形瓶中稱取2～3 g油樣，加入10 mL三氯甲烷溶解，再加入15 mL乙酸和1 mL碘化鉀飽和溶液迅速蓋好瓶塞，混勻溶液（1 min），避光靜置5 min。加入約75 mL蒸餾水，再加入0.5%淀粉溶液1 mL作為指示劑，用硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定析出的碘 （估計(jì)值小于12時(shí)用0.002 mol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液，大于12時(shí)用0.01 mol/L標(biāo)準(zhǔn)溶液），滴定過程要用力振搖，同時(shí)做3份平行樣（測(cè)定的同時(shí)要進(jìn)行空白試驗(yàn)，如果空白試驗(yàn)超過0.1 mL 0.01 mol/L硫代硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液應(yīng)更換不純的試劑）。

測(cè)定結(jié)果按下式計(jì)算：

式中，V1為用于測(cè)定的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；V0為用于空白的硫代硫酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，mL；c為硫代硫酸鈉標(biāo)定濃度，mol/L；m為試樣的質(zhì)量，g。

1.2.2.2 誘導(dǎo)期（IP）測(cè)定 氧化誘導(dǎo)期的測(cè)定方法能否客觀地反映底物的氧化誘導(dǎo)期的結(jié)束，對(duì)評(píng)價(jià)抗氧化劑的抗氧化活性也是非常關(guān)鍵的。本試驗(yàn)是通過過氧化值對(duì)時(shí)間的變化曲線 （POV-T曲線）來確定氧化誘導(dǎo)期。在氧化誘導(dǎo)期，過氧化值增長(zhǎng)非常緩慢，POV-T曲線很平。當(dāng)氧化誘導(dǎo)期快結(jié)束時(shí)，POV-T曲線出現(xiàn)一個(gè)拐彎，然后近似直線上升。其拐點(diǎn)即定義為氧化誘導(dǎo)期終點(diǎn)（王憲青等，2003； 翁新楚和吳候，2000；Jadhav等，1996）。國(guó)家食用油脂衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)對(duì)油脂的過氧化值有明確的規(guī)定：花生油、葵花油的過氧化值最大不能超過20 meq/kg；菜籽油、大豆油、棉籽油的過氧化值最大不能超過12 meq/kg；豬油的過氧化值最大不能超過 16 meq/kg（GB 2716-88，2005）。

1.2.2.3 抗氧化系數(shù)（PF）的計(jì)算 抗氧化劑的強(qiáng)弱是通過測(cè)定和比較其在加入油脂或含有油脂體系中后其氧化穩(wěn)定性增加的程度來確定的?？寡趸禂?shù)（oxidation protection factor，PF）的大小就是衡量抗氧化劑抗氧化活性的一個(gè)指標(biāo)，是指加入抗氧化劑后的氧化誘導(dǎo)期 （induction period，IPAntiox）除以未加入抗氧化劑（空白）的氧化誘導(dǎo)期（IPContr）：

PF=IPAntiox/IPContr；

抗氧化劑的PF值值愈高，說明其的抗氧化活性愈強(qiáng)。一般來說，PF=1，則該物質(zhì)無抗氧化活性；如果2≥PF＞1，則表明該抗氧化劑有抗氧化活性；如果3≥PF≥2，則表明該抗氧化劑有較強(qiáng)的抗氧化活性；如果PF＞3，則表明該抗氧化劑有抗氧化活性很強(qiáng)。

2 結(jié)果與討論

2.1 不同純度毛泡桐皮黃酮提取物對(duì)豬油的抗氧化能力 從表1可見，在相同濃度下，不同純度毛泡桐皮黃酮提取物的抗氧化能力具有顯著差異。毛泡桐皮黃酮純化物抗氧化能力最強(qiáng)，毛泡桐皮黃酮粗提物次之，毛泡桐皮原粉抗氧化能力最弱。主要因?yàn)樵谙嗤瑵舛认拢煌崛∥镏兴S酮的量不一樣，也充分證明了不同提取物抗氧化能力的大小是由黃酮含量的多少所決定的。

表1 不同純度毛泡桐皮黃酮提取物對(duì)豬油的抗氧化能力（POV值）

2.2 不同濃度毛泡桐皮黃酮純化物對(duì)豬油的抗氧化能力 從圖1可見，同一時(shí)間各種濃度毛泡桐皮黃酮純化物的POV值均小于空白值，說明，不同濃度毛泡桐皮黃酮的純化物均具有一定抗氧化能力?？瞻?、0.02%和0.04%的樣品在16 d就已經(jīng)達(dá)到氧化誘導(dǎo)期，而其他較高濃度樣品在26 d才達(dá)到氧化誘導(dǎo)期。

圖1 不同濃度毛泡桐皮黃酮提取物對(duì)豬油的抗氧化能力

將圖2中曲線進(jìn)行回歸分析，得到以下回歸模型。

空白值：y=0.091105·e0.419412x（R2=0.9944）

0.02%毛泡桐皮黃酮提取物：

y=0.000042·e0.885823x（R2=0.9904）

0.04%毛泡桐皮黃酮提取物：

y=0.000177·e0.778259x（R2=0.9736）

0.06%毛泡桐皮黃酮提取物：

y=0.466888·e0.160374x（R2=0.9940）

0.08%毛泡桐皮黃酮提取物：

y=0.864281·e0.119618x（R2=0.9986）

0.1%毛泡桐皮黃酮提取物：

y=0.998321·e0.110233x（R2=0.9931）

以上各回歸方程的相關(guān)系數(shù)R2均較高，說明回歸效果較好。根據(jù)回歸模型計(jì)算出油脂的誘導(dǎo)期和抗氧化系數(shù)，結(jié)果見表2。

表2 不同濃度毛泡桐皮黃酮純化物在豬油中的誘導(dǎo)期和抗氧化系數(shù)

從表2可見，不同濃度毛泡桐皮黃酮純化物的抗氧化系數(shù)均大于1，說明其均具有抗氧化能力，并且隨著濃度的增加抗氧化系數(shù)逐漸增大，說明，隨著濃度的增加抗氧化能力逐漸增強(qiáng)。其中0.1%毛泡桐皮黃酮的抗氧化系數(shù)大于2，說明其具有較強(qiáng)的抗氧化能力。

2.3 毛泡桐皮黃酮提取物的抗氧化性能與BHT和維生素C抗氧化性能的比較 結(jié)果見圖2。

根據(jù)圖2中曲線，得到以下回歸模型：

0.02%BHT：y=1.0908·e0.107713x（R2=0.9928）

0.05%維生素 C：y=0.00001·e0.655598x（R2=0.9827）

根據(jù)回歸模型計(jì)算0.02%BHT和0.05%維生素C的抗氧化系數(shù)，結(jié)果見表3。

表3 0.02%BHT和0.05%維生素C的抗氧化系數(shù)

從圖表2和表3可見，0.1%毛泡桐皮黃酮純化物的抗氧化能力與0.02%BHT的抗氧化能力相當(dāng)，0.06%毛泡桐皮黃酮純化物的抗氧化能力與0.05%維生素C的抗氧化能力相當(dāng)。

3 結(jié)論

3.1 在相同濃度下，不同純度毛泡桐皮黃酮提取物的抗氧化能力不同，毛泡桐皮黃酮純化物抗氧化能力最強(qiáng)，毛泡桐皮黃酮粗提物次之，毛泡桐皮原粉抗氧化能力最弱。

3.2 不同濃度毛泡桐皮黃酮的抗氧化能力不同，隨著濃度的增加抗氧化能力逐漸增大，并且它們之間存在著劑量效應(yīng)關(guān)系，0.1%毛泡桐皮黃酮的抗氧化系數(shù)大于2，具有較強(qiáng)的抗氧化能力。

3.3 毛泡桐皮黃酮的抗氧化能力與BHT和維生素C的抗氧化能力相比，0.1%毛泡桐皮黃酮純化物的抗氧化能力與0.02%BHT的抗氧化能力相當(dāng)，0.06%毛泡桐皮黃酮純化物的抗氧化能力與0.05%維生素C的抗氧化能力相當(dāng)。

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