固相萃?。瓪庀嗌V／三重四極桿質(zhì)譜法同時(shí)分析蔬菜中的50種農(nóng)藥殘留量

曹 慧，林珍珍，陳小珍，李祖光

（1.浙江省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢測(cè)研究院 食品檢測(cè)部，浙江 杭州310013；2.浙江工業(yè)大學(xué) 化學(xué)工程與材料學(xué)院，浙江 杭州310032）

自日本推出肯定列表以來，世界各國不斷增加進(jìn)出口農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)項(xiàng)目，最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)也日趨嚴(yán)格，農(nóng)藥殘留檢測(cè)已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)之一［1－5］.目前，農(nóng)藥殘留量測(cè)定的方法主要有氣相色譜法［6－9］、液相色譜法［10－11］、氣相色譜－質(zhì)譜法［12－13］、液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法［14－16］，而國家標(biāo)準(zhǔn)關(guān)于農(nóng)藥殘留量測(cè)定的方法主要為氣相色譜法和氣相色譜－質(zhì)譜法.氣相色譜技術(shù)和液相色譜技術(shù)對(duì)檢測(cè)樣品結(jié)果存在的假陽性難以確診；氣相色譜－單四極桿質(zhì)譜的選擇離子掃描技術(shù)采集的質(zhì)譜信息少，選擇性較差，結(jié)果存在著很大的不確定性；氣相色譜－離子阱二級(jí)質(zhì)譜為時(shí)間上的串聯(lián)，同時(shí)分析多組分化合物存在掃描速度受限的問題；氣相色譜法和氣相色譜－質(zhì)譜法中個(gè)別方法檢測(cè)低限不能完全滿足最高殘留限量的要求；液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法是近幾年興起的新技術(shù)，設(shè)備成本高，普及性較差.實(shí)驗(yàn)采用固相萃取－氣相色譜－三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)建立蔬菜中50種農(nóng)藥殘留的檢測(cè)方法，通過高通量離子傳輸性能、碰撞室零串?dāng)_技術(shù)和高選擇性反應(yīng)監(jiān)測(cè)技術(shù)，實(shí)現(xiàn)一次進(jìn)樣可以對(duì)蔬菜中的50種農(nóng)藥殘留進(jìn)行同時(shí)分析，且方法靈敏度高、選擇性好、檢出限低，完全能夠滿足歐盟、日本等國對(duì)蔬菜中農(nóng)藥殘留量的限定要求.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與試劑

農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品：甲胺磷、敵敵畏、氧樂果、久效磷、甲拌磷、α－六六六、樂果、β－六六六、五氯硝基苯、γ－六六六、二嗪農(nóng)、磷胺、百菌清、δ－六六六、乙草胺、2，4，4'－三氯聯(lián)苯、殺螟硫磷、2，2'，5，5'－四氯聯(lián)苯、馬拉硫磷、毒死蜱、對(duì)硫磷、三唑酮、三氯殺螨醇、2，2'，4，5，5'－五氯聯(lián)苯、丁草胺、p，p'－滴滴伊、2，3'，4，4'，5－五氯聯(lián)苯、p，p'－滴滴滴、o，p－滴滴涕、2，2'，3，4，4'，5－六氯聯(lián)苯、三唑磷、p，p'－滴滴涕、2，2'，4，4'，5，5'－六氯聯(lián)苯、聯(lián)苯菊酯、甲氰菊酯、三氟氯氰菊酯、2，2'，3，4，4'，5，5'－七氯聯(lián)苯、氯菊酯、氟氯氰菊酯、氯氰菊酯、氟氰戊菊酯、氟氨氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯、七氯、喹硫磷、噻嗪酮、甲霜靈、乙酰甲胺磷、甲基嘧啶磷，均購自農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研檢測(cè)所，質(zhì)量濃度均為100μg／mL.

農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置：分別移取農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品溶液0.1mL，用正己烷稀釋定容到10mL，配置成1μg／mL的農(nóng)藥混合標(biāo)準(zhǔn)液，再移取混合標(biāo)準(zhǔn)液0.1，0.5，1，2，5mL分別于10mL容量瓶中，用正己烷配置成混合標(biāo)準(zhǔn)系列，各農(nóng)藥系列質(zhì)量濃度均為10，50，100，200，500μg／L.

本實(shí)驗(yàn)所用有機(jī)試劑均為色譜純；新鮮黃瓜和蘿卜購于當(dāng)?shù)剞r(nóng)貿(mào)市場(chǎng).

1.2 儀 器

TSQ Quantum GC氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國Thermo Fisher Scientific公司制造.

1.3 樣品前處理

1.3.1 提 取

稱取10g試樣（精確至0.01g）于80mL離心管中，加入40mL乙腈，用均質(zhì)器15 000r／min勻漿提取2min，加入5g氯化鈉，再勻漿提取1min，將離心管放入離心機(jī)，在4 000r／min離心5min，移取上清液20.0mL（相當(dāng)于5g試樣量），待凈化處理.

1.3.2 凈 化

將上述20.0mL提取液過Envi－18固相萃取柱（500mg，6mL，購自 Dikma公司），用15mL乙腈洗滌Envi－18柱，收集的提取液和洗滌液在40℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約1mL.再將樣品濃縮液轉(zhuǎn)移至Envi－Carb和Sep－Pak氨丙基串聯(lián)柱，用2mLV（乙腈）∶V（甲苯）＝3∶1溶液洗滌樣液瓶三次，并將洗滌液移入柱中，并用25mLV（乙腈）∶V（甲苯）＝3∶1溶液洗滌串聯(lián)柱，收集所有洗滌液，于40℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約0.5mL.每次加入5mL正己烷在40℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，進(jìn)行溶劑交換兩次，最后定容至2mL，過0.45μm濾膜后供GC－MS／MS分析測(cè)定.

1.4 氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜分析

1.4.1 色譜條件

色譜柱：J＆W DB－5石英毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm×0.25μm）；升溫程序：90 ℃保持5min，以25℃／min升至180℃，再以5℃／min升至280℃，再以10℃／min升至300℃，保持2min；載氣為高純氦氣（99.999%），氦氣流速為1.0mL／min，進(jìn)樣口溫度為280℃.

1.4.2 質(zhì)譜條件

離子化模式為電子轟擊（EI）離子源；電離能量為70eV；離子源溫度為250℃，燈絲電流為50μA，GC－MS傳輸線溫度為280℃，Q2碰撞氣為 Ar（1.5mTorr）.

2 結(jié)果與討論

2.1 母離子和特征離子的選擇

本方法采用電子轟擊離子源模式，通過全掃描方式找出各種目標(biāo)化合物的母離子.再選擇Product掃描方式，調(diào)節(jié)碰撞能量，分別選取經(jīng)碰撞后所得豐度較高的兩個(gè)子離子作為定量和定性離子，并確定其最佳碰撞能量的電壓值，最終所選擇確定的母離子、子離子和碰撞能量等參數(shù)見表1.采用SRM模式，按上述實(shí)驗(yàn)條件對(duì)50種農(nóng)藥同時(shí)進(jìn)行GC－MS／MS分析，各目標(biāo)化合物的總離子流如圖1所示.

表1 50種農(nóng)藥的母離子、子離子和碰撞能量Table 1 Retention time，precursor ion，product ion and collision energy of 50pesticides

圖1 50種農(nóng)藥化合物的總離子流色譜圖Fig.1 Total ion chromatogram of 50pesticides

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

取質(zhì)量濃度分別為10，50，100，200，500μg／L的農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液，以峰面積（y）對(duì)相應(yīng)的50種農(nóng)藥的質(zhì)量濃度（x）作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出相應(yīng)的線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)，見表2.結(jié)果表明：測(cè)定的50種農(nóng)藥在10～500μg／L的濃度范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r在0.981 1～0.999 9之間.

2.3 方法的精密度

在空白的樣品中添加10μg／kg水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.3方法進(jìn)行預(yù)處理，重復(fù)進(jìn)樣測(cè)定6次，結(jié)果見表2.結(jié)果表明：6次平行檢測(cè)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差小于15%，說明重現(xiàn)性較好.

2.4 回收率、檢出限與定量限的確定

分別在陰性的黃瓜和蘿卜樣品中添加10μg／kg水平的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，按1.3方法進(jìn)行預(yù)處理，平行操作3次，進(jìn)行分析，各種農(nóng)藥的回收率見表2.結(jié)果表明：50種農(nóng)藥的回收率處于77.30%～116.91%之間，以3倍信噪比作為定性檢出限，10倍信噪比作為定量檢出限，各種農(nóng)藥的定性檢出限和定量檢出限見表2.實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：本方法完全可以滿足歐盟、日本等國對(duì)蔬菜中農(nóng)藥殘留量的限定要求.

表2 50種農(nóng)藥方法學(xué)驗(yàn)證參數(shù)Table 2 The methodology validation parameters of 50pesticides

續(xù)表2

2.5 樣品測(cè)定

本方法對(duì)青椒、茄子、黃瓜、四季豆、洋蔥等40批樣品進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果均未檢出上述農(nóng)藥殘留.

3 結(jié) 論

利用TSQ Quantum GC氣相色譜－三重四極桿質(zhì)譜儀，對(duì)蔬菜中的50種農(nóng)藥同時(shí)進(jìn)行分析.該方法具有簡(jiǎn)單快速，準(zhǔn)確度和精密度高，適用于各種蔬菜中農(nóng)藥多殘留量的檢測(cè)和確證.此外，三重四極桿質(zhì)譜能有效地消除假陽性的可能，從而保障了該方法對(duì)蔬菜中的多組分農(nóng)藥同時(shí)進(jìn)行分析的準(zhǔn)確性.

［1］OSMAN K A，AI－HUMAID A I，AI－REHIAYANI S M，et al.Estimated daily intake of pesticide residues exposure by vegetables grown in greenhouses in AI－Qassim region，Saudi Arabia［J］.Food Control，2011，22（6）：947－953.

［2］ROSA M G R，RAQUEL R O，BEATRIZ C G，et al.Determination of 23pesticide residues in leafy vegetables using gas chromatography－ion trap mass spectrometry and analyte protectants［J］.J Chromatogr A，2008，1196／1197（4）：100－109.

［3］沈偉健，余可垚，桂茜雯，等.分散固相萃?。瓪庀嗌V－串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜中107種農(nóng)藥的殘留量［J］.色譜，2009，27（4）：391－400.

［4］佟玲，李重九.含硫蔬菜中50種農(nóng)藥多殘留的氣相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)技術(shù)研究［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2008，27（9）：930－935.

［5］李愛軍，王明泰，牟峻，等.氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定糧谷中16種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量［J］.農(nóng)藥，2009，48（11）：823－826.

［6］MANIKANDAN N，SEENIVASAN S，GANAPATHY M N K G，et al.Leaching of residues of certain pesticides from black tea to brew［J］.Food Chemistry，2009，113（2）：522－525.

［7］汪娌娜，徐軍.氣相色譜法測(cè)定蔬菜中15種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留［J］.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（1）：63－64.

［8］陳國征，孫強(qiáng)，吳晶，等.固相萃取氣相色譜法測(cè)定杭白菊中7種菊酯類農(nóng)藥的研究［J］.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（1）：99－100.

［9］陳皚，周瑛，王萍亞，等.氣相色譜法測(cè)定蔬菜和水果中的有機(jī)磷殘留農(nóng)藥［J］.浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，32（5）：585－588.

［10］陳雁君，王艷，李寧，等.HPLC法測(cè)定小白菜中噻蟲胺農(nóng)藥殘留量的方法研究［J］.中國熱帶醫(yī)學(xué)，2009，9（2）：361－362.

［11］羅小玲，劉長勇.高效液相色譜法測(cè)定果蔬飲料中的克百威和甲萘威農(nóng)藥殘留［J］.食品科學(xué)，2009，30（8）：245－246.

［12］于維森，郝文，段海平，等.氣相色譜－質(zhì)譜選擇離子測(cè)定食品中33種農(nóng)藥和除草劑［J］.中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2009，19（3）：475－477.

［13］賀小雨，陳樹兵，俞雪鈞，等.冷凍去脂－固相萃?。瘹庀嗌V－質(zhì)譜法對(duì)水產(chǎn)品中禾草丹、溴氰菊酯及19種有機(jī)氯農(nóng)藥殘留的測(cè)定［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2009，28（3）：306－309.

［14］CHEN Guo－qiang，CAO Peng－ying，LIU Ren－jiang.A multiresidue method for fast determination of pesticides in tea by ultra performance liquid chromatography－electrospray tandem mass spectrometry combined with modified QuEChERS sample preparation procedure［J］.Food Chemistry，2011，125（4）：1406－1411.

［15］石杰，劉婷，劉惠民，等.液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定煙草中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留量［J］.化學(xué)通報(bào)，2010（1）：63－70.

［16］柳菡，徐錦忠，丁濤，等.蔬菜中26種農(nóng)藥殘留的高效液相色譜－串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定［J］.分析測(cè)試學(xué)報(bào)，2009，28（3）：181－185.