三九貼穴位貼敷對哮喘大鼠血清IL-10含量影響的實驗研究

郭冬梅，孫德昱

(新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院，烏魯木齊 830000)

支氣管哮喘是嚴重影響人們健康的常見病、多發(fā)病，嚴重影響人們的生活質(zhì)量，造成巨大的社會負擔和花費，已成為全球性的嚴重公共衛(wèi)生問題，并受到世界各國的極大關(guān)注［1］。中藥穴位敷貼療法在支氣管哮喘患者治療上臨床療效確切，且簡便、價廉及易操作。因此，本實驗旨在通過穴位貼敷療法探討對支氣管哮喘大鼠血清IL-10含量的影響和機理。

1 材料

1.1 動物

健康Wistar大鼠60只，雌雄各半，3月齡左右，體重250g±50g，實驗期間均以標準飼料喂養(yǎng)，自由飲水。大鼠由新疆維吾爾自治區(qū)疾病控制中心提供，雌雄大鼠分籠飼養(yǎng)，每籠5只，室溫控制在20℃～25℃，濕度控制在60%～75%，通風良好。實驗在新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)院藥理實驗室動物實驗中心(清潔級實驗室)進行。

1.2 藥物

三九藥膏由海螵蛸100g、白芷96g、白芥子96g、輕粉1.5g組成，中藥由新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)院藥劑科提供;各藥按比例研為細末，用姜汁和凡士林調(diào)制成膏狀備用(其中每個敷貼含干藥粉3g);醋酸地塞米松片(天津藥業(yè)集團新鄭股份有限公司，國藥準字H41021038);0.9%氯化鈉注射液(新疆華氏丹藥業(yè)股份有限公司，批號10111612)。

1.3 主要試劑

卵白蛋白(ovalbumin，OVA級)10g分裝，A-5253，保存－4℃(由新疆寶信銷售公司提供);氫氧化鋁粉劑(天津市致遠化學試劑有限公司);大鼠IL-10試劑盒(購自北京科美東雅生物技術(shù)有限公司)。

1.4 主要儀器

魚躍牌醫(yī)用超聲霧化吸入器(江蘇魚躍醫(yī)療設(shè)備股份有限公司)，KDC-1042高速冷凍離心機(新疆烏魯木齊市匯福源醫(yī)療器械公司)，安途2010酶標儀(新疆烏魯木齊市醫(yī)飛公司)，Thermo洗板機(新疆烏魯木齊市醫(yī)飛公司)。

2 方法

2.1 分組與給藥

將大鼠隨機分為正常組、模型組、陽性對照組(灌服地塞米松)、穴位貼敷低、中、高劑量組6組，每組10只。在大鼠的定喘、雙肺俞、雙膈俞穴位處帖敷，取穴定位參照《實驗針灸學》［2］。

(1)對照組(A 組):生理鹽水 10ml·kg－1·d－1灌胃，用生理鹽水浸紗布敷貼于相應(yīng)穴位處，每日1次，共 10d;(2)模型組(B 組):生理鹽水 10ml·kg－1·d－1灌胃，用生理鹽水浸紗布敷貼于相應(yīng)穴位處，用膠布固定，每日1次，共10d;(3)灌服地塞米松對照組(C 組):地塞米松 0.5mg·kg－1·d－1灌胃，生理鹽水浸紗布敷貼于相應(yīng)穴位處，用膠布固定，每日1次，共10d;(4)穴位貼敷三九貼膏高劑量治療組(D組):將三九藥貼制成 3cm×3cm大小，厚度為0.3cm，貼于背部相應(yīng)穴位處，用膠布固定，每日1次，每次1.5h，共10d;(5)三九貼膏中劑量治療組(E組):穴位貼敷隔日1次，每次1.5h共10d;(6)三九貼膏低劑量治療組(F組)穴位貼敷隔2d 1次，每次1.5h共10d。

2.2 檢測指標

采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)定量檢測組大鼠IL-10的含量。

3 統(tǒng)計方法

采用SPSS13.0軟件包進行統(tǒng)計學處理，各組實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(±s)表示，并對變量進行方差齊性檢驗，滿足正態(tài)性、方差齊性時兩兩樣本的比較采用student-T檢驗;多組均數(shù)比較用方差齊性檢驗，方差不齊時用秩和檢驗。檢驗水準α=0.05，P≤0.05為有統(tǒng)計學意義。

4 結(jié)果

與模型組比較，低劑量組血清 IL-10水平差異沒有統(tǒng)計學意義(P＞0.05);對照組、中、高劑量組及地塞米松組血清IL-10水平差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。與對照組比較，高劑量組及地塞米松組血清IL-10水平差異均無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);模型組和低、中劑量組血清IL-10水平差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。

表1 對血清IL-10水平的影響(±s，n=10)

表1 對血清IL-10水平的影響(±s，n=10)

注:1)與模型組比較:＊＊P＜0.01;2)與對照組比較:##P＜0.01

組別例數(shù) IL-10(μg/mL)對 照 組 10 2.32 ±0.39＊＊模 型 組 10 1.58±0.18##低 劑 量 組 10 1.66±0.08##中 劑 量 組 10 1.88 ±0.11＊＊##高 劑 量 組 10 2.05±0.16＊＊地 塞 米 松 組 10 2.13±0.11＊＊

5 討論

支氣管哮喘是一種氣道慢性變應(yīng)性炎癥性疾病，其氣道的變應(yīng)性炎癥與多種免疫細胞及其所產(chǎn)生的細胞因子有關(guān)。Borish等［3］觀察發(fā)現(xiàn)，哮喘患者BALF中IL-10的含量明顯低于正常對照組，并且證實IL-10的含量減少與其轉(zhuǎn)錄水平下降有關(guān)，檢測BALF或血液中的IL-10水平，可估計哮喘患者的病情及預(yù)后。IL-10是一種多效能的細胞因子，通過不同的途徑參與支氣管哮喘的發(fā)病并發(fā)揮網(wǎng)絡(luò)效應(yīng)，對于評價疾病的嚴重程度及預(yù)后具有重要意義。

穴位敷貼治療咳喘病是中醫(yī)學的傳統(tǒng)療法，源于《張氏醫(yī)通》白芥子涂法，沿用至今，療效顯著。我院老年病科用中藥外敷方治療哮喘，可減少發(fā)作次數(shù)，減輕發(fā)作程度并防止復(fù)發(fā)。其方藥由白芥子、白芷、海螵蛸、輕粉組成，具有辛溫散寒、化痰通絡(luò)的作用，加用姜汁調(diào)和以加強藥物溫經(jīng)通絡(luò)的作用及對穴位的刺激。肺俞屬于足太陽膀胱經(jīng)上的背俞穴之一，能疏風解表、宣肺理氣，可調(diào)肺氣、止咳喘、清虛熱、補勞損，調(diào)理肺臟功能?！夺樉馁Y生經(jīng)》曰:“因與人治哮喘，只繆肺俞，不繆他穴?！倍ù槠酱?，具有化痰、宣肺、平喘的功效，是治療哮喘的經(jīng)驗穴，也是緩解哮喘發(fā)作的有效穴位［4］。膈俞穴是足太陽膀胱經(jīng)的背部腧穴，有寬胸、理氣、降逆、平喘之功。

本實驗中，模型組大鼠血清IL-10水平明顯低于對照組(P＜0.01)，進一步證實支氣管哮喘的發(fā)病與血清IL-10密切相關(guān)，也可能與哮喘急性發(fā)作期某些活性介質(zhì)的抑制作用使IL-10的合成受阻有關(guān)。并進一步說明IL-10在支氣管哮喘發(fā)病中起著負向調(diào)節(jié)作用，也可以推斷IL-10的缺乏可能是導致哮喘發(fā)作的重要因素之一。中、高劑量組及地塞米松組血清IL-10水平與模型組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，提示中、高劑量組及地塞米松組均能升高血清IL-10水平;高劑量組及地塞米松組血清IL-10水平與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，提示高劑量組及地塞米松組不降低正常血清IL-10水平。因此，穴位帖敷緩解哮喘大鼠癥狀可能與升高血清IL-10水平有關(guān)，這也為今后的臨床工作提供了一定的思路。

［1］李明華，殷凱生，蔡映云.哮喘病學［M］.2版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2005，6:1.121.255-256.

［2］林文注，王佩.實驗針灸學［M］.上海:上海科學技術(shù)出版社，1999.

［3］Borish A，Laan M，Anderson GP.Neutrophils，interleukin-17A andlung disease［J］.Eur Respir J，2005，25(1):159-172.

［4］Poston，chanzep， lacoste， JY，et al. Immunohistoehemieal charavtericalion of the cellular infiltration inasthmatic bronchi Amrev Respir Dis，1992，145:918-921.