柴新鼻敏康對大鼠變應(yīng)性鼻炎的治療作用

柴江平，劉仁平，葛海生，王曉飛△，侯 琦

(1.中國中醫(yī)科學(xué)院 廣安門醫(yī)院，北京 100053;2.中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所＆北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院，北京 100050;3.中國人民武裝警察部隊藥品儀器檢驗所，北京 102613)

變應(yīng)性鼻炎是特應(yīng)性個體接觸致敏原后由IgE介導(dǎo)的介質(zhì)(主要是組胺)釋放，并有多種免疫活性細(xì)胞和細(xì)胞因子等參與的鼻黏膜慢性炎癥反應(yīng)性疾?。?］，臨床上以鼻癢、噴嚏、鼻分泌亢進(jìn)、鼻黏膜腫脹為主要特征。本研究以卵白蛋白(OVA)激發(fā)建立大鼠變應(yīng)性鼻炎(AR)模型，造模成功后，通過ELISA法檢測給藥前后主要炎癥因子IgE和IL-5水平的變化，研究并探討柴新鼻敏康對AR的潛在治療作用。

1.1 動物

雌性SD大鼠50只，體重180g～200g，由中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供(許可證編號SCXK-(軍)2007-004)。

1.2 藥物

柴辛鼻敏康是由柴胡、細(xì)辛、川芎等多味中藥加工而成的中藥制劑，給藥劑量為10 g/kg;磷酸鈉地塞米松注射劑 (Dexamethasone， DEX)購自天津藥業(yè)焦作有限公司(批號090325)，給藥劑量為1 mg/kg;千柏鼻炎片(廣州奇星藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號國藥準(zhǔn)Z44020750)，給藥劑量為10 g/kg;卵白蛋白、戊巴比妥鈉為美國Sigma公司產(chǎn)品。

1.3 試劑與儀器

主要試劑:Rat IgE ELISA試劑盒(BD Biosciences);Rat IL-5 ELISA試劑盒(BD Biosciences)。主要儀器:酶標(biāo)儀(美國，Bio-tek ELx800酶標(biāo)儀)

1.4 動物分組、模型制作及給藥

健康雌性SD大鼠50只，隨機(jī)分為正常對照組10只和造模組40只。造模組大鼠采用 OVA誘導(dǎo)致變應(yīng)性鼻炎模型，具體如下:OVA 1 mg，氫氧化鋁(Al(OH)3)10 mg與生理鹽水1 ml混合后，腹腔注射1ml/只/次進(jìn)行初次免疫，正常對照組的大鼠腹腔注射Al(OH)310mg與生理鹽水1ml混合液。第10天重復(fù)上述步驟1次以加強(qiáng)免疫;致敏2周后，再將造模組大鼠隨機(jī)分為模型組、地塞米松(DEX)組、千柏鼻炎片組和柴辛鼻敏康組4組，每組10只。隨后造模組大鼠均給予5%OVA滴鼻100 μL(鼻雙側(cè)/d)，連續(xù)7d，滴鼻誘發(fā)變應(yīng)性鼻炎。7d后，地塞米松(Dex)組、千柏鼻炎片組以及柴辛鼻敏康組的大鼠分別灌胃給予地塞米松、千柏鼻炎片混懸液、柴辛鼻敏康混懸液，連續(xù)給藥10d，正常對照組大鼠灌胃等體積蒸餾水。

1.5 指標(biāo)檢測

1.5.1 行為學(xué)指標(biāo)檢測 于末次滴鼻發(fā)敏后即刻(0h)、1h、2h進(jìn)行動物模型行為學(xué)觀察，搔鼻動物、噴嚏、鼻溢液和覓食行為各項指標(biāo)均采用疊加量化記分法。記分標(biāo)準(zhǔn):鼻癢:輕搔鼻1～2次為1分，劇烈搔抓鼻4周2分;噴嚏:1～4個為1分，4～10個2分，＞10個3分;鼻涕:流至鼻孔為 1分，超出前鼻孔為2分，涕流滿面3分。

1.5.2 大鼠血清中IgE、IL-5含量的檢測 給藥結(jié)束后，將大鼠以45mg/kg劑量的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉，腹主動脈取血。血液靜置20 min后，以2000r/min轉(zhuǎn)速離心取上清液，－80℃保存?zhèn)溆?。根?jù)試劑盒說明書，采用ELISA法檢測血清中IgE、IL-5的含量。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 柴新鼻敏康對變應(yīng)性鼻炎大鼠行為學(xué)特征的影響

表1顯示，動物行為觀察結(jié)果可見，與正常對照組相比，卵白蛋白(OVA)刺激后，模型組大鼠表現(xiàn)出鼻癢、打噴嚏等較明顯的變應(yīng)性鼻炎特征。相對模型組大鼠，地塞米松組和柴新鼻敏康組大鼠鼻癢、打噴嚏等行為有所緩解。行為學(xué)特征疊加量化記分統(tǒng)計結(jié)果顯示，柴新鼻敏康和地塞米松具有一定的抑制鼻炎效果，且具有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 行為學(xué)特征疊加量化記分統(tǒng)計結(jié)果(±s)

表1 行為學(xué)特征疊加量化記分統(tǒng)計結(jié)果(±s)

注:與正常對照組比較:＊＊P＜0.01;與模型組比較:△P＞0.05，△△P＜0.01

組別 0h 1h 2h正 常 對 照 組 0.40±0.74 0.00±0.00 0.00±0.00模 型 組 2.20 ±0.78＊＊ 1.30 ±1.15＊＊ 1.40 ±0.96＊＊地 塞 米 松 組 0.70±1.03△△ 0.00±1.03△△ 0.80±0.00千 柏 片 組 1.40±1.13 0.40±0.78 1.10±1.06柴新鼻敏康組 1.00±1.09△ 0.2±0.40△△ 0.00±0.00△△

2.2 柴新鼻敏康對變應(yīng)性鼻炎大鼠血清IgE水平的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠血清IgE水平增高;與模型組比較，地塞米松能夠抑制大鼠血清中IgE的表達(dá)(抑制率6.5%)。與之相似，受試藥物鼻敏康也能抑制血清中IgE的表達(dá)(抑制率9.4%)，且具有統(tǒng)計學(xué)意義(與對照組比較P＜0.01)。

圖1 酶聯(lián)免疫法檢測大鼠血清中IgE蛋白濃度

2.3 柴新鼻敏康對變應(yīng)性鼻炎大鼠血清IL-5水平的影響

與正常對照組比較，模型組大鼠血清IL-5水平增高。與模型組比較，柴新鼻敏康能明顯抑制血清中IL-5的表達(dá)(抑制率10.3%)，且具有統(tǒng)計學(xué)意義(與對照組比較P＜0.05)。

圖2 酶聯(lián)免疫法檢測大鼠血清中白介素5濃度

3 討論

變應(yīng)性鼻炎屬于Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，其發(fā)生迅速，在接觸變應(yīng)原后數(shù)秒鐘至數(shù)小時發(fā)生癥狀，其發(fā)病機(jī)制由IgE介導(dǎo)。在變態(tài)反應(yīng)中，肥大細(xì)胞(MCs)是變應(yīng)性反應(yīng)的靶細(xì)胞，MCs受到抗原攻擊脫顆粒，MCs通過釋放組胺、白三烯、緩激肽、嗜酸性細(xì)胞趨化因子IgE與MCs表面IgE的Fc受體結(jié)合，使機(jī)體對該抗原處于“致敏”狀態(tài)，當(dāng)機(jī)體再次接觸相同抗原時，該抗原可與已結(jié)合在MCs表面的 IgE結(jié)合，使MCs細(xì)胞膜上的 FcεRI發(fā)生交聯(lián)，產(chǎn)生橋聯(lián)反應(yīng)，觸發(fā)一系列生化反應(yīng)，使細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度升高，導(dǎo)致MCs脫顆粒，釋放炎性介質(zhì)并合成新的炎性介質(zhì)。這些物質(zhì)作用于鼻黏膜的血管，引起血管擴(kuò)張、血漿滲出增加、鼻黏膜水腫;作用于膽堿能神經(jīng)，使腺體分泌旺盛;作用于感覺神經(jīng)使黏膜敏感性增高，噴嚏發(fā)作，從而產(chǎn)生變應(yīng)性鼻炎的臨床癥狀。

IL-5是由活化的Th2輔助細(xì)胞分泌，被認(rèn)為是嗜酸粒細(xì)胞(EOS)重要的活化因子。嗜酸粒細(xì)胞可浸潤鼻黏膜局部，釋放具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒性和神經(jīng)毒性的強(qiáng)堿性顆粒蛋白，如嗜酸粒細(xì)胞陽離子蛋白(ECP)以及主要堿性蛋白(MCP)，導(dǎo)致鼻黏膜上皮損傷、通透性增高、腺體分泌增加等，產(chǎn)生臨床癥狀。因此，鼻腔黏膜的IL-5是變應(yīng)性鼻炎發(fā)病機(jī)制中必不可少的細(xì)胞因子。IL-5對嗜酸性粒細(xì)胞的生物學(xué)活性有廣泛作用，包括誘導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞前體細(xì)胞增殖和分化，延長嗜酸性粒細(xì)胞存活時間，以及選擇性趨化和激活成熟嗜酸性粒細(xì)胞等［2，3］。IL-5在活化嗜酸粒細(xì)胞的同時，嗜酸粒細(xì)胞本身也能夠產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-5，反饋性刺激更多的嗜酸粒細(xì)胞增殖、分化，從而造成AR病情的遷延難愈。由于IL-5和鼻黏膜組織 Eos、肥大細(xì)胞等呈正相關(guān)，因此，IL-5的水平能夠反映變應(yīng)性鼻炎的嚴(yán)重程度。張宗芬［4］等的研究證實了這一點。其研究發(fā)現(xiàn)，AR患者鼻部變應(yīng)原激發(fā)試驗后，鼻腔灌洗液中IL-5的水平與AR患者的癥狀呈正相關(guān)，IL-5與嗜酸性細(xì)胞陽離子蛋白呈顯著相關(guān)。本實驗研究結(jié)果表明，柴新鼻敏康對變應(yīng)性鼻炎大鼠搔抓、噴嚏、清涕等癥狀改善明顯，且與模型組大鼠相比，柴辛鼻敏康組大鼠血清中IgE和IL-5水平均明顯降低，說明柴辛鼻敏康對AR大鼠外周血血清中IgE和IL-5的產(chǎn)生有明顯的抑制作用。這也提示柴新鼻敏康治療變應(yīng)性鼻炎的機(jī)理，可能是通過降低IgE和IL-5的水平抑制變態(tài)反應(yīng)的發(fā)生，從而改善鼻塞、流清涕、打噴嚏等變應(yīng)性鼻炎的癥狀。需要指出的是，變應(yīng)性鼻炎是一種機(jī)制復(fù)雜的慢性炎癥反應(yīng)性疾病，本研究只是初步探討了柴新鼻敏康對其的治療作用及可能的作用機(jī)理，柴新鼻敏康對于該病的作用機(jī)制還需要進(jìn)一步的深入探索。

［1］中華耳鼻喉科頭頸外科雜志編輯委員會，中華醫(yī)學(xué)會耳鼻喉科分會.變應(yīng)性鼻炎的治療原則和推薦方案［J］.中華耳鼻喉科頭頸外科雜志，2005，40(3):166-167

［2］張羅，韓德民，張波.IL-5在鼻息肉發(fā)病機(jī)制中的作用［J］.國外醫(yī)學(xué)·耳鼻咽喉科學(xué)分冊，2000，24(4):223-226.

［3］張羅，韓德民.細(xì)胞因子與鼻息肉中嗜酸性粒細(xì)胞浸潤增多的關(guān)系［J］.臨床耳鼻咽喉科雜志，2001，15(2):93-95.

［4］張宗芬，袁潤英，李氫元，等.變應(yīng)性鼻炎患者鼻腔灌洗液中白細(xì)胞介素5、嗜酸細(xì)胞陽離子蛋白水平的動態(tài)觀察［J］.中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志，2000，20(5):418.