一種更年期腎陰虛證病證結(jié)合模型大鼠的探索

王 劍，徐志偉

(廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣州 510006)

腎陰虛證是更年期綜合征各證型中較重要的一個證型，中醫(yī)藥具有良好的臨床治療效果［1］。但目前尚無一種更年期腎陰虛病證結(jié)合大鼠模型，影響了其機理及療效的深入研究。本研究通過給予大鼠去卵巢誘發(fā)腎虛，結(jié)合灌服消耗陰液的藥物誘導(dǎo)陰虛病變，觀察該模型的病理生理改變。

1 材料與方法

1.1 材料

3月齡雌性大鼠，體重300g～320g。

1.2 實驗方法

1.2.1 動物分組 大鼠按體重分為3組，分別為正常組、去卵巢模型組、陰虛模型組，每組6只。除正常組外其他各組予去卵巢手術(shù)，陰虛模型組同時灌服耗陰中藥復(fù)方。

1.2.2 去卵巢造模方法 雌性大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉麻醉，切開皮膚和背肌約1.5cm～2cm，將卵巢下輸卵管(包括脂肪)用絲線結(jié)扎，摘除卵巢。術(shù)后連續(xù)3d做陰道涂片檢查，以涂片中未見到成熟脫落上皮細胞作為卵巢切除成功的指標，用于后續(xù)實驗。

1.2.3 陰虛證造模用藥 按照中醫(yī)學(xué)辛熱傷陰、利水傷陰、溫燥傷陰的認識，給予大鼠灌服耗陰中藥復(fù)方:熟附片 10g，干姜 10g，桂枝 10g，豬苓10g，澤瀉10g，草豆蔻10g，均以成人公斤體重10倍用藥量給藥，每日1次，共12周。

1.2.4 血液 E2、FSH、LH、COR、T3、T4檢測灌胃給藥12周后，大鼠瞬間斷頭取血靜置4h，離心分離血清，－20℃保存，用放免法檢測。

1.2.5 子宮指數(shù) 動物處死后完整分離子宮，用1/10000電子天平稱重。子宮指數(shù)=子宮濕重/體重。

1.2.6 大鼠垂體、腎上腺、子宮病理學(xué)檢查大鼠瞬間斷頭后，迅速在顱底垂體窩周圍用手術(shù)刀片割劃，取出垂體，摘除一側(cè)腎上腺取出大鼠子宮。常規(guī)石蠟切片、HE染色、光鏡觀察。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠體重、子宮重、子宮指數(shù)變化

表1 各組大鼠體重、子宮重量變化

表1顯示，雌性大鼠在切除卵巢后，體重較同期正常組明顯增加(P＜0.01)，而子宮重量、子宮系數(shù)明顯減輕(P＜0.01);陰虛模型組體重與去卵巢模型組相比體重?zé)o差異，但子宮重量明顯降低(P＜0.01)。

表2 各組大鼠 E2、FSH、LH變化值

表2顯示，與正常組比較，去卵巢組血清中 E2明顯降低(P＜0.01)，F(xiàn)SH有升高趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義，LH明顯降低(P＜0.01);陰虛組 FSH、LH、E2均較去卵巢組明顯升高(P＜0.05)。

2.2 各組大鼠 COR、T3、T4變化

表3 各組大鼠 COR、T3、T4變化值

表3顯示，與正常組比較，去卵巢組血清中COR、T3明顯降低(P＜0.05);陰虛組血清中 COR明顯高于除正常組外其他各組(P＜0.05)，T3、T4亦呈升高趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義。

2.3 各組大鼠子宮、垂體、腎上腺病理檢查

與正常組比較，去卵巢組大鼠子宮內(nèi)膜及肌層均顯著變薄，內(nèi)膜層明顯萎縮;內(nèi)膜固有層內(nèi)腺體數(shù)量明顯減少，腺體腔明顯減小且近于閉合，腺上皮亦明顯萎縮，間質(zhì)細胞體積減小，間質(zhì)相對緊密。陰虛組大鼠子宮內(nèi)膜上皮、腺上皮、間質(zhì)細胞均有萎縮病變，但與去卵巢組相比萎縮程度較輕。

腺垂體分嗜酸性細胞、嗜堿性細胞、嫌色細胞3種，其中嗜酸性細胞根據(jù)其顆粒大小及免疫組化的反應(yīng)，分為生長激素細胞和催乳激素細胞;嗜堿性細胞分為促甲狀腺激素細胞、促性腺激素細胞、促腎上腺皮質(zhì)激素細胞;嫌色細胞為貯備性細胞或分泌后細胞。與正常組相比，去卵巢組大鼠腺垂體所有腺細胞胞體明顯萎縮，毛細血管竇分布亦減少。陰虛組大鼠腺垂體無萎縮現(xiàn)象，存在彌漫性的內(nèi)分泌細胞呈腫脹、肥大現(xiàn)象，但究竟是何種細胞，尚待進一步的免疫組化判定。

正常大鼠腎上腺，球狀帶、束狀帶、網(wǎng)狀帶組織結(jié)構(gòu)清晰、無萎縮和增生現(xiàn)象，去卵巢組束狀帶較正常組明顯變薄，陰虛組球狀帶、束狀帶、網(wǎng)狀帶組織結(jié)構(gòu)清晰，有增生現(xiàn)象。

3 討論

文獻報道，在雌性大鼠去卵巢3個月后出現(xiàn)骨質(zhì)疏松［2，3］，本研究認為按照中醫(yī)學(xué)腎主骨的理論，出現(xiàn)骨質(zhì)疏松時大鼠整體腎虛狀態(tài)明顯，在此基礎(chǔ)上加用灌服耗陰中藥復(fù)方造成陰虛內(nèi)熱病變狀態(tài)，從而可復(fù)合成腎陰虛證動物模型。聯(lián)系各組大鼠內(nèi)分泌激素檢測結(jié)果，與垂體、子宮、腎上腺病理檢測結(jié)果分析，大鼠在切除卵巢3個月后，血液中雌激素、卵泡刺激素、黃體生成素、皮質(zhì)酮含量明顯下降，其子宮內(nèi)膜、垂體出現(xiàn)明顯萎縮現(xiàn)象，腎上腺出現(xiàn)輕度萎縮，說明此時模型的下丘腦-垂體-卵巢軸功能低下，處于相當于人類的絕經(jīng)后期階段。

在陰虛模型組，血液中雌激素和卵泡刺激素含量均明顯高于去卵巢模型組，其垂體中各內(nèi)分泌細胞腫脹肥大最為明顯。本文推測陰虛模型大鼠垂體中各分泌細胞在病理形態(tài)異常上伴有功能代償性升高，分泌增多的卵泡刺激素促進脂肪、肝臟以及腦等組織中芳香化酶表達升高，使經(jīng)腎上腺產(chǎn)生的雄激素轉(zhuǎn)化為雌二醇增多并作用于子宮，使子宮內(nèi)膜萎縮程度較去卵巢模型組有所改善。陰虛模型組血液中皮質(zhì)酮含量明顯高于去卵巢模型組，接近正常組，與以往陰虛內(nèi)熱證臨床研究所發(fā)現(xiàn)的腎上腺皮質(zhì)功能升高相似［4］。腎上腺皮質(zhì)病理檢查發(fā)現(xiàn)，有輕微增生和垂體各分泌細胞肥大腫脹現(xiàn)象，提示在灌服耗陰中藥后，模型下丘腦-垂體-腎上腺皮質(zhì)軸功能相對于單純?nèi)ヂ殉步M明顯升高。綜合上述2個軸的功能變化，與中醫(yī)學(xué)中的“陰虛內(nèi)熱”現(xiàn)象有類似之處。

［1］劉杰.益坤飲治療腎陰虛型更年期綜合征的臨床研究以及對血清5-HT影響的探討［D］.南京:南京中醫(yī)藥大學(xué)2010碩士論文.

［2］劉仕杰，莫新民，李勁平，等.淫羊霍苷對去卵巢骨質(zhì)疏松癥雌鼠的療效及機理初步研究［J］.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2012，18(3)，271-272.

［3］鞠大宏，張春英，王安民，等.左歸丸對去卵巢所致大鼠骨質(zhì)疏松癥的治療作用［J］.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2001，7(3):17-19.

［4］上海中醫(yī)學(xué)院生化教研組.陰虛火旺與腎上腺皮質(zhì)、髓質(zhì)激素關(guān)系的初步探討［J］.上海中醫(yī)藥雜志，1979，(5)，8-11.