HPLC測定胃舒止痛片中原阿片堿的含量

李俊芳，黃飛龍，鄭艷春，崔雅慧，董海榮，李冰

（1.承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 承德 067000；2.河北省中藥新輔料工程技術(shù)研究中心，河北 承德 067000）

HPLC測定胃舒止痛片中原阿片堿的含量

李俊芳1，2*，黃飛龍1，2，鄭艷春1，2，崔雅慧1，2，董海榮1，2，李冰1

（1.承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，河北 承德 067000；2.河北省中藥新輔料工程技術(shù)研究中心，河北 承德 067000）

目的：建立胃舒止痛片中原阿片堿的含量測定方法。方法：采用高效液相色譜法測定胃舒止痛片中原阿片堿的含量。色譜法分析條件為Kromasil-C18柱（4.6mm×150mm，5μm），流動相：甲醇-水-三乙胺（68∶32∶0.1），流速：1.0 mL·min-1，檢測波長：290 nm。結(jié)果：原阿片堿在0.025 6～0.153 6μg與峰面積呈良好的線性關(guān)系，r＝0.999 9，平均回收率為98.17%，RSD＝1.64%。結(jié)論：該方法操作簡便，結(jié)果可靠，為胃舒止痛片的質(zhì)量研究提供有效的方法。

高效液相色譜法；胃舒止痛片；原阿片堿；含量測定

胃舒止痛片是由白屈菜流浸膏、枯礬、牡蠣（煅）組成的復(fù)方制劑，具有制酸、止痛、收斂的功效。臨床廣泛應(yīng)用于胃及十二指腸潰瘍引起的胃脘疼痛、吐酸?，F(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中僅采用滴定法對其枯礬中KAl（SO4）2進(jìn)行了含量測定。為全面提高產(chǎn)品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證臨床用藥安全、有效，筆者采用HPLC對白屈菜流浸膏中的主要成分原阿片堿進(jìn)行了含量測定［1-7］。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

SPD-10ATP型高效液相色譜儀（日本島津公司），UV-2401紫外-可見分光光度儀（日本島津公司），AL104型電子分析天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司），HH-S型水浴鍋（鞏義市英峪予華儀器廠），SK3200H超聲清洗器（上?？茖?dǎo)儀器有限公司）。

1.2 試藥

原阿片堿對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110853-200402）；甲醇為色譜純，其他所用試劑均為分析純；胃舒止痛片（承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號：090821，090835，090836）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil-C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；流動相：甲醇 -水 -三乙胺（68∶32∶0.1）；流速：1.0 mL·min-1，檢測波長：290 nm；進(jìn)樣量：10μL。在上述色譜條件下原阿片堿峰的保留時(shí)間約為10.5 min，理論塔板數(shù)按原阿片堿峰計(jì)算不低于2 000。

2.2 對照品溶液的制備

取原阿片堿對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含原阿片堿10μg的溶液，即得。

2.3 供試品溶液的制備

取本品20片，精密稱定，研細(xì)，混勻，取約2.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶內(nèi)，精密加入濃氨2 mL，使?jié)櫇?，再精密加入甲?0 mL，密塞，稱定重量，振搖2 min，放置過夜，超聲處理（功率250W，頻率30 kHz）30 min，放冷，稱定重量，用甲苯補(bǔ)足減失的重量，搖勻，過濾，精密量取續(xù)濾液25 mL，低溫蒸干，殘?jiān)眉状嫁D(zhuǎn)移至5 mL量瓶中并稀釋至刻度，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

精密稱取原阿片堿對照品2.56 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻作為對照品儲備液（濃度為0.025 6 mg·mL-1）；精密吸取此液1，2，3，4，5，6 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成6種不同濃度的對照品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，原阿片堿進(jìn)樣量（μg）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y＝1 470 052.46X-4 508.87，r＝0.999 9（n＝6）。結(jié)果表明原阿片堿在0.025 6～0.153 6μg線性關(guān)系良好。

2.5 空白試驗(yàn)

去除白屈菜藥材，按照胃舒止痛片制劑工藝處方比例制成空白樣品，照2.3方法制備，按2.1色譜條件測定，結(jié)果在原阿片堿色譜峰的位置上沒有峰，因此說明陰性樣品無干擾。HPLC圖見圖1。

圖1 胃舒止痛片及其對照品HPLC圖

2.6 精密度試驗(yàn)

取上述對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)樣量均為10μL。根據(jù)對照品峰面積考察精密度，計(jì)算RSD＝0.85%，說明儀器精密度良好，方法可行。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液分別在0，1，2，4，6，8，12，24 h進(jìn)樣10μL。根據(jù)原阿片堿峰面積考察樣品的穩(wěn)定性，計(jì)算RSD＝0.93%，說明樣品在室溫下穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

稱取胃舒止痛片樣品粉末（批號：090411）6份，每份2.5 g，精密稱定，照2.3項(xiàng)制備供試品溶液，照2.1色譜條件進(jìn)行測定，測得原阿片堿平均含量為22.98μg·g-1，RSD＝1.46%，表明本方法重復(fù)性良好。

2.9 回收率試驗(yàn)

取重復(fù)性試驗(yàn)項(xiàng)下的胃舒止痛片樣品粉末6份，每份約1.25 g，精密稱定，分別精密加入0.028 8 mg·mL-1的原阿片堿對照品溶液1 mL，揮干溶劑，照2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL，測定，計(jì)算回收率，結(jié)果平均加樣回收率為98.17%，RSD＝1.64%，見表1。

表1 胃舒止痛片中原阿片堿回收率試驗(yàn)

2.10 樣品含量測定

取胃舒止痛片3批，每批取樣3份，按上述方法測定其中原阿片堿的含量，并計(jì)算平均值，見表2。

表2 胃舒止痛片中原阿片堿的測定含量（n＝3）

3 討論

3.1 檢測波長的選擇

由于不同的文獻(xiàn)報(bào)道對原阿片堿測定所采用的波長不一樣，為確定實(shí)驗(yàn)中最終的檢測波長，本文通過利用原阿片堿對照品溶液采用UV-2401紫外-可見分光光度儀在波長200～350 nm范圍內(nèi)掃描，掃描圖譜顯示，原阿片堿在290 nm和241 nm波長處有最大吸收，考慮290 nm波長處干擾較小，故選擇290 nm為本品的檢測波長。

3.2 流動相的選擇

本實(shí)驗(yàn)曾考察了含0.4%磷酸的甲醇-水（65∶35），使用三乙胺調(diào)節(jié)pH值為5；含0.1%三乙胺的甲醇 -水（65∶35），用鹽酸調(diào) pH值為5；含0.1%三乙胺的甲醇-水（60∶40）；甲醇-水-三乙胺（68∶32∶0.1）等不同的流動相進(jìn)行試驗(yàn)，經(jīng)比較以甲醇-水-三乙胺（68∶32∶0.1）為流動相，所得到的色譜圖效果最佳，前后無干擾，分離較為完全。

3.3 樣品處理方法的確定

因白屈菜中所含主要成分為生物堿類，其中原阿片堿在甲醇、三氯甲烷、乙醇、甲苯等溶劑中溶解度較高。胃舒止痛片中白屈菜流浸膏使用酸水提取方法提取，本品中脂溶性雜質(zhì)較少。因此本實(shí)驗(yàn)用濃氨水調(diào)堿性后依次選用不同體積分?jǐn)?shù)的三氯甲烷、甲苯、甲醇和乙醇作溶媒對樣品進(jìn)行提取方法的摸索。經(jīng)過優(yōu)選最終選用以濃氨水調(diào)堿性，甲苯作為提取溶劑，處理樣品最佳。通過對加熱回流、超聲提取進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)用超聲提取效率較高，并且對提取時(shí)間也進(jìn)行了考察，結(jié)果表明浸泡過夜，超聲30 min提取率最高。由于甲苯作為供試品溶劑直接注入色譜系統(tǒng)，色譜圖溶劑出峰較多，干擾測定，故選用甲醇作為供試品溶劑。取一定量甲苯提取液蒸干，殘?jiān)眉状既芙庾鳛楣┰嚻啡芤骸?/p>

綜上所述，本研究建立了HPLC測定胃舒止痛片中原阿片堿含量的方法，該法操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好，可用于胃舒止痛片的質(zhì)量控制。

［1］蘇玉嚴(yán)，周海妹，展學(xué)孔，等.HPLC法測定夏天無薄膜衣片中原阿片堿的含量［J］.中國藥房，2010，21（36）：3445-3447.

［2］蔣遐芝，葉錦霞，曾建偉，等.HPLC測定小花黃堇中原阿片堿的含量［J］.中國中藥雜志，2010，35（17）：2315-2317.

［3］吳愛軍，汝秋明.HPLC法測定胃痛平糖漿中原阿片堿［J］.中國實(shí)用醫(yī)藥，2010，5（35）：145.

［4］王偉，尚強(qiáng)，楊璐，等.HPLC同時(shí)測定痛寧凝膠中延胡索乙素和原阿片堿的含量［J］.中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17（12）：93-95.

［5］謝彩娟，張志琪，張富強(qiáng)，等.RP-HPLC法同時(shí)測定延胡索藥材中延胡索乙素和原阿片堿［J］.陜西師范大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2005，33（1）：82-85.

［6］李向陽，屠萬倩.HPLC法測定夏天無膠囊中原阿片堿的含量［J］.中藥新藥與臨床藥理，2005，16（4）：272-273.

［7］周利賢.HPLC法測定夏天無注射液中原阿片堿的含量［J］.中國藥師，2010，13（10）：1454.

Determ ination of Protopine in Weishu Zhitong Tablets by HPLC

LI Jun-fang1，2，HUANG Fei-long1，2，ZHENG Yan-chun1，2，CUIYa-hui1，2，Dai Hai-rong1，2，Li Bing1
（1.Chengde Jingfukang Pharmaceutical Group Co.Ltd，Chengde067000，China；2.New Excipients of Traditional Chinese Medicine Engineering Research Center of Hebei Province，Chengde067000，China）

Objective：To establish a method on determination of Protopine in Weishu Zhitong Tablets.Methods：HPLC is the determination of Protopine in Weishu Zhitong Tablets.Column was Kromasil-C18（4.6 mm×150 mm，5μm）.Mobile phase was methanol-water-triethylamine（68∶32∶0.1）at flow rate of 1.0 mL·min-1.Detection wavelength was 290 nm.Results：Protopine showed linear regression at 0.025 6～0.153 6μg（r＝0.999 9）.The average recovery was98.17%（RSD ＝1.64%）.Conclusion：Thismethod has good repeatability and flexibility.It can be used for quality control ofWeishu Zhitong Tablets.

HPLC；Weishu Zhitong Tablets；Protopine；Content；Determination

2012-06-25）

*［通訊作者］李俊芳，Tel：（0314）2292050，E-mail：ljf19791221＠163.com