不同產(chǎn)地刺玫果中總黃酮含量的測定

王領(lǐng)弟，李艷榮，潘海峰，張曉峰

(河北省中藥研究與開發(fā)重點實驗室，承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000)

刺玫果系薔薇科薔薇屬植物山刺玫(Rosa Davurica Pall)的成熟果實，又名野薔薇果，廣泛分布于我國東北及內(nèi)蒙、山西等省[1]。刺玫果中的主要成分為黃酮類、有機酸、香豆素類等[2]，其中總黃酮類物質(zhì)具有預(yù)防和治療高血脂、血栓所導(dǎo)致的心腦血管疾病的功效[3-4]。為更好地開展刺玫果的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，本研究建立了紫外分光光度法檢測不同產(chǎn)地刺玫果中總黃酮含量的方法，以期為刺玫果的質(zhì)量評價提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

HP-8453紫外-可見分光光度儀，美國惠普公司;梅特勒-托利多AG-245電子分析天平，德國梅特勒公司。蘆丁對照品(批號:100080-200707)，中國藥品生物制品檢定所;10批刺玫果藥材，由本所趙春穎副研究員鑒定為薔薇科薔薇屬植物山刺玫的成熟果實，樣品來源及收集時間見表1;其余試劑均為分析純。

表1 刺玫果藥材來源

2 方法與結(jié)果

2.1 對照品溶液的制備 精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁對照品25mg置50ml量瓶中，加乙醇適量超聲溶解，冷卻后加乙醇至刻度，搖勻。精密量取上述溶液20ml置50ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即為對照品溶液(每1ml含無水蘆丁0.2mg)。

2.2 供試品溶液的制備 精密稱定刺玫果藥材粉末1g，置索氏提取器中，加三氯甲烷加熱回流提取至提取液無色，棄去三氯甲烷，藥渣揮去三氯甲烷;藥渣加甲醇繼續(xù)提取至無色，將提取液蒸干，殘渣加75%乙醇溶解，轉(zhuǎn)移至25ml量瓶中，加75%乙醇至刻度，搖勻，即為供試品儲備液。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密量取對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml置25ml量瓶中，加水至6ml;加5%亞硝酸鈉溶液1ml，搖勻，放置6min;加10%硝酸鋁溶液1ml，搖勻，放置6min;加氫氧化鈉試液10ml，再加水至刻度，搖勻，放置15min。以相應(yīng)試劑為空白，采用紫外-可見分光光度法于波長510nm處測定吸光度，以吸光度A為縱坐標(biāo)，濃度C(mg/ml)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=12.602X-0.0216，r=0.9996，線性范圍為8-48mg/L，見附圖。

附圖 蘆丁對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.4 精密度試驗 精密吸取6份對照品溶液各3ml，分別置于25ml量瓶中，按2.3的方法自“6ml”起操作，測定吸光度，RSD=0.25%，表明本方法精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗 取藥材粉末(S2)6份，按2.2的方法制備供試品溶液，濾過，精密量取10ml，置25ml量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取2ml置25ml量瓶中，按2.3的方法自“加水至6ml”起操作，測定吸光度，并計算含量，6份藥材樣品中總黃酮含量分別為3.20%、3.18%、3.17%、3.15%、3.19% 和3.16%，RSD=0.59%，說 明 本 方法重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 取同一批藥材粉末(S2)，按2.2的方法制備供試品儲備液，濾過，精密量取10ml，置25ml量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻;精密量取2ml置25ml量瓶中，按2.3的方法自“加水至6ml”起操作。分別于顯色后放置15min、30min、45min和60min測定吸光度，結(jié)果RSD為0.86%，表明供試品溶液在顯色后1h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 回收率試驗 在已知含量的刺玫果藥材(S2)中，加入一定量的蘆丁對照品，按2.2的方法制備供試品溶液，測定吸光度，計算回收率。結(jié)果見表2，平均回收率為99.96%，RSD為2.5%。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果

2.8 樣品含量測定 分別取10批刺玫果藥材各1g，按2.2的方法制備供試品儲備液。取供試品儲備液，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，置25ml量瓶，加水稀釋至刻度，搖勻。精密量取2ml置25ml量瓶中，按2.3的方法自“加水至6ml”起操作，測定吸光度，計算總黃酮含量，結(jié)果見表3。

表3 不同產(chǎn)地刺玫果藥材的總黃酮含量(n=3)

3 討論

本研究總黃酮含量測定結(jié)果顯示，不同產(chǎn)地刺玫果藥材的總黃酮含量差異較明顯。各產(chǎn)地總黃酮含量以東北所產(chǎn)含量最高，山西所產(chǎn)含量最低，內(nèi)蒙古產(chǎn)三批藥材中含量相差較小?？梢姴煌a(chǎn)地，因不同的生長環(huán)境、濕度、溫度等因素對刺玫果中總黃酮的含量有較大影響。

目前，刺玫果作為一種天然保健食品及保健藥品日益受到重視和得到廣泛開發(fā)，市場上已出現(xiàn)以該果汁為主研制的保健食品及保健飲料[1]。本研究以不同產(chǎn)地刺玫果中總黃酮的含量為檢測指標(biāo)，可為刺玫果的開發(fā)與利用提供科學(xué)的理論依據(jù)，同時也可為刺玫果高效液相色譜法分析及有效成分的含量測定等更深入的研究奠定基礎(chǔ)。

[1]于曉瑾，于祥龍.正交試驗法優(yōu)選刺玫果總黃酮成分提取工藝[J].黑龍江中醫(yī)藥，2010,(1):44-45.

[2]程東巖，王隸書，范艷君，等.刺玫果總黃酮純化工藝研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2011，22(3):664-665.

[3]張遠(yuǎn).刺玫果提取物對心血管系統(tǒng)的作用[J].中草藥1985，16(1):20-24.

[4]韓慧民.刺玫果總黃酮對心血管系統(tǒng)的藥理作用[J].中草藥，1987，18(1):23-25.