神經(jīng)結(jié)扎損傷大鼠鞘內(nèi)注射新斯的明和GABA受體激動(dòng)劑的相互作用

楊 森

（遼寧省錦州市中心醫(yī)院麻醉科，遼寧 錦州 121000）

周圍神經(jīng)損傷可以引起相應(yīng)肢體皮膚對(duì)正常非傷害性機(jī)械刺激的過程敏感，即異常觸痛。在幾種實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭?，以結(jié)扎引起的神經(jīng)損傷模型中異常觸痛表現(xiàn)的最為明顯。一般來說，在脊髓水平使用膽堿酯酶抑制劑、α2-腎上腺素受體激動(dòng)劑、NMDA受體拮抗劑、γ-氨基丁酸（GABA）受體激動(dòng)劑、腺苷受體激動(dòng)劑等在結(jié)扎引起的脊神經(jīng)損傷大鼠模型中均有減輕異常觸動(dòng)的作用。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟诓捎么笫笊窠?jīng)病理性疼痛模型，采用不同劑量比例聯(lián)合用藥及等效線法研究鞘內(nèi)注射新斯的明與蠅蕈醇或新斯的明與巴氯酚之間可能存在的相互作用。

1 資料與方法

1.1 雄性SD大鼠，體質(zhì)量200～300g，按照Kim和Chung等[1]提出的方法建立大鼠神經(jīng)病理性損傷的模型。以安氟醚麻醉大鼠后，仔細(xì)分離左側(cè)腰5、6脊神經(jīng)并用6-0黑絲線在背根神經(jīng)節(jié)的遠(yuǎn)端與坐骨神經(jīng)發(fā)出的近端之間結(jié)扎脊神經(jīng)。手術(shù)后7d內(nèi)如大鼠的縮爪閾值≤4.0g，則按照常規(guī)方法進(jìn)行大鼠鞘內(nèi)置管。鞘內(nèi)分別注射不同劑量的新斯的明、蠅蕈醇、及巴氯芬，劑量分別為：新斯的明0.3、1、3、10μg；蠅蕈醇0.1、0.3、1、3、10μg；巴氯芬0.1、0.3、1、3μg。

表1 鞘內(nèi)單獨(dú)和聯(lián)合應(yīng)用新斯的明、蠅蕈醇、巴氯酚時(shí)ED50 及95%可信區(qū)間

表2 鞘內(nèi)單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用新斯的明、蠅蕈醇及巴氯酚時(shí)的副作用發(fā)生率

1.2 測(cè)定觸痛閾值時(shí)，大鼠單個(gè)置于底部為線網(wǎng)的籠中飼養(yǎng)。20min，采用von Frey法對(duì)神經(jīng)損傷側(cè)后爪的跖側(cè)中間部位進(jìn)行刺激，知道出現(xiàn)有疼痛表現(xiàn)的陽(yáng)性反應(yīng)[2]。在壓力達(dá)到15g仍未出現(xiàn)陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)，認(rèn)為動(dòng)物達(dá)到截止閾值（cutoffvalue）。

為了描述 藥物相互作用的特征及強(qiáng)度，在本研究中計(jì)算了聯(lián)合用藥時(shí)的總分?jǐn)?shù)值。見表1。

將單獨(dú)給藥時(shí)的ED50值記為1，則總分?jǐn)?shù)值的計(jì)算公式為：

總分?jǐn)?shù)值=（聯(lián)合用藥時(shí)的新斯的明劑量/單獨(dú)用藥時(shí)的新斯的明劑量）+（ 聯(lián)合用藥時(shí)蠅蕈醇/單獨(dú)用藥時(shí)蠅蕈醇的劑量），總分?jǐn)?shù)值接近1表明藥物具有相加作用；若總分?jǐn)?shù)值＜1，則說明藥物具有協(xié)同作用。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

量效關(guān)系數(shù)據(jù)以%MPE平均值+SEM表示：ED50值、斜率、95%的可信區(qū)間等根據(jù)量效關(guān)系進(jìn)行分析；變異系數(shù)和理論值、ED50值95%的可信區(qū)間（95%Cis）根據(jù)單獨(dú)用藥時(shí)的變異系數(shù)進(jìn)行計(jì)算。各組內(nèi)的最小拮抗效應(yīng)與最大激動(dòng)效用之間采用配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)行比較，P＜0.05為有效統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

正常大鼠的縮爪閾值大于5g。在脊神經(jīng)結(jié)扎后，大多數(shù)大鼠對(duì)機(jī)械刺激的閾值降低（從術(shù)前的15g下降到平均基礎(chǔ)值≤4.0g，但仍具有正常的行為學(xué)表現(xiàn)及體質(zhì)量增加。對(duì)神經(jīng)結(jié)扎的動(dòng)物進(jìn)行導(dǎo)管植入后，縮爪閾值范圍為（1.99±0.17）到（3.69±0.5）g之間。

三種激動(dòng)劑鞘內(nèi)注射的時(shí)間效應(yīng)過程基本相似，鞘內(nèi)注射新斯的明、蠅蕈醇和巴氯酚及聯(lián)合用藥可以產(chǎn)生劑量依賴性的抗異常觸痛效應(yīng)。各個(gè)劑量的藥物均不導(dǎo)致嚴(yán)重的運(yùn)動(dòng)功能障礙，但各藥組中均有一些大鼠表現(xiàn)為輕至中度的運(yùn)動(dòng)功能障礙、鎮(zhèn)靜及尿頻現(xiàn)象，見表2。

3 討 論

在本研究中有兩個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)：①對(duì)于脊神經(jīng)損傷引起的異常觸痛，鞘內(nèi)聯(lián)合應(yīng)用新斯的明及蠅蕈醇可以產(chǎn)生顯著的協(xié)同效應(yīng)；②與單用GABAB受體激動(dòng)劑相比，聯(lián)合應(yīng)用GABAA受體激動(dòng)劑與新斯的明能更有效地減輕異常觸痛。這些研究表明，協(xié)同作用的產(chǎn)生有賴于GABAA受體及毒蕈堿受體的激活。巴氯酚是強(qiáng)效GABA類似物，對(duì)GABAB受體有選擇性的激動(dòng)作用；蠅蕈醇可選擇性的激活GABAA受體亞型。新斯的明通過毒蕈堿樣受體作用于神經(jīng)元細(xì)胞膜上與G蛋白耦聯(lián)的受體。脊髓中外側(cè)細(xì)胞柱膽堿能神經(jīng)的分布來源于脊髓固有的膽堿能神經(jīng)纖維。這些膽堿能神經(jīng)末梢時(shí)初級(jí)傳入神經(jīng)的突觸前末梢[3]。

總之，鞘內(nèi)單獨(dú)注射新斯的明、蠅蕈醇或巴氯酚可對(duì)異常觸痛產(chǎn)生劑量依賴性緩解作用，且不產(chǎn)生嚴(yán)重副作用。在神經(jīng)結(jié)扎損傷大鼠模型鞘內(nèi)使用新斯的明與蠅蕈醇具有協(xié)同作用，但與巴氯酚合用不產(chǎn)生協(xié)同作用。這些研究結(jié)果表明，對(duì)異常觸痛的協(xié)同抑制作用需要同時(shí)激活毒蕈堿受體和GABAA受體。

[1] Kim SH,Chung JM.An experimental model for peripheral neuropathy produced by segmental spinal nerve ligation in the rat[J].Pain,1992,50(3)：355-363.

[2] Chaplan SR,Bach FW,Pogrel JW,et al.Quantitative assessment of tactile allodynian in the rat paw[J].J Neurosci Methods,1994,53(1)：55-63.

[3] Tallarida RJ,Murray RB.Manual of pharmacologic calculations with computer programs[M].2nd ed,New York：Springer-Verlag,1987.