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    引種栽培對(duì)卷丹水溶性成分的影響*

    2012-09-14 03:43:50連中學(xué)陳紅剛朱田田
    中國藥業(yè) 2012年24期
    關(guān)鍵詞:卷丹原產(chǎn)地浸出物

    侯 嘉 ,連中學(xué) ,杜 弢 ,陳紅剛 ,朱田田 ,林 麗

    (1.甘肅中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系,甘肅 蘭州 730000; 2.甘肅省渭源縣種子管理站,甘肅 定西 748299)

    中藥百合最早載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,來源于百合科植物卷丹 Lilium lancifolium Thunb、百合 Lilium brownii F.E.Brown var.viridulum Baker或細(xì)葉百合 Lilium pumilum DC.的干燥肉質(zhì)鱗葉,性味甘寒,有養(yǎng)陰潤肺、清心安神之功,用于治療陰虛久咳、痰中帶血、虛煩驚悸、失眠多夢(mèng)、精神恍惚等癥[1]。江蘇宜興是藥用百合的傳統(tǒng)產(chǎn)地,其原植物為卷丹 Lilium lancifolium Thunb,商品稱為“宜興百合”。近20年來,卷丹的產(chǎn)地發(fā)生了很大變化,目前卷丹的主要產(chǎn)區(qū)分布在湖南龍山、安徽霍山及天長等地[2]。中藥百合中含有皂苷、生物堿、多糖、磷脂、蛋白質(zhì)、氨基酸、維生素、淀粉和大量微量元素等化學(xué)成分[3]。其中百合多糖具有增強(qiáng)耐缺氧能力、抗氧化及增強(qiáng)免疫作用,是百合的主要活性成分之一[4]。本研究中分別測(cè)定原產(chǎn)地與引種地卷丹中多糖及水溶性浸出物的含量,為評(píng)價(jià)引種后的卷丹質(zhì)量提供參考。

    1 材料、儀器與試藥

    2009年百合課題組赴卷丹的主產(chǎn)區(qū)引種,共收集江蘇宜興、安徽霍山縣、湖南龍山等地卷丹樣品19份,經(jīng)甘肅中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系杜弢副教授鑒定為卷丹 Lilium lancifolium Thunb.。2010年春將收集到的樣品種植于甘肅渭源,2010年秋采收。材料來源見表1。

    UV1102型紫外可見分光光度計(jì)(上海天美科學(xué)儀器有限公司);BS-224S型電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);800型離心沉淀器(上海手術(shù)器械十廠);SHA-B型數(shù)顯恒溫水浴振蕩器(常州榮冠實(shí)驗(yàn)分析儀器廠)。D-葡萄糖對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所,批號(hào)為110833-200904,供含量測(cè)定用);其余試劑均為分析純。統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS11.5軟件。

    表1 卷丹樣品來源

    2 方法與結(jié)果

    2.1 水溶性總多糖的含量測(cè)定(蒽酮-濃硫酸法)[5]

    2.1.1 溶液配制

    精密稱取105℃干燥至恒重的無水葡萄糖對(duì)照品適量,置100 mL容量瓶中,加蒸餾水至刻度,搖勻,制成0.151 2 mg/mL的對(duì)照品貯備液。稱取卷丹樣品約2 g,置250mL圓底燒瓶中,精密加入100mL蒸餾水,加熱回流2 h,冷卻至室溫,過濾,精密吸取濾液 1.0mL,加入無水乙醇 5.0mL,搖勻,離心(3 000 r/min,30 min),傾去上清液,沉淀加水溶解并轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶中,加水稀釋至刻度,搖勻,即得供試品溶液。

    2.1.2 測(cè)定波長選擇

    精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各1.0 mL,分置10 mL棕色具塞試管中,分別加入0.2%蒽酮-硫酸溶液4.0mL,混勻,迅速置冰水浴中冷卻6min后,置100℃水浴中加熱10min,取出,置冰水浴中5min,取出,室溫放置10min后,于400~800 nm范圍內(nèi)進(jìn)行光譜掃描。結(jié)果表明(圖1),對(duì)照品溶液和供試品溶液的最大吸收波長均為627 nm。

    圖1 百合多糖紫外掃描光譜圖

    2.1.3 方法學(xué)考察

    線性關(guān)系考察:精密吸取對(duì)照品貯備液 0,1.5,3.0,4.5,6.0,7.5,10.0mL,分別置 10mL 容量瓶中,加蒸餾水至刻度,搖勻。精密吸取上述各溶液1.0mL,置10mL棕色具塞試管中,照2.1.2項(xiàng)下操作,于627 nm波長處測(cè)定吸光度。以吸光度(Y)為縱坐標(biāo)、質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得回歸方程 Y=35.535X+0.056 1,r=0.994 8(n=7)。結(jié)果表明,葡萄糖質(zhì)量濃度在0.004 536~0.030 24 g/L范圍內(nèi)與吸光度線性關(guān)系良好。

    精密度試驗(yàn):取質(zhì)量濃度為0.151 2 g/L的對(duì)照品溶液,重復(fù)測(cè)定6次。結(jié)果吸光度的 RSD為1.28%,表明儀器的精密度良好。

    穩(wěn)定性試驗(yàn):精密吸取新鮮配制的卷丹供試品溶液1.0mL,置10mL棕色具塞試管中,照2.1.2項(xiàng)下方法操作,分別于0,1.0,1.5,2.0,2.5,3 h 測(cè)定。結(jié)果吸光度的 RSD 為 1.36% ,表明供試品溶液在3 h內(nèi)穩(wěn)定。

    重復(fù)性試驗(yàn):分別稱取卷丹樣品約2 g,精密稱定,平行6份,按2.1.1項(xiàng)下方法制得供試品溶液,按2.1.2項(xiàng)下操作,測(cè)定吸光度,計(jì)算百合多糖的百分含量。結(jié)果平均含量為9.654%,RSD為1.96%,表明方法重復(fù)性良好。

    加樣回收率試驗(yàn):稱取已測(cè)定含量的卷丹樣品約0.2 g,精密稱定,加入0.151 2 g/L的葡萄糖對(duì)照品溶液適量,按2.1.1項(xiàng)下提取方法共制得6份供試品溶液。將供試品溶液照2.1.2項(xiàng)下操作,測(cè)定吸光度并計(jì)算回收率。結(jié)果見表2。

    2.1.4 樣品總多糖含量測(cè)定

    取不同來源卷丹樣品各2 g,按2.1.1項(xiàng)下方法制得供試品溶液。精密吸取上述各供試品溶液1.0mL,置10mL棕色具塞試管中,照2.1.2項(xiàng)下操作,測(cè)定吸光度,按標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算不同來源卷丹的多糖百分含量。

    表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

    2.2 水溶性浸出物含量測(cè)定[1]

    將卷丹樣品粉碎,使能通過二號(hào)篩,并混合均勻。取供試品約4 g,精密稱定,置250mL的錐形瓶中,精密加水100mL,密塞,冷浸,在振蕩器中振搖6 h,再靜置18 h,用干燥濾器迅速濾過,精密量取續(xù)濾液20mL,置已干燥至恒重的蒸發(fā)皿中,在水浴上蒸干后,于105℃干燥3 h,置干燥器中冷卻30min,迅速精密稱定重量。以干燥品計(jì)算供樣品中水溶性浸出物的含量。

    2.3 結(jié)果

    原產(chǎn)地與引種地卷丹中多糖及浸出物含量的測(cè)定結(jié)果見表3??梢姡a(chǎn)地卷丹浸出物含量高于引種地,但引種地卷丹中多糖含量明顯高于原產(chǎn)地。

    表3 原產(chǎn)地與引種地卷丹中多糖及水溶性浸出物的含量(%,n=3)

    3 討論

    引種到甘肅渭源的卷丹和原產(chǎn)地的成分相比,多糖含量平均增加了約3倍。通過協(xié)方差分析(F=70.799,單側(cè) P=0.000),卷丹引種前后多糖含量的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多糖是藥用百合中主要的活性成分,春季降水少、夏季溫度較低、秋季日照短有利于多糖的累積[6]。2010年,甘肅渭源縣4月份平均降雨14.2 mm,8月份最高溫度27.1℃,最低溫度16.0℃,9月份平均日照時(shí)數(shù)150.5 h(甘肅省渭源縣氣象局),可見甘肅渭源的氣候環(huán)境有利于百合多糖的累積,其多糖含量遠(yuǎn)高于原產(chǎn)地,同時(shí)浸出物含量也符合《中國藥典》(2010年版)要求。甘肅渭源種植卷丹的水溶性浸出物含量低于原產(chǎn)地,能否在甘肅大面積種植卷丹,還需進(jìn)一步試驗(yàn)。

    引種到甘肅渭源的卷丹和原產(chǎn)地的相比,浸出物的含量普遍下降。卷丹中浸出物含量與多糖含量無相關(guān)性(協(xié)方差分析,F(xiàn)=0.474,單側(cè) P=0.496 >0.05);可能由于藥材不同的干燥方法造成引種地與原產(chǎn)地卷丹中浸出物含量差異,具體原因還需進(jìn)一步研究。

    卷丹預(yù)處理時(shí)不宜粉碎過細(xì),否則加熱提取易糊化,且在加熱過程中應(yīng)避免長時(shí)間高溫回流。提取完成后,必須過濾,取濾液,防止藥渣中的淀粉、纖維素等也能被濃硫酸水解成單糖而發(fā)生反應(yīng),使得結(jié)果不準(zhǔn)確。

    [1]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:123,174,附錄 62.

    [2]杜 弢,陳紅剛,連中學(xué),等.中藥材百合生產(chǎn)現(xiàn)狀及發(fā)展對(duì)策[J].中藥材,2011,34(2):165 -168.

    [3]曲偉紅,周日寶,童巧珍,等.百合的化學(xué)成分研究概況[J].湖南中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2004,10(3):75-76.

    [4]胡敏敏,蔡寶昌,張志杰,等.百合多糖的藥效學(xué)研究[J].中藥新藥與臨床藥理,2007,18(2):107 -109.

    [5]孫 俊,張科偉,秦昆明,等.不同產(chǎn)地百合多糖的含量測(cè)定[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2010,26(1):65 -66.

    [6]馮旭芹,崔秀明,陳中堅(jiān),等.三七有效成分與氣候生態(tài)因子的相關(guān)性分析[J].中國農(nóng)業(yè)氣象,2006,27(1):16-18.

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