藏藥經(jīng)典驗(yàn)方“瑪奴西湯”顆粒免疫調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究

紅 梅 陳秋紅 王志瑾 劉有菊

1.青海省藏醫(yī)藥研究院，青海西寧 810003；2.青海高原醫(yī)學(xué)科學(xué)研究所中心實(shí)驗(yàn)室，青海西寧 810012

“瑪奴西湯”（縮寫(xiě)為MNXT）系藏藥經(jīng)典驗(yàn)方，載于藏醫(yī)名著《四部醫(yī)典》，至今已有一千多年的臨床應(yīng)用史，由藏木香、懸鉤木、寬筋藤和干姜4 味藥材組成，具有解表、發(fā)汗之功效。用于治療瘟病初期、流感初期、惡寒頭痛、關(guān)節(jié)酸痛、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、發(fā)熱等病癥[1-2]。但目前臨床應(yīng)用的劑型仍是傳統(tǒng)的湯散劑，存在攜帶不便、生物利用度差等問(wèn)題，因此本項(xiàng)目為其確定適宜劑型，闡明其有效性及安全性，采用炭粒廓清法和2，4-二硝基氟苯（DNFB）所致的遲發(fā)性超敏反應(yīng)法研究“瑪奴西湯”顆粒對(duì)免疫功能的影響，為藏藥“瑪奴西湯”顆粒在臨床中的應(yīng)用提供依據(jù)。

1 儀器與試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

秒表，粵字03000122，飛亞運(yùn)集團(tuán)；紫外光柵分光光度計(jì)，型號(hào)：752，上海精密科學(xué)儀器有限公司；電子天平，型號(hào)：JD1060-2，沈陽(yáng)龍騰電子稱量?jī)x器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

瑪奴西湯顆粒，規(guī)格：30 g/袋，生產(chǎn)批號(hào)：20111212，由青海省藏醫(yī)藥研究院基礎(chǔ)研究所傳統(tǒng)工藝室提供；醋酸潑尼松片，規(guī)格：5mg/片，生產(chǎn)批號(hào)：12020102，天津天藥藥業(yè)股份有限公司；生理鹽水，生產(chǎn)批號(hào)：H11021313，四川科倫藥業(yè)股份有限公司；羧甲基纖維素鈉，生產(chǎn)批號(hào)：20080399，常州市武進(jìn)廟橋第二化工有限公司；2，4-二硝基氟苯，生產(chǎn)批號(hào)：20070519，成都市科龍化工試劑廠；丙酮，生產(chǎn)批號(hào)：2006年4月26日，天津市化學(xué)試劑六廠；硫化鈉，生產(chǎn)批號(hào)：060320，成都金山化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)；碳酸鈉，生產(chǎn)批號(hào)：030211，西安化學(xué)試劑廠；印度墨汁，生產(chǎn)批號(hào)：NBLD2012Y0518，北京諾博萊德科技有限公司；微量采血管，生產(chǎn)批號(hào)：201204，姜堰市健化醫(yī)療器械有限公司；靜脈血樣采集容器普通管，規(guī)格：5mL，生產(chǎn)批號(hào)：120226，湖南省瀏陽(yáng)市醫(yī)用儀具廠。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠，清潔級(jí)，體重18～22 g，合格證號(hào)：青醫(yī)動(dòng)字號(hào)20120007，購(gòu)于青海省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

2 方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)方法

2.1.1 炭粒廓清法[3-4]取18～22 g雄性小鼠60只，隨機(jī)分為空白組、模型組、醋酸潑尼松組（10.0 mg/kg）、瑪奴高劑量組（2.0 g/kg）、瑪奴中劑量組（1.0 g/kg）、瑪奴低劑量組（0.5g/kg），每組10只。每組小鼠每日灌胃給藥1次，連續(xù)給藥7 d，給藥量按小鼠體重折算，空白組和模型組給予蒸餾水。末次給藥前禁食16 h，每組小鼠于末次給藥后1 h于尾靜脈注入用1%明膠溶液稀釋4 倍的印度墨汁（0.01 mL/g體重）。于注入墨汁后2 min及12 min用微量采血管從小鼠眼眶后靜脈叢取血20 μL， 立即吹入裝有2 mL，0.1%Na2CO3溶液的血液采集管中，并立即搖勻。以空白組血容液校零，用752 型分光光度計(jì)在680 nm處測(cè)定吸光度A。后將小鼠頸椎處死，取脾臟、 肝臟稱重。 并計(jì)算廓清指數(shù)：K=（lgA1-lgA2）/（t2-t1）（A1為 2 min時(shí)血樣的吸光度，A2 為12 min時(shí)血樣的吸光度，t1為第1次采血時(shí)間，單位為min，t2 為第2次采血時(shí)間，單位為min）；吞噬指數(shù)：a=體重 × K1/3/（脾重+肝重）（K為廓清指數(shù)）。

2.1.2 遲發(fā)性超敏反應(yīng)[4]取18～22 g小鼠60只，雌雄各半，分組與給藥方法同“2.1.1”。于給藥1 d后，每只小鼠用7%的硫化鈉溶液涂抹腹部脫毛[5]，并在24 h后將5%2，4-二硝基氟苯丙酮溶液50 μL均勻涂抹于小鼠腹部脫毛處致敏，繼續(xù)給藥7 d。末次給藥前禁食不禁水16 h，每組小鼠于末次給藥后1 h，于小鼠左耳兩面均勻涂抹20 μL，1%2，4-二硝基氟苯丙酮溶液進(jìn)行攻擊，24 h后將小鼠頸椎處死，剪下小鼠左右兩耳，用直徑為7 mm的打孔器于小鼠左右兩耳片同部位等面積銃下耳片，用精密電子天平稱重，計(jì)算小鼠腫脹度（左右耳片重量差）。

2.1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 12.0 對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，采用單因素方差分析，組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.2.1 瑪奴西湯顆粒對(duì)小鼠廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)的影響 連續(xù)給藥7 d后，瑪奴中劑量組的廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)顯著提高，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 （P＜0.05 或P＜0.01）；并且高、低劑量組的吞噬指數(shù)顯著提高，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 瑪奴西湯顆粒對(duì)小鼠廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)的影響（±s，n=10）

表1 瑪奴西湯顆粒對(duì)小鼠廓清指數(shù)和吞噬指數(shù)的影響（±s，n=10）

注：與模型組比較，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01；“-”表示無(wú)數(shù)據(jù)

組別 劑量 K 吞噬指數(shù)（a）空白組模型組醋酸潑尼組瑪奴高劑量瑪奴中劑量瑪奴低劑量----10.0 mg/kg 2.0 g/kg 1.0 g/kg 0.5g/kg 0.017 8±0.0152 0.016 8±0.008 8 0.022 5±0.0058 0.032 2±0.009 3*0.02 92±0.009 8 3.88±1.42 3.78±1.19 5.10±0.74*5.77±0.82**5.13±0.68*

2.2.2 瑪奴西湯顆粒對(duì)小鼠遲發(fā)性超敏反應(yīng)的影響 連續(xù)給藥7 d后，用1%2，4-二硝基氟苯丙酮溶液攻擊小鼠的左耳兩面，瑪奴中、低劑量組的左右耳重量差明顯升高，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 瑪奴西湯顆粒對(duì)小鼠遲發(fā)性過(guò)敏反應(yīng)的影響（±s，n=10）

表2 瑪奴西湯顆粒對(duì)小鼠遲發(fā)性過(guò)敏反應(yīng)的影響（±s，n=10）

注：與模型組比較，*P ＜ 0.05，**P ＜ 0.01；“-”表示無(wú)數(shù)據(jù)

組別 劑量 耳腫脹腫脹度（mg）空白組模型組醋酸潑尼組瑪奴高劑量瑪奴中劑量瑪奴低劑量--10.0 mg/kg 2.0 g/kg 1.0 g/kg 0.5g/kg 0.30±0.54**14.55±3.06 14.03±1.08 16.76±2.28 17.31±2.35*17.63±3.09*

3 討論

藏藥“瑪奴西湯”別名四味藏木香湯散，是藏藥中經(jīng)典方劑之一，已有相關(guān)文獻(xiàn)證明該方劑有增強(qiáng)機(jī)體特異性體液免疫功能[6]。其主要成分是由藏木香、懸鉤木、寬筋藤、干姜四味藥物組成，藏木香是方劑中的君藥，為菊科旋覆花屬植物藏木香的根[7]，含有豐富的總黃酮[8]和可溶性多糖[9]成分，而黃酮類化合物和多糖具有對(duì)機(jī)體免疫功能調(diào)節(jié)作用[10]，并且方劑中含有豐富的微量元素與之相結(jié)合致使有效成分提煉[11]，在治療疾病時(shí)有獨(dú)特的療效[12]，這是藏藥文化優(yōu)勢(shì)和獨(dú)到之處。

本文通過(guò)小鼠炭粒廓清法和遲發(fā)性超敏反應(yīng)，觀察工藝優(yōu)化的顆粒劑的免疫調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小鼠灌服“瑪奴西湯”顆粒后，能顯著提高小鼠單核巨噬細(xì)胞的吞噬功能及2，4-二硝基氟苯丙酮溶液所致的耳腫脹度，說(shuō)明“瑪奴西湯”顆粒具有增強(qiáng)機(jī)體免疫的功能，這為臨床用藥提供了科學(xué)的依據(jù)。

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