胡桃楸莖枝、葉和果實中總鞣質(zhì)的動態(tài)變化

王添敏， 徐士釗， 張 慧， 陳虎彪， 康廷國*

(1.遼寧中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，遼寧大連 116600;2.佳木斯大學(xué)藥學(xué)院，黑龍江佳木斯 154007;3.香港浸會大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，香港九龍?zhí)?

胡桃楸Juglans mandshuricaMaxim.又名核桃楸、山核桃，為胡桃科Juglandaceae胡桃屬植物，屬落葉喬木，主要分布于我國東北及華北地區(qū)［1］?！堕_寶本草》記載胡桃楸有補腎固精、斂肺定喘、抑菌鎮(zhèn)咳及抗癌之功效。胡桃楸的樹皮、莖枝和果皮在民間用于治療腫瘤;現(xiàn)代研究表明胡桃楸的莖枝、樹皮、根、葉和果皮均具有抗腫瘤作用［2-6］。鞣質(zhì)是胡桃楸不同藥用部位中普遍存在的主要化學(xué)成分之一［7-9］，近年來越來越多的研究表明鞣質(zhì)具有較好的抗腫瘤活性［10-12］。關(guān)于胡桃楸中總鞣質(zhì)的測定研究較少，曾測定了不同產(chǎn)地胡桃楸不同藥用部位中含總鞣質(zhì)的量［13］，本實驗考察了不同時間采收的胡桃楸莖枝、葉和果實中總鞣質(zhì)的動態(tài)變化，為胡桃楸資源的合理開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料

U—3010型紫外-可見分光光度計 (日本Hitachi)，AS5150型超聲波清洗機 (北京華瑞博遠科技發(fā)展有限公司)，ALC—110.4型電子分析天平(德國賽多利斯公司)，RE—300型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀廠)。沒食子酸對照品 (純度≥98%)購自比利時Acros Organics公司。實驗中所用試劑均為市售分析純試劑。

胡桃楸的莖枝、葉和果實分別于2010年2月—2011年1月期間每月28日在遼寧省普蘭店市蓮山鎮(zhèn)老白山上固定區(qū)域采收，受氣候、人為因素影響，胡桃楸莖枝采得12個樣品，葉采得5、6、7、8月4個樣品，胡桃楸果采得6、7月2個樣品，經(jīng)遼寧中醫(yī)藥大學(xué)王冰教授鑒定為胡桃楸科植物胡桃楸Juglans mandshuricaMaxim.，憑證標本保存于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室。

2 方法與結(jié)果

2.1 胡桃楸樣品的處理 采集的胡桃楸樣品在24 h內(nèi)運回實驗室處理。將胡桃楸葉切段，莖枝和果實切成1～2 cm厚的薄片，放入-40℃冰箱中凍存。實驗前取出預(yù)凍的藥材樣品放入冷凍干燥儀中在-50℃、6 Pa的條件下冷凍干燥，約40 h后藥材干燥完全，取出，粉碎，過40目篩，備用。

2.2 胡桃楸樣品中總鞣質(zhì)的測定［13］取胡桃楸樣品粉末0.5 g，精密稱定，置于50 mL具塞錐形瓶中，精密加入70%丙酮25 mL，密封，稱定質(zhì)量;超聲提取40 min，取出，用70%丙酮補足失質(zhì)量;搖勻，靜置后濾過，精密吸取續(xù)濾液5 mL，25℃下減壓回收溶劑至無丙酮味，轉(zhuǎn)至25 mL棕色量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置后濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。以沒食子酸對照品為標準重新繪制標準曲線，得回歸方程為Y=4.651 8X-0.046 2，r=0.999 3。采用分光光度法于760 nm處分別測定供試品溶液中總多酚和游離多酚的吸光度，依據(jù)標準曲線計算出樣品中總鞣質(zhì)的含有量。

2.3 不同采收期胡桃楸樣品中總鞣質(zhì)的含有量及其動態(tài)變化 經(jīng)測定，胡桃楸12個莖枝、4個葉和2個果實樣品中總鞣質(zhì)的含有量見表1。

表1 不同時間采收的胡桃楸莖枝、葉和果實中總鞣質(zhì)Tab.1 Total tannins content in stem，leaf and fruit ofJuglans mandshurica collected in different months

胡桃楸不同藥用部位總鞣質(zhì)的含有量相差較大，由高到低的順序為葉＞果實＞莖枝，其中胡桃楸葉中總鞣質(zhì)的平均質(zhì)量分數(shù)約是胡桃楸莖枝中的2.3倍。胡桃楸莖枝、葉和果實中總鞣質(zhì)的動態(tài)變化見圖1。不同時間采收的胡桃楸莖枝樣品中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)變化無一定的規(guī)律;胡桃楸葉中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)從5月底開始迅速升高，6月底采收的胡桃楸葉樣品中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)為5月底采收的1.6倍，此后胡桃楸葉中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)相對平穩(wěn);對于6、7月采收的2個胡桃楸果實樣品，7月采收的樣品中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)約是6月采收的1.5倍。

圖1 胡桃楸莖枝、葉和果實中總鞣質(zhì)的動態(tài)變化Fig.1 Dynamic variation of total tannins content in the stem，leaf and fruit of Juglans mandshurica

3 討論

3.1 干燥方法對胡桃楸果實中總鞣質(zhì)的影響 本實驗所測定的胡桃楸莖枝和葉中總鞣質(zhì)的量與文獻［13］的研究結(jié)果一致，而果實中總鞣質(zhì)的平均質(zhì)量分數(shù) (38.91 mg/g)較文獻［13］測得的 (3.58 mg/g)高約10倍。這可能是因為文獻［13］采用陰干的方法干燥樣品，果實樣品在陰干過程中顏色迅速由綠色變?yōu)楹稚?，其中鞣質(zhì)類成分發(fā)生了變化;而本實驗采用的樣品干燥方法為冷凍干燥，果實干燥后仍保持綠色，其中鞣質(zhì)類成分未發(fā)生變化。該研究結(jié)果提示胡桃楸果實中含有較多的鞣質(zhì)，該成分在陰干過程中易發(fā)生變化;而胡桃楸莖枝和葉中鞣質(zhì)類成分在陰干過程中不易發(fā)生變化。

3.2 胡桃楸莖枝、葉和果實中總鞣質(zhì)的動態(tài)變化規(guī)律 采集到1～12月12個胡桃楸莖枝樣品，其中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)在平均值上下波動，其動態(tài)變化無一定的規(guī)律。胡桃楸葉從5月開始長出，其中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)最低;到6月底胡桃楸葉已經(jīng)逐漸茂盛，其中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)迅速增高;此后總鞣質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)趨于平穩(wěn)。8月胡桃楸果實已經(jīng)成熟，被人采收，因此本實驗只收集到6、7月2個胡桃楸果實樣品。胡桃楸果實在6月底初長成，其內(nèi)果皮沒有木質(zhì)化，全果中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)較低;至7月底果實近成熟，其中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)也隨之增高。綜上所述，胡桃楸葉和果實中總鞣質(zhì)的質(zhì)量分數(shù)與各自的生長周期基本吻合。

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