蒲公英甾醇粗提物抗炎作用研究

劉婧陶，韓 普，劉利本，程 瑤，張雪梅＊

（1.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)院動(dòng)物醫(yī)學(xué)系，吉林延吉133002；2.永吉縣畜牧業(yè)管理局，吉林永吉132200）

蒲公英（Herba Taraxaci）為菊科植物蒲公英（Taraxacum mongolicum Hand-Mazz）的 干 燥 全草，具有清熱解毒、消腫散結(jié)、利濕、利尿通淋等功效，用于疔瘡腫痛、乳癰、眼痛目赤、肺癰、濕熱黃疸和熱淋澀痛等癥的治療［1］。現(xiàn)代藥理研究表明，其具有抗氧化、抗菌和抗炎等多種作用［2-4］。蒲公英含有多種有效成分，蒲公英甾醇為其主要有效成分之一［5］。本試驗(yàn)從體內(nèi)抗炎角度探討蒲公英甾醇對(duì)醋酸致小鼠毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)，二甲苯致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的保護(hù)作用，為蒲公英甾醇的藥理研究和進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品 蒲公英購(gòu)于吉林省延吉市延西大藥房。

1.1.2 主要試劑 伊文思藍(lán)為北京索萊寶科技有限公司產(chǎn)品；角叉菜膠為Sigma公司產(chǎn)品；醋酸、二甲苯、無(wú)水乙醇、乙醚等均為天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 昆明種小鼠，雌雄各半，18g±2 g，Wistar大鼠，200g±20g，均購(gòu)自延邊大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.1.4 儀器 RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器為上海亞榮生化儀器廠產(chǎn)品，U-3900紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)為日本天美株式會(huì)社日立制作所生產(chǎn)，6mm打孔器。

1.2 方法

1.2.1 蒲公英甾醇的提取 蒲公英干燥全草100g粉碎，無(wú)水乙醇浸泡過(guò)夜，加熱回流，過(guò)濾，重復(fù)2次，合并濾液，濃縮。100mL／L氫氧化鈉水解，40℃恒溫過(guò)夜。乙醚萃取，分離，回收乙醚得到蒲公英甾醇粗提物［6］。

1.2.2 小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性試驗(yàn) 小鼠30只，隨機(jī)分為模型組，藥物高、中、低劑量組和陽(yáng)性組，每組5只。藥物組分別給予蒲公英甾醇粗提物750、375、187.5mg／kg，連續(xù)灌胃5d，模型組給予同體積生理鹽水，陽(yáng)性組一次性腹腔注射地塞米松2.5mg／kg。末次給藥后1h各組小鼠尾靜脈注射5mL／L伊文思藍(lán)0.2mL／只，并立即腹腔注射6mL／L醋酸0.1mL／10g。20min后處死小鼠，生理鹽水沖洗腹腔，收集洗液，離心，取上清，分光光度計(jì)于590nm處測(cè)OD值［7］。

1.2.3 二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗(yàn) 小鼠30只，分組與給藥方法同1.2.2。末次給藥后1h，將二甲苯50μL／只涂于小鼠右耳廓兩面致炎，左耳不涂為對(duì)照。30min后處死小鼠，用6mm打孔器分別在小鼠左耳和右耳同一位置打下組織塊，稱(chēng)重，計(jì)算腫脹度。腫脹度=右耳組織塊重-左耳組織塊重［8］。

1.2.4 角叉菜膠致大鼠足趾腫脹試驗(yàn) 大鼠30只，分組與給藥方法同1.2.2。末次給藥后1h，各組大鼠右后足足趾同一位置注射10g／L角叉菜膠0.1mL／只，分別在注射后0.5、1、2、4、6h測(cè)量足趾厚度，計(jì)算腫脹率。腫脹率=（致炎后足趾厚-致炎前足趾厚）／致炎前足趾厚［9］。

2 結(jié)果

2.1 蒲公英甾醇提取率

100g蒲公英全草中提取到5.36g蒲公英甾醇粗提物，即蒲公英甾醇提取率為5.36%。

2.2 蒲公英甾醇對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響

與模型組小鼠相比，蒲公英甾醇粗提物低劑量組和中劑量組腹腔洗液OD值降低但無(wú)顯著差異，而高劑量組與模型組相比存在顯著性差異（P＜0.05）。結(jié)果表明，蒲公英甾醇對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性有一定抑制作用（表1）。

2.3 蒲公英甾醇對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響

與模型組小鼠相比，蒲公英甾醇粗提物低劑量組耳廓腫脹程度減輕但無(wú)顯著差異（P＞0.05），而中劑量組與模型組相比存在顯著性差異（P＜0.05），高劑量組與模型組相比存在極顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)果表明，蒲公英甾醇能夠有效抑制小鼠耳廓腫脹程度（表1）。

2.4 蒲公英甾醇對(duì)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響

造模后0.5h和1h，蒲公英甾醇粗提物低、中、高劑量對(duì)大鼠足趾腫脹的抑制作用不明顯（P＞0.05）；2h和4h時(shí)，低、中、高劑量組能顯著性抑制腫脹程度（P＜0.05）。造模后6h，低、中、高劑量組與模型組比較，對(duì)腫脹抑制程度存在極顯著性差異（P＜0.01）。結(jié)果表明，蒲公英甾醇能夠抑制由角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠足趾腫脹（表2）。

表1 蒲公英甾醇對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)和二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響Table 1 The effects of taraxasterol on acetic acid-induced capillary permeability of abdominal cavity and dimethyl benzene-induced ear swelling in mice

表2 蒲公英甾醇對(duì)角叉菜膠致大鼠足趾腫脹的影響Table 2 The effect of taraxasterol on carrageenan-induced rat paw swelling

3 討論

炎癥是動(dòng)物機(jī)體對(duì)各種致炎因素及其所引起的損傷產(chǎn)生的防御性反應(yīng)。其早期為急性炎癥，病理過(guò)程一般表現(xiàn)為毛細(xì)血管擴(kuò)張、通透性亢進(jìn)、滲出和水腫。從炎癥的本質(zhì)上看，炎癥消除與消滅各種致炎因素，促進(jìn)損傷組織修復(fù)，是一種以防御為主的病理過(guò)程，但也會(huì)給機(jī)體帶來(lái)?yè)p害和痛苦，嚴(yán)重的炎癥反應(yīng)可危及生命。因此，在醫(yī)學(xué)理論指導(dǎo)下，抵抗有害性炎癥近年來(lái)成為熱門(mén)研究課題［10］。

蒲公英是我國(guó)重要的傳統(tǒng)中藥，在民間和臨床上具有廣泛的應(yīng)用，特別是用于多種炎性疾病的治療。本實(shí)驗(yàn)室已證明蒲公英提取物具有明顯的體內(nèi)外抗炎作用［11-12］，但蒲公英抗炎成分不清。蒲公英甾醇是蒲公英的主要有效成分之一，本試驗(yàn)從體內(nèi)抗炎角度探討蒲公英甾醇的體內(nèi)抗炎作用，從而確定蒲公英抗炎成分，為新藥開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。試驗(yàn)結(jié)果顯示，蒲公英甾醇對(duì)醋酸致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增強(qiáng)、二甲苯致小鼠耳廓腫脹和角叉菜膠致大鼠足趾腫脹炎癥反應(yīng)均有抑制作用。表明蒲公英甾醇對(duì)早期炎癥有抑制作用，對(duì)慢性炎癥或炎癥后期抗炎效果還有待于研究。

［1］ 路保通，張 鴦，胡新安.蒲公英有效成分提取及其抑菌活性作用［J］.中國(guó)獸醫(yī)雜志，2008，44（5）：45-47.

［2］ Hu C，Kitts D D.Antioxidant，prooxidant，and cytotoxic activities of solvent-fractionated dandelion（Taraxacum officinale）flower extracts in vitro［J］.J Agric Food Chem，2003，51（1）：301.

［3］ 呂俊華，邱士翠，張連同，等.蒲公英體外抑菌作用研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2002，13（4）：215-216.

［4］ Kristo T S，Terdy P P，Simandi B，et al.Efficiency of supercritical fluid extraction for the production of non-volatile terpenoids from Taraxaci radix［J］.Acta Pharm Hung，2001，71（3）：318.

［5］ 姜 寧，宋新波.蒲公英的藥理研究進(jìn)展［J］.中國(guó)中醫(yī)藥雜志，2008，6（12）：12-23.

［6］ 龐利蘋(píng)，徐雅琴.植物甾醇提純及單體分離工藝的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)糧油學(xué)報(bào)，2010，25（3）：124-128.

［7］ 唐 瓊，朱 玲，楊云霞，等.痛風(fēng)舒浸膏粉對(duì)血液流變性及毛細(xì)血管通透性的影響［J］.四川生理科學(xué)雜志，2002，24（3）：121-123.

［8］ 郝 偉，李田文，張沈平.濃止喘消咳液的抗炎及調(diào)節(jié)免疫作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2002，4（1）：19-21.

［9］ 景志杰，牛拴成，張軒萍.化痔靈片對(duì)大鼠實(shí)驗(yàn)性炎癥模型的抗炎作用［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，37（3）：264-265.

［10］ 陳艷梨.余甘子提取物的抗炎作用研究［J］.國(guó)際醫(yī)藥衛(wèi)生導(dǎo)報(bào)，2011，17（1）：17-20.

［11］ 平家奇，劉利本，鄒 娟，等.蒲公英提取物體內(nèi)抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究［J］.延邊大學(xué)農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2010，32（1）：52-55.

［12］ Liu L B，Xiong H Z，Ping J Q，et al.Taraxaum officinale protects against lipopolysaccharide-induced acute lung injury in mice［J］.J Ethnopharmacol，2010，20（2）：392-397.