• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    KDR等6個(gè)基因多態(tài)性與雞生長(zhǎng)和體組成性狀的相關(guān)研究

    2012-08-08 12:23:30吳憲文金鵬程王守志
    關(guān)鍵詞:品系肉雞多態(tài)性

    吳憲文,金鵬程,王守志,張 慧,李 輝

    (農(nóng)業(yè)部雞遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,哈爾濱 150030)

    試驗(yàn)前期通過(guò)雞腹脂性狀的全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS)鑒定出多個(gè)與雞腹脂性狀顯著相關(guān)的多態(tài)性位點(diǎn),其中6個(gè)位點(diǎn)分別為rs14483313(命名來(lái)源于60 K SNP芯片,下同)位于Ⅲ型酪氨酸激酶受體(a type III receptor tyrosine kinase,KDR/FlkⅠ/VEGF-2)上;rs13548811位于雞腫瘤候選抑癌基因3(Tumor suppressor candidate 3,TUSC3)上 ;GGaluGA262999位于磷酸核糖焦磷酸轉(zhuǎn)氨酶(Phosphoribosyl pyrophosphate amidotransferase,PPAT)上;GGaluGA263078位于胞外復(fù)合體成分1(Exocyst complex component 1,EXOC1)上;GGaluGA176566位于v-myb鳥類成髓細(xì)胞血癥病毒致癌基因同系物2(v-myb myeloblastosis viral oncogene homolog(avian)-like 2,MYBL2)上;rs14482748位于 KIAA 1211上;這些位點(diǎn)的多態(tài)性與肉雞高、低腹脂雙向選擇品系第11世代的腹脂重和腹脂率顯著相關(guān)。

    本研究對(duì)6個(gè)多態(tài)位點(diǎn)在高、低脂肉雞雙向選擇品系第14世代群體和AA隨機(jī)群體中進(jìn)行SNPs檢測(cè)和關(guān)聯(lián)分析,旨在研究這6個(gè)基因的多態(tài)位點(diǎn)與雞生長(zhǎng)和體組成性狀的相關(guān)性,從而為后續(xù)開展相關(guān)基因的功能研究和尋找可用于肉雞育種的分子標(biāo)記奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 雞群和性狀的測(cè)定

    以東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院選育的高、低脂肉雞雙向選擇品系第14世代群體(NEAUHLFG14)612個(gè)體(高脂系320個(gè)體,低脂系292個(gè)體)和AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體386個(gè)體為試驗(yàn)材料。試驗(yàn)雞群按常規(guī)方法進(jìn)行飼養(yǎng)管理,7周齡時(shí)翅靜脈采血,EDTA-Na2抗凝,酚∶氯仿抽提DNA之后,TE溶解,-20℃保存。測(cè)定1、3、5、7周齡體重(Body weight,BW)、屠體重(Carcass weight,CW)、腹脂重(Abdominal fat weight,AFW)、腹脂率(Abdominal fat percent,AFP)(腹脂重/體重)、肝臟重(Liver weight,LW)、心臟重(Heart weight,HW)、脾臟重(Spleen weight,SpW)、睪丸重(Testicle weight,TeW)、極低密度脂蛋白濃度(Very low density lipoproteins,VLDL)。

    1.2 引物設(shè)計(jì)

    結(jié)果見圖1。

    表1 引物序列Table 1 Primer sequences

    根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室雞腹脂性狀的全基因組關(guān)聯(lián)分析提供的多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)據(jù)和雞基因組測(cè)序結(jié)果(www.genome.ucsc.edu),使用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)6對(duì)引物用于多態(tài)性檢測(cè),引物由北京英駿生物公司合成,如表1所示。

    1.3 基因分型

    根據(jù)六個(gè)多態(tài)位點(diǎn),采用PCR-RFLP方法對(duì)高、低脂肉雞雙向選擇品系第14世代群體和AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體個(gè)體進(jìn)行基因型分析。PCR反應(yīng)體系(25 μL):50 ng·μg-1基因組DNA 1 μL、10×PCR Buffer 2.5 μL、10 mmol·L-1dNTP 2 μL、10 μmol·L-1上下游引物各0.5 μL、5 U·μL-1TaqDNA聚合酶0.25 μL、去離子水18.25 μL。PCR 反應(yīng)條件:預(yù)變性條件均為94℃,5 min;變性條件均為94℃,30 s;延伸條件均為72℃,20 s;終極延伸條件均為72℃,5 min。退火條件、循環(huán)數(shù)及酶切條件如表2所示。內(nèi)切酶由NEB公司提供,酶切反應(yīng)體系(20 μL),按照使用說(shuō)明進(jìn)行配置。

    表2 各位點(diǎn)PCR及酶切條件Table 2 Conditions of PCR,PCR-RFLP

    1.4 統(tǒng)計(jì)分析

    根據(jù)高、低肉雞腹脂雙向選擇品系群體的特點(diǎn),構(gòu)建基因型效應(yīng)統(tǒng)計(jì)模型①,根據(jù)AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體的特點(diǎn),構(gòu)建基因型效應(yīng)統(tǒng)計(jì)模型②:

    其中Y為性狀觀測(cè)值,μ為群體均值,G為基因型固定效應(yīng),L為品系固定效應(yīng),G*L為基因型和品系互作效應(yīng),F(xiàn)(L)為品系內(nèi)的家系效應(yīng),D(F,L)為家系內(nèi)與品系內(nèi)母雞的隨機(jī)效應(yīng),S為性別固定效應(yīng),G*S為基因型和性別互作效應(yīng),F(xiàn)為家系的隨機(jī)效應(yīng),D(F)為家系內(nèi)母雞的隨機(jī)效應(yīng),BW7為7周齡體重做為屠體組成性狀的校正因子,e為剩余值效應(yīng)。

    運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件JMP4.0(SAS公司,2000)進(jìn)行相關(guān)分析;采用SAS9.1.3軟件對(duì)高、低肉雞腹脂雙向選擇品系間基因型頻率和等位基因頻率差異進(jìn)行χ2獨(dú)立性檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 PCR-RFLP檢測(cè)

    結(jié)果見圖1。

    圖1 PCR-RFLP基因分型Fig.1 PCR-RFLP patterns

    針對(duì)以上六個(gè)位點(diǎn)用相應(yīng)的引物對(duì)高、低肉雞腹脂雙向選擇第14世代群體和AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增片段與目的片段大小一致且特異性較好。采用RFLP的方法進(jìn)行個(gè)體基因型分析。PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)酶切后均產(chǎn)生3種基因型,分型及命名見圖1。圖1中A-E分別對(duì)應(yīng)為SNP1-6的基因分型圖片。

    2.2 群體遺傳學(xué)分析

    對(duì)六個(gè)突變位點(diǎn)在NEAUHLF第14世代中進(jìn)行群體遺傳學(xué)分析,檢驗(yàn)結(jié)果表明基因型頻率、等位基因頻率分布在高、低腹脂雙向選擇品系間均存在極顯著差異(P<0.01)。SNP1和SNP3位點(diǎn)TT基因型和T等位基因在低脂系中的頻率極顯著高于在高脂系中的頻率,CC基因型和C等位基因在高脂系中的頻率極顯著高于在低脂系中的頻率。SNP2、SNP4和SNP5位點(diǎn)TT基因型和T等位基因在高脂系中的頻率極顯著高于在低脂系中的頻率,CC基因型和C等位基因在低脂系中的頻率極顯著高于在高脂系中的頻率。SNP6位點(diǎn)AA基因型和A等位基因在高脂系中的頻率極顯著高于在低脂系中的頻率,GG基因型和G等位基因在低脂系中的頻率極顯著高于在高脂系中的頻率,如表3所示。

    表3 六個(gè)位點(diǎn)不同基因型、等位基因頻率在高、低脂系兩系間的分析Table 3 Comparisons of frequencies of genotype and allele in two lines of chicken divergently selected for abdominal fat content

    2.3 6個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性與雞生長(zhǎng)和體組成性狀的相關(guān)分析

    在高、低肉雞腹脂雙向選擇品系第14世代群體和AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體中進(jìn)行基因型與生長(zhǎng)和體組成性狀的相關(guān)分析,各位點(diǎn)對(duì)性狀的影響(P值)見表4,基因型效應(yīng)間的多重比較結(jié)果見表5。結(jié)果表明SNP1位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)NEAUHLFG14的AFW、AFP、CW和LW 有顯著影響(P<0.05),并且這四種性狀的CC和CT基因型個(gè)體最小二乘均值(以下簡(jiǎn)稱為均值)均顯著高于TT基因型個(gè)體(P<0.05)。

    SNP2位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)NEAUHLFG14的BW7、HW和VLDL有顯著影響(P<0.05),BW7和VLDL的CC和TC基因型個(gè)體均值顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05),HW的TT和TC型個(gè)體均值顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05);該位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)AA群體的SpW有顯著影響(P<0.05),且CC型個(gè)體均值顯著高于TC和TT型個(gè)體(P<0.05)。

    表4 六個(gè)多態(tài)位點(diǎn)對(duì)高、低脂雙向選擇品系14世代和AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體生長(zhǎng)和體組成性狀的影響Table 4 Effects of six polymorphism on growth and body composition traits in NEAUHLFG14 and Arbor Acres(AA)commercial random population

    表5 高、低脂雙向選擇品系第14世代中各位點(diǎn)基因型間多重比較Table 5 Multiple comparisons among least-squares means with different genotypes in NEAUHLFG14

    SNP3位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)NEAUHLFG14的VLDL有顯著影響(P<0.05),且TT型個(gè)體均值顯著高于TC和CC型個(gè)體(P<0.05);該位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)AA群體的LW有顯著影響(P<0.05),且TC型個(gè)體均值顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05)。

    SNP4位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)NEAUHLFG14的BW7、CW、HW和VLDL有顯著影響(P<0.05),CC型個(gè)體的VLDL和HW顯著高于TC和TT型個(gè)體(P<0.05),CC和TC基因型個(gè)體的BW7顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05),CC型個(gè)體的CW顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05);該位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)AA群體的BW7和SpW有顯著影響(P<0.05),且TT型個(gè)體的BW7顯著高于TC和CC型個(gè)體(P<0.05),CC型個(gè)體的SpW顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05)。

    SNP5位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)NEAUHLFG14的SpW有顯著影響(P<0.05),且CC型個(gè)體均值顯著高于TC和TT型個(gè)體(P<0.05);該位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)AA群體的BW3有顯著影響(P<0.05),TT型個(gè)體均值顯著高于CC型個(gè)體(P<0.05)。

    SNP6位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)NEAUHLFG14的VLDL有顯著影響(P<0.05),且GG型個(gè)體均值顯著高于AA和AG型個(gè)體(P<0.05);該位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)AA群體的BW1和LW有顯著影響(P<0.05),且AA個(gè)體BW1顯著高于AG和GG型個(gè)體(P<0.05),AA和AG型個(gè)體的LW顯著高于GG型個(gè)體(P<0.05)。

    3 討論與結(jié)論

    rs14483313突變位于KDR基因上,KDR基因也叫做FlkⅠ、VEGF-2,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子2(Vascular endothelial growth factor-2,VEGF-2)是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子家族成員[1],它與血管的生成及造血功能有關(guān)[2]。有研究表明血管生成與脂肪生成在時(shí)間和空間上有很大的聯(lián)系。在時(shí)間上關(guān)于脂肪組織發(fā)育研究指出,胚胎期血管的生成早于脂肪的生成[3]。在空間上新的血管生成總是伴隨著脂肪細(xì)胞的分化,在這個(gè)過(guò)程中VEGF是關(guān)鍵因子[4]。肥胖與骨骼肌毛細(xì)血管密度降低有關(guān)[5],抑制血管生成可以減少脂肪聚集[6-9]??梢钥闯鲅苌膳c脂肪生成之間存在密切關(guān)系。

    本研究結(jié)果顯示,rs14483313(SNP1)突變對(duì)AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體腹脂性狀的影響未達(dá)到顯著水平。但對(duì)高、低脂肉雞雙向選擇品系第14世代AFW和AFP都有顯著影響(P<0.05),這與前期GWAS在高、低脂肉雞雙向選擇品系第11世代所得結(jié)果一致。該位點(diǎn)在NEAUHLFG14的低脂系中所有個(gè)體均為TT基因型,推測(cè)T等位基因有可能經(jīng)過(guò)前幾個(gè)世代的選擇已固定。從基因型效應(yīng)來(lái)看,TT基因型個(gè)體AFW、AFP顯著低于CC型個(gè)體(P<0.01),所以,T等位基因是降低雞腹脂沉積的等位基因,在育種中可以嘗試選擇TT基因型個(gè)體培育低脂肉雞品系。

    研究發(fā)現(xiàn),rs13548811(SNP2)突變對(duì)高、低脂肉雞雙向選擇品系第14世代群體后期體重性狀有影響,從3~7周齡逐漸增大,到3、5周齡時(shí)已接近顯著(P值分別為0.0736,0.0637,表4中未給出),7周齡時(shí)達(dá)到顯著水平(P<0.05)。CC型個(gè)體的7周齡體重顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05),CC基因型和C等位基因在低脂系中的頻率顯著高于在高脂系中的頻率,以此推斷CC基因型為高、低脂系中體重性狀的有利基因型,可以嘗試在育種中通過(guò)選擇此基因型個(gè)體提高雞的體重性狀。

    GGaluGA263078(SNP4)突變對(duì)雞7周齡體重有顯著影響,尤其在NEAUHLFG14和AA群體遺傳背景不同的群體中該位點(diǎn)對(duì)BW7的影響一致(P<0.05),因此推測(cè)該位點(diǎn)很可能是影響雞體重性狀的致因突變位點(diǎn),或與致因突變位點(diǎn)緊密連鎖。

    本文所研究的6個(gè)突變位點(diǎn)在高、低脂肉雞雙向選擇品系第11世代中都與腹脂性狀顯著相關(guān),但在NEAUHLFG14和AA群體中卻無(wú)一致結(jié)果。群體的遺傳背景不同是造成群體間相關(guān)分析不一致的重要原因之一。高、低脂雙向選擇品系是一個(gè)對(duì)腹脂性狀經(jīng)過(guò)多世代選擇的群體,隨著從第11世代到第14世代的選擇,該群體基因組位點(diǎn)間連鎖不平衡程度發(fā)生了變化;與高、低脂雙向選擇品系群體相比,AA隨機(jī)群體未經(jīng)過(guò)特定性狀選擇群體,其遺傳背景(基因的等位基因頻率、基因位點(diǎn)連鎖不平衡程度等)不同的。這時(shí)突變位點(diǎn)與影響雞腹脂性狀的致因突變緊密連鎖。

    在這6個(gè)突變位點(diǎn)中有4個(gè)(SNP2、SNP3、SNP4和SNP6)都與NEAUHLFG14的VLDL濃度顯著相關(guān)(P<0.05)。有研究表明,VLDL濃度是間接度量雞體肥度的最好指標(biāo),血漿VLDL濃度與腹脂重和腹脂率呈顯著的正表型相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.4168和0.3576[10],對(duì)血漿VLDL濃度的低向選擇會(huì)使腹脂沉積減少[11]。結(jié)果表明,這些基因可能對(duì)雞的腹部脂肪組織生長(zhǎng)和發(fā)育發(fā)揮重要作用。

    綜上所述,這六個(gè)基因可能是影響雞腹脂性狀的重要基因,但本研究中的多態(tài)位點(diǎn)是否為功能性位點(diǎn)需進(jìn)一步驗(yàn)證。

    [1] Hu J S,Hastings G A,Cherry S,et al.A novel regulatory function of proteolytically cleaved VEGF-2 for vascular endothelial and smooth muscle cells[J].FASEB J,1997,11(6):498-504.

    [2] Shalaby F,Ho J,Stanford W L,et al.A requirement for Flk1 in primitive and definitive hematopoiesis and vasculogenesis[J].Cell,1997,89(6):981-990.

    [3] Neels J G,Thinnes T,Loskutoff D J.Angiogenesis in anin vivomodel of adipose tissue development[J].FASEB J,2004,18(9):983-985.

    [4] Nishimura S,Manabe I,Nagasaki M,et al.Adipogenesis in obesity requires close interplay between differentiating adipocytes,stromal cells,and blood vessels[J].Diabetes,2007,56(6):1517-1526.

    [5] Gavin T P,Stallings H R,Zwetsloot K A,et al.Lower capillary density but no difference in VEGF expression inobesevs.lean young skeletal muscle in humans[J].J Appl Physiol,2005,98(1):315-321.

    [6] Rupnick M A,Panigrahy D,Zhang C Y,et al.Adipose tissue mass can be regulated through the vasculature[J].Proc Natl Acad Sci,2002,99(16):10730-10735.

    [7] Liu L,M M.Angiogenesis Inhibitors may regulate adiposity[J].Nutrition Reviews,2003,61(11):384.

    [8] Fukumura D,Ushiyama A,Duda D G,et al.Paracrine regulation of angiogenesis and adipocyte differentiation duringin vivoadipogenesis[J].Circ Res,2003,93(9):88-97.

    [9] Kolonin M G,Saha P K,Chan L,et al.Reversal of obesity by targeted ablation of adipose tissue[J].Nat Med,2004,10(6):625-632.

    [10] 李輝,龔道清.肉雞血漿極低密度脂蛋白濃度與屠體肥度性狀的相關(guān)研究[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),1997(8):1-5.

    [11] 李輝,王靜.蛋用型雞血漿極低密度脂蛋白濃度與蛋黃脂肪酸含量的相關(guān)研究[J].新疆農(nóng)業(yè)科技,1996(1):54-57.

    猜你喜歡
    品系肉雞多態(tài)性
    貴州黑山羊新品系選育
    10個(gè)團(tuán)豆新品系在綏陽(yáng)縣的田間性狀及產(chǎn)量表現(xiàn)
    單核苷酸多態(tài)性與中醫(yī)證候相關(guān)性研究進(jìn)展
    肉雞腹水咋防治
    4個(gè)地被菊新品系對(duì)濕熱脅迫的耐受性研究
    園林科技(2020年2期)2020-01-18 03:28:18
    肉雞常見腹瀉病的診斷和治療
    馬鈴薯cpDNA/mtDNA多態(tài)性的多重PCR檢測(cè)
    GlobalFiler~? PCR擴(kuò)增試劑盒驗(yàn)證及其STR遺傳多態(tài)性
    蛋雞和肉雞
    蛋雞和肉雞
    真人做人爱边吃奶动态| 亚洲精品色激情综合| 久久精品综合一区二区三区| 亚洲国产欧美一区二区综合| 午夜激情欧美在线| 成人性生交大片免费视频hd| 观看免费一级毛片| 欧美不卡视频在线免费观看| 波多野结衣高清无吗| avwww免费| 变态另类丝袜制服| 又大又爽又粗| 性欧美人与动物交配| 在线免费观看不下载黄p国产 | 天堂网av新在线| 9191精品国产免费久久| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产成人系列免费观看| 久久久国产精品麻豆| 天天躁日日操中文字幕| 最新在线观看一区二区三区| 精品国内亚洲2022精品成人| 久久国产精品影院| 精品人妻1区二区| 国产免费av片在线观看野外av| 亚洲中文av在线| 国产精品av久久久久免费| 亚洲精华国产精华精| 久久九九热精品免费| 欧美3d第一页| 色视频www国产| 最新美女视频免费是黄的| netflix在线观看网站| 一级毛片女人18水好多| 成人特级黄色片久久久久久久| 午夜免费成人在线视频| 宅男免费午夜| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 色尼玛亚洲综合影院| 看片在线看免费视频| 免费在线观看日本一区| 亚洲欧美日韩东京热| a级毛片在线看网站| 黄色片一级片一级黄色片| 免费在线观看亚洲国产| 看片在线看免费视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 国产免费男女视频| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 搡老妇女老女人老熟妇| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产一区二区三区在线臀色熟女| av片东京热男人的天堂| 人人妻人人看人人澡| 亚洲av成人精品一区久久| 成人精品一区二区免费| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 国产乱人视频| 色综合亚洲欧美另类图片| 亚洲精品粉嫩美女一区| 亚洲黑人精品在线| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产探花在线观看一区二区| av在线蜜桃| 久久这里只有精品中国| 国产精品免费一区二区三区在线| 久久久精品欧美日韩精品| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 亚洲国产精品999在线| 成年女人永久免费观看视频| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 精品一区二区三区四区五区乱码| 99精品在免费线老司机午夜| 午夜两性在线视频| 国产主播在线观看一区二区| cao死你这个sao货| 老鸭窝网址在线观看| 欧美色欧美亚洲另类二区| 五月玫瑰六月丁香| 亚洲五月婷婷丁香| 无人区码免费观看不卡| 99久久精品一区二区三区| 国产免费男女视频| 五月伊人婷婷丁香| 国产av不卡久久| 最近视频中文字幕2019在线8| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 亚洲五月婷婷丁香| 国产久久久一区二区三区| 欧美日韩国产亚洲二区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 亚洲精品美女久久av网站| 中国美女看黄片| 啪啪无遮挡十八禁网站| 99riav亚洲国产免费| 国产淫片久久久久久久久 | 亚洲天堂国产精品一区在线| 熟女电影av网| 草草在线视频免费看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 一本一本综合久久| 国产成人av激情在线播放| 一个人看的www免费观看视频| www.自偷自拍.com| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 日本免费a在线| 精品欧美国产一区二区三| 校园春色视频在线观看| 欧美日韩精品网址| 日本与韩国留学比较| 亚洲av电影在线进入| 国产精华一区二区三区| 国产v大片淫在线免费观看| 久久精品国产综合久久久| 麻豆久久精品国产亚洲av| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 国产精品电影一区二区三区| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 搡老岳熟女国产| 亚洲性夜色夜夜综合| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 精品欧美国产一区二区三| 中文字幕最新亚洲高清| 日本熟妇午夜| 久久亚洲精品不卡| cao死你这个sao货| 天堂影院成人在线观看| 高清在线国产一区| 成人三级做爰电影| 国语自产精品视频在线第100页| 一区二区三区激情视频| 男人舔奶头视频| 十八禁网站免费在线| cao死你这个sao货| 国产 一区 欧美 日韩| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 亚洲真实伦在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 日日夜夜操网爽| www国产在线视频色| 亚洲午夜理论影院| 在线观看舔阴道视频| 午夜免费成人在线视频| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产真实乱freesex| 脱女人内裤的视频| 国产高潮美女av| 波多野结衣高清无吗| 国产高清有码在线观看视频| 午夜福利成人在线免费观看| 欧美不卡视频在线免费观看| 久久久久久久久久黄片| 亚洲av熟女| 老司机福利观看| 白带黄色成豆腐渣| 亚洲成人久久性| 国产黄a三级三级三级人| 两性夫妻黄色片| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久欧美精品欧美久久欧美| 香蕉久久夜色| 热99在线观看视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产成人av教育| 麻豆一二三区av精品| 男人舔奶头视频| av在线天堂中文字幕| 欧美丝袜亚洲另类 | 好男人在线观看高清免费视频| 国产97色在线日韩免费| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产男靠女视频免费网站| 久久天堂一区二区三区四区| 久久久国产成人免费| 免费观看的影片在线观看| 黑人欧美特级aaaaaa片| 91字幕亚洲| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 国产成人系列免费观看| 香蕉av资源在线| 色在线成人网| 亚洲国产看品久久| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产成年人精品一区二区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 一二三四社区在线视频社区8| 日韩欧美免费精品| 日本三级黄在线观看| 国产精品国产高清国产av| 国产一级毛片七仙女欲春2| 99国产精品99久久久久| 一级作爱视频免费观看| 麻豆av在线久日| 成人亚洲精品av一区二区| 99国产精品99久久久久| 精品国产亚洲在线| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 国产成人影院久久av| 婷婷丁香在线五月| 成人鲁丝片一二三区免费| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 一本综合久久免费| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 嫩草影视91久久| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国产黄片美女视频| 欧美一级毛片孕妇| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 桃色一区二区三区在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美不卡视频在线免费观看| 成人国产综合亚洲| 丁香六月欧美| 国产精品野战在线观看| 国产成人精品久久二区二区免费| 欧美激情久久久久久爽电影| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 中文字幕高清在线视频| 日韩欧美 国产精品| 日韩三级视频一区二区三区| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 成人午夜高清在线视频| 在线观看日韩欧美| 给我免费播放毛片高清在线观看| 国产成人欧美在线观看| 99热精品在线国产| 免费在线观看日本一区| 亚洲av成人一区二区三| 国产精品综合久久久久久久免费| 日本熟妇午夜| 亚洲色图av天堂| 免费在线观看影片大全网站| 日本与韩国留学比较| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国语自产精品视频在线第100页| 亚洲美女黄片视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产精品日韩av在线免费观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 禁无遮挡网站| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 欧美丝袜亚洲另类 | 日韩有码中文字幕| 亚洲五月婷婷丁香| 日本在线视频免费播放| 久久久久久久久中文| 99国产极品粉嫩在线观看| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 国产av麻豆久久久久久久| 神马国产精品三级电影在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 中文在线观看免费www的网站| 91字幕亚洲| 精品国产三级普通话版| 青草久久国产| 成人永久免费在线观看视频| 国产三级中文精品| 黄频高清免费视频| 国产精品久久电影中文字幕| 丁香六月欧美| 精华霜和精华液先用哪个| www.www免费av| www.精华液| 小说图片视频综合网站| 亚洲av成人av| 成年女人毛片免费观看观看9| 一区二区三区国产精品乱码| www.自偷自拍.com| 亚洲国产欧美人成| 久久久水蜜桃国产精品网| 日韩有码中文字幕| 亚洲一区二区三区不卡视频| 久久精品国产清高在天天线| 在线免费观看不下载黄p国产 | 在线十欧美十亚洲十日本专区| 99久久精品热视频| www.www免费av| 久久久久久久久中文| 热99在线观看视频| 制服丝袜大香蕉在线| 伦理电影免费视频| 亚洲一区二区三区不卡视频| 精品久久久久久久毛片微露脸| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 两个人的视频大全免费| 嫩草影院精品99| 最新中文字幕久久久久 | 免费人成视频x8x8入口观看| 国产v大片淫在线免费观看| 亚洲国产精品合色在线| 亚洲av成人av| 久久久国产成人精品二区| 成人特级黄色片久久久久久久| 人人妻人人澡欧美一区二区| 久久久久国内视频| 国产精品电影一区二区三区| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 成在线人永久免费视频| 亚洲av成人精品一区久久| 成人三级黄色视频| 亚洲五月婷婷丁香| 在线十欧美十亚洲十日本专区| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美色视频一区免费| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚洲中文字幕日韩| 欧美成人性av电影在线观看| 精品日产1卡2卡| 亚洲国产高清在线一区二区三| 精品久久久久久久毛片微露脸| 一本精品99久久精品77| 午夜影院日韩av| cao死你这个sao货| 中文字幕av在线有码专区| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 国产激情欧美一区二区| 美女午夜性视频免费| 成人av在线播放网站| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 黑人欧美特级aaaaaa片| 欧美日韩福利视频一区二区| 午夜福利18| 男人舔奶头视频| 色播亚洲综合网| 亚洲av片天天在线观看| 欧美日本视频| 亚洲国产欧美人成| 国产精品永久免费网站| 国产精品久久久av美女十八| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 成人鲁丝片一二三区免费| 国产精品影院久久| 亚洲精品久久国产高清桃花| 亚洲天堂国产精品一区在线| 午夜影院日韩av| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 久久香蕉国产精品| 婷婷丁香在线五月| 2021天堂中文幕一二区在线观| а√天堂www在线а√下载| 亚洲在线自拍视频| 香蕉av资源在线| 美女高潮的动态| 亚洲精品一区av在线观看| 99久久国产精品久久久| 亚洲中文字幕日韩| 好男人在线观看高清免费视频| 欧美大码av| 亚洲片人在线观看| 免费在线观看成人毛片| 中文字幕高清在线视频| 长腿黑丝高跟| 欧美国产日韩亚洲一区| 无遮挡黄片免费观看| 操出白浆在线播放| 国产高潮美女av| 午夜精品久久久久久毛片777| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 日韩三级视频一区二区三区| 99热这里只有是精品50| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 亚洲av日韩精品久久久久久密| www.熟女人妻精品国产| 国产精品久久久av美女十八| 成年免费大片在线观看| 精品久久久久久久久久免费视频| av欧美777| 亚洲人成电影免费在线| 免费看光身美女| 国产三级黄色录像| 国产成人影院久久av| 久久久久免费精品人妻一区二区| 1024香蕉在线观看| 亚洲欧美精品综合久久99| 成人国产一区最新在线观看| 天堂动漫精品| 老司机午夜福利在线观看视频| 12—13女人毛片做爰片一| 国产成人精品久久二区二区91| 日韩欧美在线乱码| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 12—13女人毛片做爰片一| 久久性视频一级片| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 最近最新中文字幕大全免费视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 少妇人妻一区二区三区视频| 亚洲欧美激情综合另类| 三级国产精品欧美在线观看 | 国产探花在线观看一区二区| 久久天堂一区二区三区四区| 少妇的丰满在线观看| av福利片在线观看| 岛国在线免费视频观看| 午夜日韩欧美国产| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲午夜理论影院| 九色成人免费人妻av| 最近最新中文字幕大全电影3| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 午夜激情福利司机影院| 99视频精品全部免费 在线 | 18美女黄网站色大片免费观看| netflix在线观看网站| 99热只有精品国产| 99久久国产精品久久久| 亚洲国产精品合色在线| 欧美午夜高清在线| 精品欧美国产一区二区三| 久久国产精品人妻蜜桃| 色老头精品视频在线观看| 少妇丰满av| 国产淫片久久久久久久久 | 90打野战视频偷拍视频| 真人一进一出gif抽搐免费| 高清在线国产一区| 国产精品一区二区精品视频观看| 国产av不卡久久| 国产单亲对白刺激| 久久久久国产一级毛片高清牌| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 美女黄网站色视频| 我的老师免费观看完整版| 无遮挡黄片免费观看| 香蕉国产在线看| 国产激情偷乱视频一区二区| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 在线观看午夜福利视频| av天堂中文字幕网| 日韩av在线大香蕉| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 黄色女人牲交| 亚洲第一电影网av| 精品人妻1区二区| 99久久综合精品五月天人人| 亚洲国产精品999在线| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 性欧美人与动物交配| av天堂在线播放| 在线观看午夜福利视频| 黄色丝袜av网址大全| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美中文日本在线观看视频| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲精品美女久久av网站| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 制服人妻中文乱码| 成人国产一区最新在线观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 99热这里只有是精品50| av在线天堂中文字幕| 九色国产91popny在线| 久久草成人影院| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成人国产一区最新在线观看| 国产一区在线观看成人免费| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 狠狠狠狠99中文字幕| 啦啦啦韩国在线观看视频| 最新中文字幕久久久久 | 欧美高清成人免费视频www| 少妇丰满av| 日韩高清综合在线| 国产99白浆流出| 日本 av在线| 亚洲成a人片在线一区二区| 欧美一区二区精品小视频在线| 后天国语完整版免费观看| 1000部很黄的大片| 成年人黄色毛片网站| www.自偷自拍.com| 桃红色精品国产亚洲av| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 舔av片在线| 国产麻豆成人av免费视频| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 免费av毛片视频| xxxwww97欧美| 看黄色毛片网站| 国产极品精品免费视频能看的| 91av网一区二区| 精品无人区乱码1区二区| 亚洲精品在线美女| 99热6这里只有精品| 悠悠久久av| a级毛片在线看网站| 色哟哟哟哟哟哟| 国产成人aa在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 精品一区二区三区视频在线 | 欧美+亚洲+日韩+国产| 久久久色成人| 日本黄大片高清| 午夜激情福利司机影院| 欧美又色又爽又黄视频| 成年女人毛片免费观看观看9| 无遮挡黄片免费观看| 午夜福利成人在线免费观看| 最新中文字幕久久久久 | 国内精品美女久久久久久| 一本久久中文字幕| 一进一出好大好爽视频| 99热这里只有精品一区 | 成人国产一区最新在线观看| 97超视频在线观看视频| 久久中文字幕一级| 99热这里只有精品一区 | 免费人成视频x8x8入口观看| 国产伦精品一区二区三区四那| 性色av乱码一区二区三区2| 欧美日韩国产亚洲二区| 中国美女看黄片| 亚洲专区国产一区二区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 日韩中文字幕欧美一区二区| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美激情久久久久久爽电影| 精品欧美国产一区二区三| 变态另类成人亚洲欧美熟女| bbb黄色大片| 一进一出抽搐gif免费好疼| 欧美一级毛片孕妇| 国产欧美日韩一区二区三| 制服人妻中文乱码| 亚洲国产欧美人成| 9191精品国产免费久久| 欧美激情在线99| 国产黄片美女视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 欧美一区二区精品小视频在线| 午夜精品久久久久久毛片777| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 两人在一起打扑克的视频| 香蕉av资源在线| 久久伊人香网站| 欧美一区二区国产精品久久精品| 美女被艹到高潮喷水动态| av视频在线观看入口| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 亚洲成av人片免费观看| 两个人的视频大全免费| 欧美成人免费av一区二区三区| 一a级毛片在线观看| 99精品在免费线老司机午夜| 日韩三级视频一区二区三区| 国产精品国产高清国产av| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲专区中文字幕在线| 在线免费观看不下载黄p国产 | 麻豆成人午夜福利视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲欧美精品综合久久99| 一a级毛片在线观看| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 国产黄片美女视频| 亚洲精品久久国产高清桃花| 精品久久久久久,| 欧美3d第一页| 波多野结衣高清作品| 757午夜福利合集在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 日本五十路高清| 少妇的丰满在线观看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 免费看十八禁软件| 又黄又粗又硬又大视频| 1024香蕉在线观看| 精品乱码久久久久久99久播| 国产精华一区二区三区| 亚洲无线观看免费| 国产真人三级小视频在线观看| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 成熟少妇高潮喷水视频| 免费看光身美女| 国产亚洲欧美在线一区二区| 亚洲 欧美一区二区三区| ponron亚洲| 色视频www国产| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 国产欧美日韩精品一区二区| 色精品久久人妻99蜜桃| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲一区二区三区色噜噜| 校园春色视频在线观看| av天堂在线播放| 91老司机精品| 成人特级av手机在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 最近在线观看免费完整版| 婷婷六月久久综合丁香|