• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    KDR等6個(gè)基因多態(tài)性與雞生長(zhǎng)和體組成性狀的相關(guān)研究

    2012-08-08 12:23:30吳憲文金鵬程王守志
    關(guān)鍵詞:品系肉雞多態(tài)性

    吳憲文,金鵬程,王守志,張 慧,李 輝

    (農(nóng)業(yè)部雞遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,哈爾濱 150030)

    試驗(yàn)前期通過(guò)雞腹脂性狀的全基因組關(guān)聯(lián)分析(GWAS)鑒定出多個(gè)與雞腹脂性狀顯著相關(guān)的多態(tài)性位點(diǎn),其中6個(gè)位點(diǎn)分別為rs14483313(命名來(lái)源于60 K SNP芯片,下同)位于Ⅲ型酪氨酸激酶受體(a type III receptor tyrosine kinase,KDR/FlkⅠ/VEGF-2)上;rs13548811位于雞腫瘤候選抑癌基因3(Tumor suppressor candidate 3,TUSC3)上 ;GGaluGA262999位于磷酸核糖焦磷酸轉(zhuǎn)氨酶(Phosphoribosyl pyrophosphate amidotransferase,PPAT)上;GGaluGA263078位于胞外復(fù)合體成分1(Exocyst complex component 1,EXOC1)上;GGaluGA176566位于v-myb鳥類成髓細(xì)胞血癥病毒致癌基因同系物2(v-myb myeloblastosis viral oncogene homolog(avian)-like 2,MYBL2)上;rs14482748位于 KIAA 1211上;這些位點(diǎn)的多態(tài)性與肉雞高、低腹脂雙向選擇品系第11世代的腹脂重和腹脂率顯著相關(guān)。

    本研究對(duì)6個(gè)多態(tài)位點(diǎn)在高、低脂肉雞雙向選擇品系第14世代群體和AA隨機(jī)群體中進(jìn)行SNPs檢測(cè)和關(guān)聯(lián)分析,旨在研究這6個(gè)基因的多態(tài)位點(diǎn)與雞生長(zhǎng)和體組成性狀的相關(guān)性,從而為后續(xù)開展相關(guān)基因的功能研究和尋找可用于肉雞育種的分子標(biāo)記奠定基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 雞群和性狀的測(cè)定

    以東北農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院選育的高、低脂肉雞雙向選擇品系第14世代群體(NEAUHLFG14)612個(gè)體(高脂系320個(gè)體,低脂系292個(gè)體)和AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體386個(gè)體為試驗(yàn)材料。試驗(yàn)雞群按常規(guī)方法進(jìn)行飼養(yǎng)管理,7周齡時(shí)翅靜脈采血,EDTA-Na2抗凝,酚∶氯仿抽提DNA之后,TE溶解,-20℃保存。測(cè)定1、3、5、7周齡體重(Body weight,BW)、屠體重(Carcass weight,CW)、腹脂重(Abdominal fat weight,AFW)、腹脂率(Abdominal fat percent,AFP)(腹脂重/體重)、肝臟重(Liver weight,LW)、心臟重(Heart weight,HW)、脾臟重(Spleen weight,SpW)、睪丸重(Testicle weight,TeW)、極低密度脂蛋白濃度(Very low density lipoproteins,VLDL)。

    1.2 引物設(shè)計(jì)

    結(jié)果見圖1。

    表1 引物序列Table 1 Primer sequences

    根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室雞腹脂性狀的全基因組關(guān)聯(lián)分析提供的多態(tài)性位點(diǎn)數(shù)據(jù)和雞基因組測(cè)序結(jié)果(www.genome.ucsc.edu),使用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)6對(duì)引物用于多態(tài)性檢測(cè),引物由北京英駿生物公司合成,如表1所示。

    1.3 基因分型

    根據(jù)六個(gè)多態(tài)位點(diǎn),采用PCR-RFLP方法對(duì)高、低脂肉雞雙向選擇品系第14世代群體和AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體個(gè)體進(jìn)行基因型分析。PCR反應(yīng)體系(25 μL):50 ng·μg-1基因組DNA 1 μL、10×PCR Buffer 2.5 μL、10 mmol·L-1dNTP 2 μL、10 μmol·L-1上下游引物各0.5 μL、5 U·μL-1TaqDNA聚合酶0.25 μL、去離子水18.25 μL。PCR 反應(yīng)條件:預(yù)變性條件均為94℃,5 min;變性條件均為94℃,30 s;延伸條件均為72℃,20 s;終極延伸條件均為72℃,5 min。退火條件、循環(huán)數(shù)及酶切條件如表2所示。內(nèi)切酶由NEB公司提供,酶切反應(yīng)體系(20 μL),按照使用說(shuō)明進(jìn)行配置。

    表2 各位點(diǎn)PCR及酶切條件Table 2 Conditions of PCR,PCR-RFLP

    1.4 統(tǒng)計(jì)分析

    根據(jù)高、低肉雞腹脂雙向選擇品系群體的特點(diǎn),構(gòu)建基因型效應(yīng)統(tǒng)計(jì)模型①,根據(jù)AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體的特點(diǎn),構(gòu)建基因型效應(yīng)統(tǒng)計(jì)模型②:

    其中Y為性狀觀測(cè)值,μ為群體均值,G為基因型固定效應(yīng),L為品系固定效應(yīng),G*L為基因型和品系互作效應(yīng),F(xiàn)(L)為品系內(nèi)的家系效應(yīng),D(F,L)為家系內(nèi)與品系內(nèi)母雞的隨機(jī)效應(yīng),S為性別固定效應(yīng),G*S為基因型和性別互作效應(yīng),F(xiàn)為家系的隨機(jī)效應(yīng),D(F)為家系內(nèi)母雞的隨機(jī)效應(yīng),BW7為7周齡體重做為屠體組成性狀的校正因子,e為剩余值效應(yīng)。

    運(yùn)用統(tǒng)計(jì)軟件JMP4.0(SAS公司,2000)進(jìn)行相關(guān)分析;采用SAS9.1.3軟件對(duì)高、低肉雞腹脂雙向選擇品系間基因型頻率和等位基因頻率差異進(jìn)行χ2獨(dú)立性檢驗(yàn)。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 PCR-RFLP檢測(cè)

    結(jié)果見圖1。

    圖1 PCR-RFLP基因分型Fig.1 PCR-RFLP patterns

    針對(duì)以上六個(gè)位點(diǎn)用相應(yīng)的引物對(duì)高、低肉雞腹脂雙向選擇第14世代群體和AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體基因組DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增,擴(kuò)增片段與目的片段大小一致且特異性較好。采用RFLP的方法進(jìn)行個(gè)體基因型分析。PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)酶切后均產(chǎn)生3種基因型,分型及命名見圖1。圖1中A-E分別對(duì)應(yīng)為SNP1-6的基因分型圖片。

    2.2 群體遺傳學(xué)分析

    對(duì)六個(gè)突變位點(diǎn)在NEAUHLF第14世代中進(jìn)行群體遺傳學(xué)分析,檢驗(yàn)結(jié)果表明基因型頻率、等位基因頻率分布在高、低腹脂雙向選擇品系間均存在極顯著差異(P<0.01)。SNP1和SNP3位點(diǎn)TT基因型和T等位基因在低脂系中的頻率極顯著高于在高脂系中的頻率,CC基因型和C等位基因在高脂系中的頻率極顯著高于在低脂系中的頻率。SNP2、SNP4和SNP5位點(diǎn)TT基因型和T等位基因在高脂系中的頻率極顯著高于在低脂系中的頻率,CC基因型和C等位基因在低脂系中的頻率極顯著高于在高脂系中的頻率。SNP6位點(diǎn)AA基因型和A等位基因在高脂系中的頻率極顯著高于在低脂系中的頻率,GG基因型和G等位基因在低脂系中的頻率極顯著高于在高脂系中的頻率,如表3所示。

    表3 六個(gè)位點(diǎn)不同基因型、等位基因頻率在高、低脂系兩系間的分析Table 3 Comparisons of frequencies of genotype and allele in two lines of chicken divergently selected for abdominal fat content

    2.3 6個(gè)位點(diǎn)多態(tài)性與雞生長(zhǎng)和體組成性狀的相關(guān)分析

    在高、低肉雞腹脂雙向選擇品系第14世代群體和AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體中進(jìn)行基因型與生長(zhǎng)和體組成性狀的相關(guān)分析,各位點(diǎn)對(duì)性狀的影響(P值)見表4,基因型效應(yīng)間的多重比較結(jié)果見表5。結(jié)果表明SNP1位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)NEAUHLFG14的AFW、AFP、CW和LW 有顯著影響(P<0.05),并且這四種性狀的CC和CT基因型個(gè)體最小二乘均值(以下簡(jiǎn)稱為均值)均顯著高于TT基因型個(gè)體(P<0.05)。

    SNP2位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)NEAUHLFG14的BW7、HW和VLDL有顯著影響(P<0.05),BW7和VLDL的CC和TC基因型個(gè)體均值顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05),HW的TT和TC型個(gè)體均值顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05);該位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)AA群體的SpW有顯著影響(P<0.05),且CC型個(gè)體均值顯著高于TC和TT型個(gè)體(P<0.05)。

    表4 六個(gè)多態(tài)位點(diǎn)對(duì)高、低脂雙向選擇品系14世代和AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體生長(zhǎng)和體組成性狀的影響Table 4 Effects of six polymorphism on growth and body composition traits in NEAUHLFG14 and Arbor Acres(AA)commercial random population

    表5 高、低脂雙向選擇品系第14世代中各位點(diǎn)基因型間多重比較Table 5 Multiple comparisons among least-squares means with different genotypes in NEAUHLFG14

    SNP3位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)NEAUHLFG14的VLDL有顯著影響(P<0.05),且TT型個(gè)體均值顯著高于TC和CC型個(gè)體(P<0.05);該位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)AA群體的LW有顯著影響(P<0.05),且TC型個(gè)體均值顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05)。

    SNP4位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)NEAUHLFG14的BW7、CW、HW和VLDL有顯著影響(P<0.05),CC型個(gè)體的VLDL和HW顯著高于TC和TT型個(gè)體(P<0.05),CC和TC基因型個(gè)體的BW7顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05),CC型個(gè)體的CW顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05);該位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)AA群體的BW7和SpW有顯著影響(P<0.05),且TT型個(gè)體的BW7顯著高于TC和CC型個(gè)體(P<0.05),CC型個(gè)體的SpW顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05)。

    SNP5位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)NEAUHLFG14的SpW有顯著影響(P<0.05),且CC型個(gè)體均值顯著高于TC和TT型個(gè)體(P<0.05);該位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)AA群體的BW3有顯著影響(P<0.05),TT型個(gè)體均值顯著高于CC型個(gè)體(P<0.05)。

    SNP6位點(diǎn)多態(tài)性對(duì)NEAUHLFG14的VLDL有顯著影響(P<0.05),且GG型個(gè)體均值顯著高于AA和AG型個(gè)體(P<0.05);該位點(diǎn)的多態(tài)性對(duì)AA群體的BW1和LW有顯著影響(P<0.05),且AA個(gè)體BW1顯著高于AG和GG型個(gè)體(P<0.05),AA和AG型個(gè)體的LW顯著高于GG型個(gè)體(P<0.05)。

    3 討論與結(jié)論

    rs14483313突變位于KDR基因上,KDR基因也叫做FlkⅠ、VEGF-2,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子2(Vascular endothelial growth factor-2,VEGF-2)是血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子家族成員[1],它與血管的生成及造血功能有關(guān)[2]。有研究表明血管生成與脂肪生成在時(shí)間和空間上有很大的聯(lián)系。在時(shí)間上關(guān)于脂肪組織發(fā)育研究指出,胚胎期血管的生成早于脂肪的生成[3]。在空間上新的血管生成總是伴隨著脂肪細(xì)胞的分化,在這個(gè)過(guò)程中VEGF是關(guān)鍵因子[4]。肥胖與骨骼肌毛細(xì)血管密度降低有關(guān)[5],抑制血管生成可以減少脂肪聚集[6-9]??梢钥闯鲅苌膳c脂肪生成之間存在密切關(guān)系。

    本研究結(jié)果顯示,rs14483313(SNP1)突變對(duì)AA肉雞商業(yè)隨機(jī)群體腹脂性狀的影響未達(dá)到顯著水平。但對(duì)高、低脂肉雞雙向選擇品系第14世代AFW和AFP都有顯著影響(P<0.05),這與前期GWAS在高、低脂肉雞雙向選擇品系第11世代所得結(jié)果一致。該位點(diǎn)在NEAUHLFG14的低脂系中所有個(gè)體均為TT基因型,推測(cè)T等位基因有可能經(jīng)過(guò)前幾個(gè)世代的選擇已固定。從基因型效應(yīng)來(lái)看,TT基因型個(gè)體AFW、AFP顯著低于CC型個(gè)體(P<0.01),所以,T等位基因是降低雞腹脂沉積的等位基因,在育種中可以嘗試選擇TT基因型個(gè)體培育低脂肉雞品系。

    研究發(fā)現(xiàn),rs13548811(SNP2)突變對(duì)高、低脂肉雞雙向選擇品系第14世代群體后期體重性狀有影響,從3~7周齡逐漸增大,到3、5周齡時(shí)已接近顯著(P值分別為0.0736,0.0637,表4中未給出),7周齡時(shí)達(dá)到顯著水平(P<0.05)。CC型個(gè)體的7周齡體重顯著高于TT型個(gè)體(P<0.05),CC基因型和C等位基因在低脂系中的頻率顯著高于在高脂系中的頻率,以此推斷CC基因型為高、低脂系中體重性狀的有利基因型,可以嘗試在育種中通過(guò)選擇此基因型個(gè)體提高雞的體重性狀。

    GGaluGA263078(SNP4)突變對(duì)雞7周齡體重有顯著影響,尤其在NEAUHLFG14和AA群體遺傳背景不同的群體中該位點(diǎn)對(duì)BW7的影響一致(P<0.05),因此推測(cè)該位點(diǎn)很可能是影響雞體重性狀的致因突變位點(diǎn),或與致因突變位點(diǎn)緊密連鎖。

    本文所研究的6個(gè)突變位點(diǎn)在高、低脂肉雞雙向選擇品系第11世代中都與腹脂性狀顯著相關(guān),但在NEAUHLFG14和AA群體中卻無(wú)一致結(jié)果。群體的遺傳背景不同是造成群體間相關(guān)分析不一致的重要原因之一。高、低脂雙向選擇品系是一個(gè)對(duì)腹脂性狀經(jīng)過(guò)多世代選擇的群體,隨著從第11世代到第14世代的選擇,該群體基因組位點(diǎn)間連鎖不平衡程度發(fā)生了變化;與高、低脂雙向選擇品系群體相比,AA隨機(jī)群體未經(jīng)過(guò)特定性狀選擇群體,其遺傳背景(基因的等位基因頻率、基因位點(diǎn)連鎖不平衡程度等)不同的。這時(shí)突變位點(diǎn)與影響雞腹脂性狀的致因突變緊密連鎖。

    在這6個(gè)突變位點(diǎn)中有4個(gè)(SNP2、SNP3、SNP4和SNP6)都與NEAUHLFG14的VLDL濃度顯著相關(guān)(P<0.05)。有研究表明,VLDL濃度是間接度量雞體肥度的最好指標(biāo),血漿VLDL濃度與腹脂重和腹脂率呈顯著的正表型相關(guān),相關(guān)系數(shù)為0.4168和0.3576[10],對(duì)血漿VLDL濃度的低向選擇會(huì)使腹脂沉積減少[11]。結(jié)果表明,這些基因可能對(duì)雞的腹部脂肪組織生長(zhǎng)和發(fā)育發(fā)揮重要作用。

    綜上所述,這六個(gè)基因可能是影響雞腹脂性狀的重要基因,但本研究中的多態(tài)位點(diǎn)是否為功能性位點(diǎn)需進(jìn)一步驗(yàn)證。

    [1] Hu J S,Hastings G A,Cherry S,et al.A novel regulatory function of proteolytically cleaved VEGF-2 for vascular endothelial and smooth muscle cells[J].FASEB J,1997,11(6):498-504.

    [2] Shalaby F,Ho J,Stanford W L,et al.A requirement for Flk1 in primitive and definitive hematopoiesis and vasculogenesis[J].Cell,1997,89(6):981-990.

    [3] Neels J G,Thinnes T,Loskutoff D J.Angiogenesis in anin vivomodel of adipose tissue development[J].FASEB J,2004,18(9):983-985.

    [4] Nishimura S,Manabe I,Nagasaki M,et al.Adipogenesis in obesity requires close interplay between differentiating adipocytes,stromal cells,and blood vessels[J].Diabetes,2007,56(6):1517-1526.

    [5] Gavin T P,Stallings H R,Zwetsloot K A,et al.Lower capillary density but no difference in VEGF expression inobesevs.lean young skeletal muscle in humans[J].J Appl Physiol,2005,98(1):315-321.

    [6] Rupnick M A,Panigrahy D,Zhang C Y,et al.Adipose tissue mass can be regulated through the vasculature[J].Proc Natl Acad Sci,2002,99(16):10730-10735.

    [7] Liu L,M M.Angiogenesis Inhibitors may regulate adiposity[J].Nutrition Reviews,2003,61(11):384.

    [8] Fukumura D,Ushiyama A,Duda D G,et al.Paracrine regulation of angiogenesis and adipocyte differentiation duringin vivoadipogenesis[J].Circ Res,2003,93(9):88-97.

    [9] Kolonin M G,Saha P K,Chan L,et al.Reversal of obesity by targeted ablation of adipose tissue[J].Nat Med,2004,10(6):625-632.

    [10] 李輝,龔道清.肉雞血漿極低密度脂蛋白濃度與屠體肥度性狀的相關(guān)研究[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),1997(8):1-5.

    [11] 李輝,王靜.蛋用型雞血漿極低密度脂蛋白濃度與蛋黃脂肪酸含量的相關(guān)研究[J].新疆農(nóng)業(yè)科技,1996(1):54-57.

    猜你喜歡
    品系肉雞多態(tài)性
    貴州黑山羊新品系選育
    10個(gè)團(tuán)豆新品系在綏陽(yáng)縣的田間性狀及產(chǎn)量表現(xiàn)
    單核苷酸多態(tài)性與中醫(yī)證候相關(guān)性研究進(jìn)展
    肉雞腹水咋防治
    4個(gè)地被菊新品系對(duì)濕熱脅迫的耐受性研究
    園林科技(2020年2期)2020-01-18 03:28:18
    肉雞常見腹瀉病的診斷和治療
    馬鈴薯cpDNA/mtDNA多態(tài)性的多重PCR檢測(cè)
    GlobalFiler~? PCR擴(kuò)增試劑盒驗(yàn)證及其STR遺傳多態(tài)性
    蛋雞和肉雞
    蛋雞和肉雞
    久久久精品国产亚洲av高清涩受| 亚洲婷婷狠狠爱综合网| 国产精品一二三区在线看| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 欧美最新免费一区二区三区| 少妇被粗大猛烈的视频| 久久99热这里只频精品6学生| 国产精品99久久99久久久不卡 | 精品久久久久久电影网| 国产免费视频播放在线视频| 丝瓜视频免费看黄片| 亚洲国产精品999| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲av福利一区| 美女福利国产在线| 极品少妇高潮喷水抽搐| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线| 精品久久蜜臀av无| 久久久久精品性色| 国产xxxxx性猛交| 一级毛片黄色毛片免费观看视频| 操美女的视频在线观看| 中文字幕精品免费在线观看视频| 天天影视国产精品| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 在线观看国产h片| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 午夜影院在线不卡| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲一区中文字幕在线| 亚洲人成网站在线观看播放| 老鸭窝网址在线观看| 国产男人的电影天堂91| 曰老女人黄片| kizo精华| 免费观看a级毛片全部| 9色porny在线观看| 激情视频va一区二区三区| kizo精华| 亚洲av中文av极速乱| 国产亚洲午夜精品一区二区久久| 老司机亚洲免费影院| 丁香六月天网| 成年人免费黄色播放视频| 两性夫妻黄色片| 久久ye,这里只有精品| 欧美精品亚洲一区二区| 美女午夜性视频免费| 免费观看av网站的网址| 国产国语露脸激情在线看| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 日本爱情动作片www.在线观看| 毛片一级片免费看久久久久| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲国产精品999| 久久性视频一级片| 人人澡人人妻人| 亚洲熟女毛片儿| 蜜桃在线观看..| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| av一本久久久久| 97精品久久久久久久久久精品| 午夜免费观看性视频| 中文天堂在线官网| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久久久网色| 男人添女人高潮全过程视频| 亚洲精品aⅴ在线观看| 夫妻午夜视频| 水蜜桃什么品种好| 午夜福利一区二区在线看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 久久久精品94久久精品| 秋霞在线观看毛片| 国产一卡二卡三卡精品 | 不卡av一区二区三区| 日本欧美视频一区| 在线看a的网站| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看 | 亚洲精品日韩在线中文字幕| 国产亚洲最大av| 哪个播放器可以免费观看大片| 两个人看的免费小视频| 国产无遮挡羞羞视频在线观看| 在线精品无人区一区二区三| 一区在线观看完整版| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲精品中文字幕在线视频| 亚洲成av片中文字幕在线观看| 中文欧美无线码| 人人妻人人添人人爽欧美一区卜| 国产一级毛片在线| 黄色视频不卡| 欧美日韩福利视频一区二区| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 嫩草影视91久久| 精品国产一区二区三区久久久樱花| 日本vs欧美在线观看视频| 亚洲综合精品二区| 亚洲第一av免费看| 最近最新中文字幕大全免费视频 | 国产精品99久久99久久久不卡 | 99久久99久久久精品蜜桃| 男女午夜视频在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 国产精品免费大片| 最近的中文字幕免费完整| 国产一卡二卡三卡精品 | 亚洲精品第二区| 欧美黑人精品巨大| 精品少妇黑人巨大在线播放| 成人黄色视频免费在线看| 我的亚洲天堂| 亚洲精品国产av蜜桃| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 亚洲天堂av无毛| 亚洲精品国产一区二区精华液| 黄色视频在线播放观看不卡| 1024香蕉在线观看| 国产成人精品久久二区二区91 | 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 三上悠亚av全集在线观看| 国产精品二区激情视频| 日韩人妻精品一区2区三区| 极品人妻少妇av视频| xxxhd国产人妻xxx| 国产精品一二三区在线看| 日韩视频在线欧美| 亚洲国产精品999| 天天操日日干夜夜撸| 操美女的视频在线观看| 好男人视频免费观看在线| 亚洲国产成人一精品久久久| 久久av网站| 丝袜人妻中文字幕| 夫妻午夜视频| www日本在线高清视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲在久久综合| 亚洲一区二区三区欧美精品| 精品国产一区二区久久| 成人三级做爰电影| 人妻人人澡人人爽人人| 中文字幕亚洲精品专区| 黄片小视频在线播放| 男女免费视频国产| 性少妇av在线| 久久精品久久精品一区二区三区| 97精品久久久久久久久久精品| 午夜影院在线不卡| 99精国产麻豆久久婷婷| 欧美日韩福利视频一区二区| av在线播放精品| 一区二区三区激情视频| 久久鲁丝午夜福利片| 性少妇av在线| 国产 精品1| 国产精品二区激情视频| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄| 五月天丁香电影| 亚洲精品一二三| 久久精品久久久久久噜噜老黄| 又黄又粗又硬又大视频| 久久精品aⅴ一区二区三区四区| 亚洲人成电影观看| 美女福利国产在线| 欧美97在线视频| 国产黄频视频在线观看| 久久国产亚洲av麻豆专区| 丝袜喷水一区| 免费高清在线观看视频在线观看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 免费少妇av软件| 久久精品亚洲av国产电影网| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频| 搡老岳熟女国产| 只有这里有精品99| 王馨瑶露胸无遮挡在线观看| 午夜福利乱码中文字幕| 亚洲美女黄色视频免费看| 亚洲国产最新在线播放| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 免费在线观看黄色视频的| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲精品一二三| 极品人妻少妇av视频| 日韩 亚洲 欧美在线| 成年人免费黄色播放视频| 成年女人毛片免费观看观看9 | 亚洲美女搞黄在线观看| 天天操日日干夜夜撸| xxxhd国产人妻xxx| 国产又爽黄色视频| 久久性视频一级片| 午夜福利影视在线免费观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 中文字幕高清在线视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 日本色播在线视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 国产成人一区二区在线| 一级毛片 在线播放| 亚洲三区欧美一区| 高清视频免费观看一区二区| 天堂中文最新版在线下载| 精品视频人人做人人爽| 久久免费观看电影| 欧美久久黑人一区二区| 免费看av在线观看网站| 国产精品久久久av美女十八| 免费高清在线观看日韩| 久久这里只有精品19| 国产免费视频播放在线视频| 国产爽快片一区二区三区| 老汉色av国产亚洲站长工具| 只有这里有精品99| 久久久久人妻精品一区果冻| 欧美日韩av久久| 亚洲人成网站在线观看播放| 交换朋友夫妻互换小说| 一级片'在线观看视频| 久久久久精品性色| 秋霞伦理黄片| 国产福利在线免费观看视频| 亚洲精品乱久久久久久| 色婷婷久久久亚洲欧美| 亚洲成人国产一区在线观看 | 久久人妻熟女aⅴ| 亚洲综合色网址| 青春草国产在线视频| 看免费成人av毛片| 国产精品偷伦视频观看了| 欧美精品av麻豆av| 飞空精品影院首页| 免费观看人在逋| 国产亚洲最大av| 韩国精品一区二区三区| av.在线天堂| 国产激情久久老熟女| 麻豆乱淫一区二区| 黄片小视频在线播放| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 日本vs欧美在线观看视频| 下体分泌物呈黄色| 亚洲国产日韩一区二区| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 99久国产av精品国产电影| 少妇精品久久久久久久| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 国产男人的电影天堂91| 丝袜脚勾引网站| 日韩视频在线欧美| 天天操日日干夜夜撸| 激情五月婷婷亚洲| 丰满饥渴人妻一区二区三| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频 | 十八禁人妻一区二区| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 丝袜在线中文字幕| 日韩熟女老妇一区二区性免费视频| 精品久久久久久电影网| 中文字幕精品免费在线观看视频| 精品国产一区二区三区四区第35| 麻豆av在线久日| 丰满少妇做爰视频| 国产精品二区激情视频| √禁漫天堂资源中文www| 亚洲少妇的诱惑av| 婷婷色麻豆天堂久久| 亚洲四区av| 亚洲中文av在线| 久久久久人妻精品一区果冻| 国产xxxxx性猛交| 国产麻豆69| 青春草国产在线视频| 亚洲一码二码三码区别大吗| 99久久99久久久精品蜜桃| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 99国产精品免费福利视频| 大片电影免费在线观看免费| 99久久人妻综合| 午夜av观看不卡| 久久久久国产精品人妻一区二区| 天堂中文最新版在线下载| 日日摸夜夜添夜夜爱| 亚洲第一青青草原| 2018国产大陆天天弄谢| 97在线人人人人妻| 男人操女人黄网站| 一级a爱视频在线免费观看| 香蕉丝袜av| 丁香六月欧美| 亚洲第一青青草原| 国产成人啪精品午夜网站| 久久久国产欧美日韩av| 中文欧美无线码| 国产精品免费视频内射| 中文字幕人妻丝袜制服| 久久韩国三级中文字幕| 亚洲在久久综合| 久久久久精品国产欧美久久久 | 9热在线视频观看99| 欧美日韩综合久久久久久| xxxhd国产人妻xxx| 蜜桃在线观看..| 午夜久久久在线观看| 国产野战对白在线观看| 日韩伦理黄色片| 久久精品久久久久久久性| 一级,二级,三级黄色视频| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 欧美日韩综合久久久久久| 久久 成人 亚洲| 99re6热这里在线精品视频| 国产亚洲最大av| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 老司机靠b影院| 中文字幕人妻丝袜制服| 国产视频首页在线观看| 美女中出高潮动态图| 亚洲成国产人片在线观看| 99久久人妻综合| 99热国产这里只有精品6| 老汉色∧v一级毛片| 十八禁人妻一区二区| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产成人精品久久二区二区91 | 亚洲成色77777| 免费观看性生交大片5| 久久av网站| 久久久久人妻精品一区果冻| 午夜免费男女啪啪视频观看| 国产男女内射视频| 亚洲第一av免费看| 狂野欧美激情性xxxx| 日本91视频免费播放| 亚洲美女视频黄频| 男人舔女人的私密视频| 99热国产这里只有精品6| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 国产亚洲一区二区精品| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 国产精品免费视频内射| 电影成人av| 中文乱码字字幕精品一区二区三区| 国产伦人伦偷精品视频| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 国产成人a∨麻豆精品| 99国产精品免费福利视频| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 亚洲精品一二三| av天堂久久9| 亚洲成人国产一区在线观看 | 妹子高潮喷水视频| 黄片无遮挡物在线观看| 国产精品一二三区在线看| 国产精品熟女久久久久浪| 成人免费观看视频高清| 久久国产亚洲av麻豆专区| 美女高潮到喷水免费观看| 久久 成人 亚洲| 国产精品.久久久| 国产99久久九九免费精品| 1024香蕉在线观看| 国产人伦9x9x在线观看| 赤兔流量卡办理| 伦理电影免费视频| 欧美老熟妇乱子伦牲交| 伦理电影免费视频| 熟女av电影| 黄片播放在线免费| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀 | 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 少妇被粗大猛烈的视频| 免费黄网站久久成人精品| 又大又黄又爽视频免费| 韩国精品一区二区三区| 色婷婷av一区二区三区视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 七月丁香在线播放| 一个人免费看片子| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91| 天天影视国产精品| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 精品视频人人做人人爽| 欧美少妇被猛烈插入视频| 国产精品久久久人人做人人爽| 久久久久精品国产欧美久久久 | 美女视频免费永久观看网站| 欧美日韩视频精品一区| 久久久久久人人人人人| 一区二区av电影网| 久久人人97超碰香蕉20202| 精品久久久久久电影网| 丝袜喷水一区| 一级片'在线观看视频| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 少妇的丰满在线观看| 欧美成人精品欧美一级黄| 日韩人妻精品一区2区三区| 亚洲国产最新在线播放| 精品人妻熟女毛片av久久网站| 午夜久久久在线观看| 伊人久久国产一区二区| 欧美日韩视频精品一区| 日韩 亚洲 欧美在线| 99精国产麻豆久久婷婷| 看免费av毛片| av视频免费观看在线观看| 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲熟女毛片儿| 国产免费福利视频在线观看| 高清不卡的av网站| 熟女av电影| 成人三级做爰电影| 精品亚洲乱码少妇综合久久| 青草久久国产| 亚洲国产精品成人久久小说| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久毛片免费看一区二区三区| 少妇的丰满在线观看| 18禁观看日本| 制服诱惑二区| 亚洲五月色婷婷综合| 欧美xxⅹ黑人| 咕卡用的链子| 亚洲中文av在线| 国产一区二区 视频在线| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 精品国产一区二区久久| 国产成人欧美| 免费高清在线观看视频在线观看| 久久久久精品性色| 精品免费久久久久久久清纯 | 啦啦啦中文免费视频观看日本| 久久久国产精品麻豆| 精品久久久精品久久久| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 秋霞在线观看毛片| 免费观看a级毛片全部| av线在线观看网站| 可以免费在线观看a视频的电影网站 | 亚洲美女黄色视频免费看| 999久久久国产精品视频| 十分钟在线观看高清视频www| 男女无遮挡免费网站观看| 国产高清国产精品国产三级| 十八禁网站网址无遮挡| 嫩草影院入口| 国产成人精品无人区| 国产亚洲av高清不卡| 国产 一区精品| 丝瓜视频免费看黄片| 久久久久国产一级毛片高清牌| 赤兔流量卡办理| 久久久久久久精品精品| 亚洲成人av在线免费| 一级片免费观看大全| 一本久久精品| 日韩av不卡免费在线播放| 啦啦啦啦在线视频资源| 国产成人91sexporn| 美女午夜性视频免费| 丰满迷人的少妇在线观看| 大香蕉久久网| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲精品自拍成人| 中文字幕制服av| 人人妻人人澡人人看| 天天影视国产精品| 成人漫画全彩无遮挡| 欧美日本中文国产一区发布| 日韩欧美精品免费久久| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 亚洲专区中文字幕在线 | 久久久欧美国产精品| 亚洲精品久久午夜乱码| 香蕉丝袜av| 97精品久久久久久久久久精品| 一区在线观看完整版| 国产野战对白在线观看| 欧美精品av麻豆av| 亚洲成色77777| 国产精品久久久久久精品电影小说| 久久精品亚洲av国产电影网| 亚洲精品一区蜜桃| 国产精品 欧美亚洲| 亚洲精品美女久久av网站| 欧美日韩国产mv在线观看视频| 老鸭窝网址在线观看| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 国产麻豆69| 在线观看免费视频网站a站| 国产精品女同一区二区软件| 叶爱在线成人免费视频播放| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 操出白浆在线播放| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 国产成人av激情在线播放| 人体艺术视频欧美日本| 久久久久国产精品人妻一区二区| 少妇人妻 视频| 久久婷婷青草| av国产精品久久久久影院| 精品免费久久久久久久清纯 | 精品少妇黑人巨大在线播放| 我要看黄色一级片免费的| 久久99精品国语久久久| 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美国产精品一级二级三级| 五月开心婷婷网| 成年人午夜在线观看视频| 两性夫妻黄色片| 精品亚洲成国产av| 亚洲情色 制服丝袜| 国产高清不卡午夜福利| 秋霞在线观看毛片| 99热网站在线观看| 国产精品国产av在线观看| 中文字幕高清在线视频| 色精品久久人妻99蜜桃| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 啦啦啦 在线观看视频| 成年人午夜在线观看视频| 69精品国产乱码久久久| 美女中出高潮动态图| 国产av国产精品国产| 天堂中文最新版在线下载| 超碰97精品在线观看| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片| 蜜桃在线观看..| 午夜91福利影院| 亚洲av国产av综合av卡| 亚洲伊人色综图| 中文字幕最新亚洲高清| 人体艺术视频欧美日本| 性色av一级| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 国产成人一区二区在线| 日本欧美国产在线视频| 69精品国产乱码久久久| 狂野欧美激情性bbbbbb| 国产国语露脸激情在线看| 成人午夜精彩视频在线观看| 丝袜美足系列| 免费高清在线观看视频在线观看| 午夜福利视频在线观看免费| 人人澡人人妻人| 精品免费久久久久久久清纯 | 黄色一级大片看看| 水蜜桃什么品种好| 极品人妻少妇av视频| 亚洲成人国产一区在线观看 | 日本欧美视频一区| 久久青草综合色| 精品福利永久在线观看| 亚洲专区中文字幕在线 | 久久久久久久久久久免费av| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 99热网站在线观看| 国产精品二区激情视频| 久久久久网色| 午夜老司机福利片| 亚洲欧美成人精品一区二区| 夜夜骑夜夜射夜夜干| 两性夫妻黄色片| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 一二三四中文在线观看免费高清| 日韩av不卡免费在线播放| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 天堂8中文在线网| 成年美女黄网站色视频大全免费| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 多毛熟女@视频| 国产av精品麻豆| 蜜桃国产av成人99| 日韩av免费高清视频| 日本黄色日本黄色录像| 丝袜脚勾引网站| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲,欧美,日韩| 曰老女人黄片| 少妇人妻久久综合中文| 欧美激情 高清一区二区三区| 热99国产精品久久久久久7| 欧美日韩一级在线毛片| 午夜免费男女啪啪视频观看| 又黄又粗又硬又大视频| 看非洲黑人一级黄片| 国产又色又爽无遮挡免| 不卡av一区二区三区| 久久久久精品久久久久真实原创| 久久久欧美国产精品| 亚洲四区av| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产又色又爽无遮挡免| 日本欧美国产在线视频| 亚洲av成人精品一二三区| 国产伦理片在线播放av一区| 亚洲精品日本国产第一区| 亚洲国产av新网站| 中文字幕人妻丝袜一区二区 | 美女主播在线视频| 免费看不卡的av| 老司机亚洲免费影院| 精品久久久久久电影网|