氣相色譜法測(cè)定瑞格列奈原料藥的有機(jī)溶劑殘留量*

梁麗娟，黃 薇

(天津醫(yī)藥集團(tuán)津康制藥有限公司，天津 300270)

瑞格列奈屬于甲基苯甲胺苯甲酸(CBMA)家族的一種新型口服降糖藥物，能促進(jìn)胰島素分泌，具有吸收快、起效快、作用時(shí)間短的特點(diǎn)，可在Ⅱ型糖尿病患者中模擬生理性胰島素分泌，有效控制餐后高血糖。《中國(guó)藥典》2010年版［1］收載了該原料藥，規(guī)定進(jìn)行二氯甲烷與正己烷的殘留量檢查。根據(jù)本產(chǎn)品生產(chǎn)工藝中使用了《中國(guó)藥典》2010年版規(guī)定的二類溶劑正己烷和甲苯，以及三類溶劑丙酮、乙醇和乙酸乙酯，《中國(guó)藥典》規(guī)定方法不能囊括工藝中使用的全部五種溶劑，故筆者參考文獻(xiàn)［2-4］采用氣相-頂空進(jìn)樣法建立了瑞格列奈原料藥的殘留溶劑檢測(cè)方法，方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 安捷倫6890N氣相色譜儀(FID檢測(cè)器)，安捷倫7694E自動(dòng)頂空進(jìn)樣儀。

1.2 試藥 正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯及二甲基甲酰胺均為色譜純?cè)噭?，高純氮?dú)庥商旖驏|方氣體廠提供。瑞格列奈(由天津醫(yī)藥集團(tuán)津康制藥有限公司提供，批號(hào)為 20110401、20110501、20110502)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 檢測(cè)器：200℃;氣化室：150℃;色譜柱：Agilent DB-FFAP毛細(xì)管色譜柱(50 m×0.32 mm);柱溫：起始溫度40℃，維持3 min，以20℃/min的速率升至120℃，維持6.5 min;頂空平衡溫度：80℃;頂空平衡時(shí)間：30 min;進(jìn)樣時(shí)間：1 min。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 分別稱取正己烷145 mg、乙酸乙酯 2 500 mg、乙醇 2 500 mg、甲苯 445 mg、丙酮 2 500 mg，精密稱定，置盛有約10 ml二甲基甲酰胺的100 ml量瓶中，以二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液;精密量取對(duì)照品貯備液1 ml，置盛有約10 ml二甲基甲酰胺的50 ml量瓶中，以二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻;精密量取5 ml，置10 ml頂空瓶中，密塞，即得對(duì)照品溶液。

2.2.2 供試品溶液 稱取供試品約1 g，精密稱定，置10 ml量瓶中，以二甲基甲酰胺超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻;精密量取5 ml，置10 ml頂空瓶中，密塞，振搖使溶解，即得供試品溶液。

2.2.3 空白溶劑溶液 精密量取二甲基甲酰胺2 ml，置10 ml頂空瓶中，密塞，即得空白溶劑溶液。

2.3 專屬性試驗(yàn) 精密量取空白溶劑溶液和對(duì)照品溶液，依法測(cè)定，出峰順序依次為：正己烷(2.74 min)、丙酮(4.01 min)、乙酸乙酯(4.80 min)、乙醇(5.44 min)、甲苯(6.94 min)和二甲基甲酰胺(12.23 min)，見圖1。如圖1所示，二甲基甲酰胺對(duì)正己烷峰、丙酮峰、乙酸乙酯峰、乙醇峰及甲苯峰檢出無干擾，且正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯及二甲基甲酰胺六個(gè)峰之間彼此分離度均大于2.0。

2.4 線性關(guān)系及范圍 分別精密量取對(duì)照品貯備液0.25、0.5、1.0、1.5 和 2.0 ml置 50 ml量瓶中，以二甲基甲酰胺稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取5 ml，置10 ml頂空瓶中，密塞，依法分別測(cè)定3次，求取測(cè)定值，以溶液濃度為橫坐標(biāo)、峰面積為縱坐標(biāo)分別求回歸曲線及相關(guān)系數(shù)。本方法中己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯分別在 7.3 ～ 58.4、125.7 ～ 1 005.5、125.3 ～1 002.7、125.9 ～1 007.2 和 22.4 ～179.5 μg/ml范圍內(nèi)有良好線性關(guān)系。結(jié)果見表1。

圖1 空白溶液(A)對(duì)照品溶液(B)氣相色譜圖

表1 各待測(cè)溶劑回歸曲線及相關(guān)系數(shù)(n=3)

2.5 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液重復(fù)進(jìn)樣5次，依法測(cè)得正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯峰面積的RSD分別為 0.4%、1.2%、1.2%、1.5%和 1.5%。

2.6 回收率試驗(yàn) 精密稱取瑞格列奈(批號(hào)20110401)樣品500 mg共6份，置10 ml頂空瓶中，分別精密加入對(duì)照品溶液5 ml，密塞，振搖使溶解，依法測(cè)定。結(jié)果正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯回收率分別為97.5%、95.6%、96.6%、97.8% 和 94.8%;RSD分別為1.4%、1.6%、1.7%、1.2% 和 1.2%，基質(zhì)(瑞格列奈)不影響各待測(cè)溶劑峰的檢出，結(jié)果見表2。

2.7 最小檢測(cè)限試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液逐級(jí)稀釋，精密量取稀釋液2 ml，置頂空瓶中，密塞，依法進(jìn)樣，按信噪比為3∶1，測(cè)得本方法色譜條件下正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇和甲苯的最小檢出量分別為0.4、0.5、0.8、0.7 和 0.9 ng。

2.8 樣品測(cè)定結(jié)果 取瑞格列奈原料藥3批樣品，依法分別測(cè)定3次，結(jié)果見表3。本結(jié)果均符合《中國(guó)藥典》2010年版要求的正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯各自不得大于 0.029%、0.5%、0.5%、0.5% 和0.089%的限度要求。

表2 各成分加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

表3 瑞格列奈原料藥樣品殘留溶劑測(cè)定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 瑞格列奈在水中不溶，待測(cè)有機(jī)溶劑為正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇和甲苯，既有低沸點(diǎn)溶劑，也有高沸點(diǎn)溶劑，故采用色譜純二甲基甲酰胺作為溶樣溶劑，既能保證樣品完全溶解，亦能保證色譜純的溶劑不影響微量待測(cè)溶劑的檢出。

3.2 本方法建立難點(diǎn)在于使正己烷、丙酮、乙酸乙酯、乙醇、甲苯及二甲基甲酰胺等6個(gè)溶劑峰完全分離。曾使用《中國(guó)藥典》規(guī)定的Agilent HP-5柱(30 m×0.53 mm)，甲苯與二甲基甲酰胺峰互相重疊，不能分離;使用Agilent DB-624柱(30 m ×0.32 mm)，各個(gè)溶劑峰分離完全，但是氮?dú)饬髁繛?.8 ml/min，載氣流量過小，導(dǎo)致甲苯峰展寬，檢測(cè)靈敏度低;使用Agilent DBFFAP柱(50 m×0.32 mm)，6個(gè)溶劑峰分離完全，氮?dú)饬髁繛?.0 ml/min，峰形尖銳。最終選擇Agilent DBFFAP毛細(xì)管色譜柱(50 m×0.32 mm)。

3.3 本方法采用程序升溫法，設(shè)置合適的氮?dú)饬髁?，各個(gè)待測(cè)溶劑峰出峰時(shí)間恰當(dāng)，分離度良好，且峰形尖銳，各峰理論板數(shù)依次為：正己烷26 000、丙酮32 000、乙酸乙酯26 000、乙醇27 800、甲苯21 300，均符合《中國(guó)藥典》2010年版的規(guī)定。

試驗(yàn)表明，本氣相色譜法專屬性強(qiáng)，靈敏度高，能在程序升溫條件下同時(shí)測(cè)定5種殘留溶劑的含量，方法快捷準(zhǔn)確，可用于瑞格列奈原料藥中殘留溶劑的限度檢查。

1 中國(guó)藥典.二部.2010：1060

2 王衛(wèi).藥品中有機(jī)溶劑殘留量及其測(cè)定.天津藥學(xué)，2001，13(3)：26

3 田晨煦，徐小平，廖麗云，等.毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定比阿培南中5種有機(jī)溶劑殘留量.中國(guó)抗生素雜志，2006，31(3)：187

4 梁振益，王永強(qiáng)，徐靜，等.頂空毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定頭孢他美鈉中有機(jī)溶劑殘留量.海南大學(xué)學(xué)報(bào)·自然科學(xué)版，2007，30(1)：43