辣椒素對(duì)豚鼠肝臟的保護(hù)作用

孟立科 楊思遠(yuǎn) 劉 琳 何映金 (貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550004)

辣椒素(CAP)由Thres在1876年從辣椒中分離出來(lái)，并命名為8-甲基-6-癸烯香草基胺，分子式為C18H27NO3，是辣椒中的香草酰胺類生物〔1〕，具有多種生物及藥理活性，如止痛、減肥、降脂、擴(kuò)張血管等作用。但CAP對(duì)高脂血癥時(shí)常伴發(fā)的肝臟脂肪樣變是否有改善作用，還未見報(bào)道。因此，本實(shí)驗(yàn)利用肝臟脂肪樣變動(dòng)物模型，初步探討CAP的保肝作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康豚鼠SPF級(jí)，體質(zhì)量(250±30)g，雌雄各半，由重慶市中藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所提供，許可證號(hào):scxk(渝)2007-0006，合格證編號(hào):0003714。

1.1.2 藥品及主要試劑 0.3%膽固醇高脂飼料(重慶市中藥研究院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所)，95%CAP(安順市百花串食品有限公司)，丙二醛(MDA)試劑盒、超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(南京建成生物工程研究所)

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 Olympus(BX50)光學(xué)顯微鏡;德國(guó)Hettich公司臺(tái)式離心機(jī);美國(guó)Foyma－80℃超低溫冰箱;四川大學(xué)圖像圖形研究所Biomias2001圖像分析系統(tǒng)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)樣品的制備 取CAP 100 mg溶于95%的乙醇0.1 ml，溶解后用生理鹽水定容至100 ml，配成濃度為1 mg/ml，貯于冰箱中備用。

1.2.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及指標(biāo)測(cè)定 40只豚鼠，在適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，隨機(jī)分為 5組，正常對(duì)照組、模型組、CAP高劑量組(10 mg/kg)、中劑量組(5 mg/kg)、低劑量組(2.5 mg/kg)，每組8只，分籠喂養(yǎng)，自由飲水。因豚鼠的維生素C自身不能合成，必須從飼料中獲取，故在所有動(dòng)物的飲水中均加入5 mg/100 g體質(zhì)量維生素C。除正常對(duì)照組每日給予普通飼料外，其余各組每日給予高脂飼料 (普通飼料+0.3%膽固醇+5%豬油)66 g/kg后再給予普通飼料，共飼養(yǎng)14 w;同時(shí)，上述CAP各組灌胃給予藥物，每日1次。實(shí)驗(yàn)14 w末，禁食12 h，自由飲水。動(dòng)物麻醉后取血，分離血清，－80℃冰箱保存?zhèn)溆?，按試劑盒操作方法測(cè)定血清中MDA含量及SOD活性。處死動(dòng)物，取肝臟組織進(jìn)行石蠟切片，常規(guī)脫水、石蠟包埋后切成4 μm的薄片，蘇木素-伊紅(HE)染色后觀察病理形態(tài)學(xué)改變。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 CAP對(duì)豚鼠肝臟病理組織學(xué)變化的影響 肉眼觀察:正常對(duì)照組肝臟形態(tài)規(guī)則，邊緣銳利，色紅有光澤;模型組豚鼠肝臟體積增大，包膜緊張，邊緣較鈍，顏色深黃，切面油膩感;辣椒素低、中劑量組，肝臟體積增大，切面鈍，顏色呈淺黃色，CAP高劑量組肝臟體積比正常值增大，顏色淺黃，切面無(wú)油膩感，病變較模型組輕。光鏡觀察:模型組可見肝索排列紊亂，肝細(xì)胞體積增大，有明顯的炎癥反應(yīng);血竇腔隙縮小，靠近中央靜脈的肝細(xì)胞所含脂滴空泡較大，肝細(xì)胞出現(xiàn)重度的脂肪變性和大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肝小葉結(jié)構(gòu)破壞。CAP低、中劑量組也出現(xiàn)了明顯的脂肪變性，胞質(zhì)中有較多的泡沫細(xì)胞，但程度較模型組輕。CAP高劑量組胞質(zhì)中僅見少量脂肪滴，無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。見圖1。

圖1 各組肝臟病理形態(tài)(HE，×200)

2.2 CAP對(duì)豚鼠血清MDA、SOD的影響 模型組豚鼠血清中MDA含量顯著升高，SOD活性顯著降低，與正常對(duì)照組比較有顯著性差異(P＜0.01)。與模型組比較，CAP低、中、高劑量組能顯著降低 MDA含量(P＜0.01)、增加 SOD的活性(P＜0.01)，以高劑量組最為明顯。結(jié)果表明，CAP具有一定的體內(nèi)脂質(zhì)抗氧化能力(P＜0.05，P＜0.01)。見表1。

表1 CAP對(duì)豚鼠血清MDA含量和SOD活性的影響( ± s，n=8)

表1 CAP對(duì)豚鼠血清MDA含量和SOD活性的影響( ± s，n=8)

與正常對(duì)照組比較:1)P＜0.01;與模型組比較:2)P＜0.05，3)P＜0.01

組別 劑量(mg/kg) MDA(nmol/L) SOD(U/ml)正常對(duì)照組2.77±0.96 52.21±2.96模型組 － 25.49±12.751) 20.48±7.181)CAP組 2.5 13.92±2.833) 27.04±2.872)59.85±3.773) 28.87 ±2.913)10 6.14±1.63) 36.06±11.333)－

3 討論

脂肪性肝病是由于各種原因引起的肝細(xì)胞內(nèi)脂肪堆積，為代謝綜合征出現(xiàn)肝臟損害的主要病理改變。近年來(lái)，隨著人們生活水平的不斷提高，飲食結(jié)構(gòu)及生活方式的改變，人群的血脂水平呈逐年增高趨勢(shì)，高脂血癥性脂肪性肝病的發(fā)病率逐漸上升，但其發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確。

不飽和脂肪酸在氧自由基作用下產(chǎn)生醛類化合物如MDA等脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物，因此，血清MDA水平可以反映體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化水平，間接地反映細(xì)胞受損傷的程度〔2〕。SOD是預(yù)防機(jī)體形成超氧陰離子自由基損害的主要活性酶，是機(jī)體內(nèi)廣泛存在的自由基清除劑，在組織中的水平常作為判斷清除自由基能力的主要指標(biāo)，起到保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用。

本研究采用高脂飲食建立高脂血癥性脂肪肝豚鼠模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)高脂血癥性脂肪肝豚鼠出現(xiàn)明顯的代謝紊亂，MDA含量升高802%，SOD活性降低61%，且肝臟組織出現(xiàn)明顯的脂肪樣變。給予CAP后，HE染色光鏡下觀察，不同程度地改善了肝臟脂肪性病變，特別是高劑量組，胞質(zhì)中僅見少量脂肪滴，未見明顯的炎性浸潤(rùn);明顯降低了豚鼠MDA的水平，升高了SOD活性，對(duì)自由基的清除增加，從而減輕了對(duì)組織的氧化損傷，起到保護(hù)細(xì)胞的作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CAP對(duì)高脂血癥性肝臟脂肪變性具有較好的改善作用，能有效地保護(hù)肝臟。

1 袁愛力，劉思德，張振書，等.非酒精性脂肪肝與代謝綜合征〔J〕.中華消化雜志，2003;23(11):682-3.

2 Witztum JL.Steinberg D.Role of oxidized low density lipoprotein in atherogenesis〔J〕.J Clin Invest，1991;88(1):1785.