健脾祛瘀法對血脂異常小鼠視網(wǎng)膜色素上皮-玻璃膜-脈絡(luò)膜毛細(xì)血管復(fù)合體的影響

謝禮丹 曾慶華 莫 亞 唐春艷 劉小虎

年齡相關(guān)性黃斑變性（age-related macular degeneration，AMD）是一種與年齡相關(guān)的變性類疾病，以視網(wǎng)膜色素上皮層及脈絡(luò)膜的玻璃膜疣沉積（干性AMD），繼而引發(fā)病理性脈絡(luò)膜新生血管（choroidal neovascularization，CNV）（濕性 AMD）為臨床特征，可導(dǎo)致嚴(yán)重的中心視力損害〔1〕。該病的發(fā)病機制仍不十分清楚，與多種因素有關(guān)，比如動脈粥樣硬化，盡管二者之間的關(guān)系并不很清晰，但有研究認(rèn)為這些多因素的復(fù)雜疾病可能有共同的通路，推測高血脂與AMD的發(fā)生有一定的聯(lián)系。我們的前期實驗證明，血脂異?？墒馆d脂蛋白E缺乏（apolipoprotein E-deficient，ApoE-/-）小鼠的視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞、視網(wǎng)膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）細(xì)胞及玻璃膜（Bruch’s membrane，BM）發(fā)生類似于早期年齡相關(guān)性黃斑變性的病理改變〔2〕（像動脈粥樣硬化病變一樣，BM脂質(zhì)的來源并不是完全來自血液〔3-5〕）。 血管內(nèi)皮生長因子（vascularendothelialgrowth factor，VEGF）是在AMD進(jìn)展過程具有重要作用的物質(zhì)〔6〕，可通過刺激其 R2 受體（vascular endothelial growth factor receptor 2，VEGFR2）介導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞DNA合成和增殖，VEGFR2還參與由VEGF介導(dǎo)的血管通透性改變〔7-9〕。本課題擬觀察健脾祛瘀中藥對實驗性血脂異常小鼠的視網(wǎng)膜色素上皮-玻璃膜-脈絡(luò)膜毛細(xì)血管復(fù)合體（retinal pigment epithelium-Bruch’s membrane-choriocapillaris complex，RBCC）結(jié)構(gòu)及VEGF、VEGFR2表達(dá)的影響，以探討中醫(yī)藥防治CNV的作用機理。

1 材料與方法

1.1 實驗動物

8周齡ApoE-/-雄性小鼠，體質(zhì)量25.9～34.5 g，由北京大學(xué)實驗動物學(xué)中心提供（美國Jackson實驗室引進(jìn)），動物合格證：川實動管質(zhì)第09號。普通飼料及高脂飼料由成都達(dá)碩動物實驗有限公司提供，于四川省人民醫(yī)院清潔實驗室中采用獨立通風(fēng)籠盒（independent ventilation cage，IVC）飼養(yǎng)。 所有實驗根據(jù)赫爾辛基宣言保護(hù)和運用動物的指導(dǎo)原則來進(jìn)行。

1.2 造模與分組

8周齡小鼠予高脂飼料喂養(yǎng)至6月齡后，查總膽固醇（total cholesterol， TC）＞6.5 mmol/L 及三酰甘油（triacylglycerol，TAG）＞1.86 mmol/L 者為血脂異常模型造模成功，改予普通飼料飼養(yǎng)。將模型小鼠隨機分為低、中、高濃度給藥組及陰性對照組，每組12只。另設(shè)普食組小鼠12只，始終予普通飼料喂養(yǎng)至7月齡。

1.3 給藥方法

健脾祛瘀中藥主要由生蒲黃、丹參、牡丹皮、郁金、川芎等組成（四川綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司）。按照動物與人的折算系數(shù)換算用藥劑量（成人體質(zhì)量按60 kg計算），并以中劑量作為等效劑量，低、中、高劑量按照 1∶3∶9的比例計算，分別配制成0.06 g/ml、0.18 g/ml、0.54 g/ml的混懸液，按 1 ml/100 g灌胃給藥，每日2次；陰性對照組予等體積的生理鹽水灌胃，各組小鼠用藥1個月后處死。

1.4 觀測指標(biāo)及測試方法

1.4.1 一般狀態(tài)觀察：觀察小鼠食欲、神態(tài)、反應(yīng)能力、被毛、肌肉情況，每周進(jìn)行小鼠體質(zhì)量檢查。

1.4.2 小鼠血液生化檢測方法：禁食12 h后，在動物宰殺前注射鎮(zhèn)靜劑戊巴比妥鈉后股靜脈采血，采用日立7170全自動生化分析TC和TAG；R-80A血液黏度儀檢測全血黏度、紅細(xì)胞壓積。

1.4.3 組織形態(tài)學(xué)觀察：（1）光鏡觀察方法：處死動物后沿眼球顳側(cè)角鞏膜緣處剪開眼眶，摘除眼球，每組10只，共50只，保留約2～3 mm長度的視神經(jīng)組織，放入4%多聚甲醛（PBS溶解）固定，常規(guī)乙醇脫水，石蠟包埋，于后極部視神經(jīng)周圍切片，制成4～5μm組織切片，常規(guī)脫蠟脫水行Masson三色染色。奧林巴斯BX50彩色數(shù)碼攝像頭連續(xù)攝取切片彩色圖像，每個標(biāo)本隨機選擇10幅圖像，采用Mias-2000型圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行分析，測量RPE厚度、Bruch’s膜厚度。每一標(biāo)本均為100次測量（每幅圖像10次）的平均值。（2）電鏡觀察方法：摘除眼球方法同前，經(jīng)30 ml/L戊二醛預(yù)固定，10 g/L四氧化鋨再固定，丙酮逐級脫水，Epon812包埋，半薄切片光學(xué)定位，超薄切片，醋酸鈾及枸酸鉛染色，日本H-600IV型透射電鏡觀察。

1.4.4 RBCC中VEGF、VEGFR2表達(dá)的檢測：采用免疫組化方法。每組取10只左眼（與Masson三色染色為同一只眼球），于眼球后極部切成7μm厚的組織切片，涂上多聚-L-賴氨酸，經(jīng)脫蠟和100%乙醇處理后，用3%過氧化氫液浸泡切片20 min去除內(nèi)源性過氧化物酶活性，然后用70%乙醇再水合和PBS液清洗。標(biāo)本經(jīng)正常兔血清處理30 min以阻滯黏附的非特定抗體，再用鼠抗人VEGF及VEGFR2單克隆抗體在4℃溫度下孵育12 h。每張切片在視網(wǎng)膜后極部連續(xù)取5個視野，在奧林巴斯BX50光學(xué)顯微鏡200倍下觀察，運用Mias-2000型圖形圖像分析系統(tǒng)，測量RBCC層VEGF及VEGFR2的陽性表達(dá)總面積及積分光密度。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 一般情況

陰性對照組：進(jìn)食減少，體胖懶動，被毛枯槁，無光澤，白毛叢生，肌肉松弛。藥物治療組：被毛漸生光澤，較治療前活潑好動，且體質(zhì)量明顯低于陰性對照組（P＜0.05）（表 1）。

2.2 血脂及血液流變學(xué)

表1 載脂蛋白E缺乏小鼠治療后與其他各組的體質(zhì)量比較（）

表1 載脂蛋白E缺乏小鼠治療后與其他各組的體質(zhì)量比較（）

注：與陰性對照組比較，①P＜0.05；與普食組比較，②P＜0.05（單因素方差分析，LSD法）

組別 樣本量 體質(zhì)量/g低濃度給藥組 12 31.96±1.16①中濃度給藥組 12 31.57±1.51①高濃度給藥組 12 31.726±1.27①陰性對照組 12 34.27±1.16②普食組 12 32.18±1.59

2.2.1 血脂：普食組及各藥物治療組的TC、TAG濃度均明顯低于陰性對照組（P＜0.05）（表 2）。

表2 載脂蛋白E缺乏小鼠治療后與其他各組的血脂濃度比較（，mmol/L）

表2 載脂蛋白E缺乏小鼠治療后與其他各組的血脂濃度比較（，mmol/L）

注：與陰性對照組比較，①P＜0.05；與普食組比較，②P＜0.05（單因素方差分析，LSD法）

組別 樣本量 總膽固醇 三酰甘油低濃度給藥組 12 7.63±0.46① 0.80±0.21①中濃度給藥組 12 6.67±0.52① 0.65±0.23①高濃度給藥組 12 6.47±0.49① 0.62±0.21①陰性對照組 12 10.53±0.30② 1.15±0.29②普食組 12 9.63±0.18 0.88±0.21

2.2.2 血液流變學(xué)：陰性對照組的血漿黏度、紅細(xì)胞壓積、全血低切黏度、全血高切黏度明顯高于普食組（P＜0.05）；中濃度給藥組血漿黏度明顯低于陰性對照組（P＜0.05），中濃度給藥組、高濃度給藥組紅細(xì)胞壓積、全血低切黏度、全血高切黏度明顯低于陰性對照組（P＜0.05）（表 3）。

表3 載脂蛋白E缺乏小鼠治療后與其他各組的血液流變學(xué)指標(biāo)比較（）

表3 載脂蛋白E缺乏小鼠治療后與其他各組的血液流變學(xué)指標(biāo)比較（）

注：與陰性對照組比較，①P＜0.05；與普食組比較，②P＜0.05（單因素方差分析，LSD法）

組別 樣本量 血漿黏度/mPa·s 紅細(xì)胞壓積 全血低切黏度/mPa·s 全血高切黏度/mPa·s低濃度給藥組 12 1.81±0.10 54.17±3.71 33.27±3.07 33.27±3.07中濃度給藥組 12 1.72±0.08① 52.17±2.86① 29.05±2.75① 5.06±0.24①高濃度給藥組 12 1.74±0.11 52.00±3.41① 30.08±3.98① 5.13±0.19①陰性對照組 12 1.85±0.11② 56.17±3.06② 34.61±3.66② 5.64±0.24②普食組 12 1.74±0.13 51.83±3.19 26.76±3.86 5.18±0.30

2.3 光學(xué)顯微鏡鏡觀察

RPE厚度：陰性對照組明顯低于普食組（P＜0.05），藥物治療組略高于陰性對照組，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 Bruch’s膜厚度：陰性對照組明顯高于治療組及普食組（P＜0.05）（表 4，圖 1）。

2.4 RBCC中VEGF、VEGFR2的表達(dá)

普食組及各藥物治療組VEGF、VEGFR2的陽性表達(dá)總面積和積分光密度均明顯低于陰性對照組（P＜0.05）；中濃度給藥組的 VEGF、VEGFR2 表達(dá)明顯低于低、 高濃度給藥組 （P＜0.05）（表5～表6，圖 2～圖3）。

表4 載脂蛋白E缺乏小鼠治療后與其他各組RPE厚度、Bruch’s膜厚度比較（）

表4 載脂蛋白E缺乏小鼠治療后與其他各組RPE厚度、Bruch’s膜厚度比較（）

注：與普食組比較，①P＜0.05；與陰性對照組比較，②P＜0.05（單因素方差分析，LSD法）。RPE：視網(wǎng)膜色素上皮

組別 樣本量 RPE厚度/μm Bruch’s膜厚度/μm低濃度給藥組 10 5.08±0.34① 0.89±0.09②中濃度給藥組 10 5.09±0.40① 0.90±0.09②高濃度給藥組 10 5.10±0.46① 0.90±0.05②陰性對照組 10 4.98±0.50① 1.02±0.13①普食組 10 7.53±0.99 0.89±0.11

表5 各組載脂蛋白E缺乏小鼠實驗結(jié)束時RBCC中VEGF 的表達(dá)情況（）

表5 各組載脂蛋白E缺乏小鼠實驗結(jié)束時RBCC中VEGF 的表達(dá)情況（）

注：與陰性對照組比較，①P＜0.05；與普食組比較，②P＜0.05；與中濃度給藥組比較，③P＜0.05（單因素方差分析，LSD法）。RBCC：視網(wǎng)膜色素上皮-玻璃膜-脈絡(luò)膜毛細(xì)血管復(fù)合體；VEGF：血管內(nèi)皮生長因子

VEGF陽性表達(dá)積分光密度低濃度給藥組 10 71270±7115①③ 39368±5514①③中濃度給藥組 10 59945±3981① 33078±4519①高濃度給藥組 10 70137±5981①③ 39243±6106①③陰性對照組 10 81439±13732② 45811±7439②普食組 10 64032±11300 33493±5911組別 樣本量VEGF陽性表達(dá)總面積/μm2

表6 各組載脂蛋白E缺乏小鼠實驗結(jié)束時RBCC中VEGFR2 的表達(dá)情況（）

表6 各組載脂蛋白E缺乏小鼠實驗結(jié)束時RBCC中VEGFR2 的表達(dá)情況（）

注：與陰性對照組比較，①P＜0.05；與普食組比較，②P＜0.05；與中濃度給藥組比較，③P＜0.05（單因素方差分析，LSD法）。RBCC：視網(wǎng)膜色素上皮-玻璃膜-脈絡(luò)膜毛細(xì)血管復(fù)合體；VEGFR2：血管內(nèi)皮生長因子的R2受體

VEGFR2陽性表達(dá)積分光密度低濃度給藥組 10 71977±8201①③ 39613±6436①③中濃度給藥組 10 61279±8778① 32731±4398①高濃度給藥組 10 71890±5873①③ 39434±4812①③陰性對照組 10 82782±14968② 46415±8844②普食組 10 64855±8358 35077±6665組別 樣本量VEGFR2陽性表達(dá)總面積/μm2

圖1 各組載脂蛋白E缺乏小鼠視網(wǎng)膜光學(xué)顯微鏡下所見（Masson三色染色×200）。1A.陰性對照組；1B.普食組；1C.低濃度給藥組；1D.高濃度給藥組；1E.中濃度給藥組。RPE厚度：陰性對照組明顯低于普食組；Bruch's膜厚度：陰性對照組明顯高于治療組及普食組圖2 各組載脂蛋白E缺乏小鼠視網(wǎng)膜VEGF表達(dá)情況（×200）。2A.陰性對照組；2B.普食組；2C:低濃度給藥組；2D.高濃度給藥組；2E.中濃度給藥組。普食組及各藥物治療組VEGF的陽性表達(dá)均明顯低于陰性對照組；中濃度給藥組的VEGF表達(dá)明顯低于低、高濃度給藥組。VEGF：血管內(nèi)皮生長因子圖3 各組載脂蛋白E缺乏小鼠視網(wǎng)膜VEGFR2表達(dá)情況（×200）。3A.陰性對照組；3B.普食組；3C.低濃度給藥組；3D.高濃度給藥組；3E.中濃度給藥組。普食組及各藥物治療組VEGFR2的陽性表達(dá)均明顯低于陰性對照組；中濃度給藥組的VEGFR2表達(dá)明顯低于低、高濃度給藥組。VEGFR2：血管內(nèi)皮生長因子的R2受體

2.5 RBCC的超微結(jié)構(gòu)（圖4～圖6）

2.5.1 RPE：陰性對照組基底膜皺褶變短且減少，胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹，可見核邊集及核固縮，以及次級溶酶體。胞漿內(nèi)可見大量白色空泡（△所示）。普食組可見基底膜皺稀疏，胞質(zhì)內(nèi)個別線粒體腫脹，可見次級溶酶體，胞漿內(nèi)少量白色空泡。低濃度給藥組基底皺褶排列整齊，胞質(zhì)內(nèi)線粒體結(jié)構(gòu)清晰，可見次級溶酶體，大量色素顆粒，少量白色空泡。高濃度給藥組基底皺褶排列整齊，胞質(zhì)內(nèi)線粒體結(jié)構(gòu)清晰，可見次級溶酶體，色素顆粒較少，少許白色空泡。中濃度給藥組基底皺褶排列整齊，胞質(zhì)內(nèi)線粒體結(jié)構(gòu)清晰，可見次級溶酶體，色素顆粒明顯減少，未見白色空泡。

2.5.2 Bruch’s膜：陰性對照組較其它組增厚，可見大量半透明物沉積（☆所示），纖維結(jié)構(gòu)減少，彈力層斷裂。普食組Bruch’s膜結(jié)構(gòu)清晰，較為均勻，見少許半透明物沉積，纖維結(jié)構(gòu)連續(xù)；低濃度給藥組Bruch’s膜結(jié)構(gòu)清晰，較為均勻，少許半透明物沉積，纖維結(jié)構(gòu)較連續(xù)。高濃度給藥組Bruch’s膜結(jié)構(gòu)清晰，較為均勻，少許半透明物沉積，纖維結(jié)構(gòu)較連續(xù)。中濃度給藥組Bruch’s膜結(jié)構(gòu)清晰，較為均勻，未見半透明物沉積，纖維結(jié)構(gòu)連續(xù)，厚度明顯較陰性對照組變薄。

2.5.3 脈絡(luò)膜毛細(xì)血管：陰性對照組見內(nèi)皮細(xì)胞腫脹、變形，細(xì)胞核形態(tài)極不規(guī)則，異染色質(zhì)邊集，內(nèi)皮細(xì)胞間連接破壞，基底膜階段性增厚，管腔變窄。普食組的血管由一層連續(xù)的有窗孔的內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成（箭頭所示），內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)正常，線粒體輕度腫脹。各藥物治療組內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)正常，基底膜規(guī)則，管腔正常，線粒體結(jié)構(gòu)正常。

圖4 各組載脂蛋白E缺乏小鼠視網(wǎng)膜色素上皮（RPE）透射電子顯微鏡所見。4A.陰性對照組，胞漿內(nèi)可見大量白色空泡；4B.普食組；4C.低濃度給藥組；4D.高濃度給藥組；4E.中濃度給藥組。BM：Bruch’s膜；△代表胞漿內(nèi)空泡

圖5 各組載脂蛋白E缺乏小鼠Brush’s膜（BM）透射電子顯微鏡所見。5A.陰性對照組，可見大量半透明物沉積；5B.普食組；5C.低濃度給藥組；5D.高濃度給藥組；5E.中濃度給藥組。☆代表半透明物沉積

圖6 各組載脂蛋白E缺乏小鼠脈絡(luò)膜毛細(xì)血管層（CC）透射電子顯微鏡所見。6A.陰性對照組；6B.普食組，血管由一層連續(xù)的有窗孔的內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成（→所示）；6C.低濃度給藥組；6D.高濃度給藥組；6E.中濃度給藥組。☆代表半透明物沉積

3 討論

AMD屬于黃斑疾病，根據(jù)陳達(dá)夫黃斑屬足太陰脾經(jīng)的理論，本病的發(fā)病與脾臟的功能異常有關(guān)。曾慶華等〔10〕對本病的病位和臟腑歸屬進(jìn)行了更為深入的分析，認(rèn)為本病“標(biāo)”在黃斑屬脾胃，“本”在黃斑之下的脈絡(luò)膜屬少陰心腎，病位在脈絡(luò)膜毛細(xì)血管復(fù)合體等組織。該組織既富有心所主的血脈，又富有腎所主的色素，而黃斑色黃屬脾，故本病與脾腎心三臟密切相關(guān)。就病機特點而言，AMD證屬本虛標(biāo)實，虛為脾腎虛衰、氣血不足，實為痰瘀同病、痰瘀互結(jié)；病機關(guān)鍵是痰瘀同病，故在施治時應(yīng)重視化痰祛瘀，這也是中醫(yī)治療AMD痰瘀互結(jié)致病的必要手段，但治療痰瘀膠結(jié)的著眼點仍是辨證，以便能更精確地把握機體某一階段的病理，達(dá)到事半功倍的效果〔11〕。本課題吸收陳達(dá)夫及曾慶華教授的理論，以健脾祛瘀法循經(jīng)選藥擬定黃斑康方來治療AMD，該方由生蒲黃、川芎、丹參、牡丹皮、郁金等中藥組成，化痰祛瘀，并具有改善血脂、血液流變學(xué)指標(biāo)，以及抗氧自由基的綜合作用〔12〕。

本實驗中，血脂異常模型小鼠經(jīng)健脾祛瘀藥物治療后，其體質(zhì)量、血脂、血液流變學(xué)指標(biāo)均較陰性對照組明顯降低，RBCC的病理改變也輕于陰性對照組。治療組RPE基底皺褶排列整齊，線粒體結(jié)構(gòu)清晰，可見次級溶酶體，未見大量空泡出現(xiàn)；Bruch’s膜結(jié)構(gòu)清晰；脈絡(luò)膜毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)形態(tài)正常，基底膜規(guī)則，管腔正常。這可能與藥物清除了血液中的脂質(zhì)，阻止脂類物質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞線粒體，減少氧自由基數(shù)量，并改善Bruch’s膜代謝產(chǎn)物轉(zhuǎn)運有關(guān)。但因RPE不可再生，治療組的RPE雖較陰性對照組稍厚，其差異卻無統(tǒng)計學(xué)意義。

Katrina Spilsbury〔13〕等實驗發(fā)現(xiàn)，大鼠 RPE 細(xì)胞VEGF的暫時性高表達(dá)會引起脈絡(luò)膜新生血管的形成。VEGF是內(nèi)皮細(xì)胞特異性的有絲分裂因子，可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞的增殖、移遷，刺激VEGFR2介導(dǎo)新生血管內(nèi)皮細(xì)胞DNA合成和增殖。VEGFR2是VEGF的主要功能受體，它作為一種酪氨酸激酶受體與VEGF結(jié)合，形成二聚體及酪氨酸發(fā)生自身磷酸化，激活并將細(xì)胞膜/細(xì)胞質(zhì)激酶級聯(lián)反應(yīng)信號傳遞到細(xì)胞核，引發(fā)內(nèi)皮細(xì)胞的一系列變化，促進(jìn)新生血管形成并維持其完整性。VEGFR2還參與由VEGF介導(dǎo)的血管通透性改變〔7-9〕，下調(diào)VEGF的表達(dá)可以阻斷VEGF/VEGFR2信號傳導(dǎo)通路。本實驗通過免疫組化方法檢測小鼠RBCC中VEGF、VEGFR2的表達(dá)，結(jié)果藥物治療組的VEGF及VEGFR2表達(dá)較陰性對照組明顯減少，中濃度給藥組的VEGF、VEGFR2表達(dá)較低、高濃度給藥組低，說明中劑量的健脾祛瘀方在一定程度上抑制了血脂異常小鼠RBCC上VEGF及VEGFR2表達(dá)。

綜上所述，健脾祛瘀中藥可減輕實驗性血脂異常小鼠RBCC的病理性損害，一定程度上下調(diào)RBCC中VEGF、VEGFR2的表達(dá)，并可改善模型動物體質(zhì)量、血脂和血液流變學(xué)指標(biāo)，這可能是其預(yù)防和治療CNV的作用機制。

[1]張承芬.眼底病學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，1998：339-348.

[2]莫 亞，曾慶華，謝禮丹，等.血脂異常對APOE基因缺失小鼠視網(wǎng)膜及 Bruch 膜的影響[J].國際眼科雜志，2011，11（9）：1518-1520.

[3]Sivaprasad S， Bailey TA， Chong VNH.Bruch’s membrane and the vascular intima：is there a common basis for age-related changes and disease?[J].Clin Exp Ophthalmologic， 2005，33（5）： 518-523.

[4]Curcio CA，Millican C，Bailey T，et al.Accumulation of cholesterol with age in human Bruch’s membrane[J].Invest Ophthalmology Vis Sci，2001，42（1）：265-274.

[5]Haimovici R，Gantz DL，Rumelt S，et al.The lipid composition of drusen， Bruch’s membrane， and sclera by hot stage polarizing light microscopy[J].Invest Ophthalmologic Vis Sci，2001，42（7）：1592-1599.

[6]趙世紅，何守志，史雪輝.血管內(nèi)皮生長因子及其受體在實驗性脈絡(luò)膜新生血管中的表達(dá)[J].中華眼科雜志，2004，40（8）：522-527.

[7]Li B，F(xiàn)uh G，Meng G，et al.Receptor-selective variants of human vascular endothelial growth factor.Generation and cha racterization[J].J Biof Chem，2000，275（38）：29823-29828.

[8]Gille H，Kowalski J，Li B，et al.Analysis of biology effects and signaling properties of Flt-1（VEGFR1 ） and KDR（VEGFR2 ）.Areassessment using novel receptor-specific vascular endothelial growth factor mutants[J].Biof Chem，2001，276（5）：3222-3230.

[9]Larrivée B， Karsan A.Signaling pathways induced by vascular endothelial growth facto r（review）[J].Int J Mol Med，2000，5（5）：447-456.

[10]曾慶華，莫 亞，陳 麗.年齡相關(guān)性黃斑變性115例中醫(yī)證侯分型[J].中國中醫(yī)眼科雜志，2009，19（5）：274-277.

[11]陳麗，張敬衛(wèi)，曾慶華.年齡相關(guān)性黃斑變性痰瘀病機探析[J].中國中醫(yī)眼科雜志，2010，20（6）：351-352.

[12]沈映君.中藥藥理學(xué)[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：606，632，2811.

[13]Spilsbury K，Garrett KL，Shen WY，et al.Overexpression of vascular endothelial growth factor （VEGF）in the retinal pigment epithelium leads to the development of choroidal neovascularization[J].Am J Pathol，2000，157（1）： 135-144.