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    普羅帕酮在家兔體內(nèi)的死后分布1)

    2012-06-29 08:16:52朱培培楊澤國(guó)贠克明
    關(guān)鍵詞:帕酮檢材普羅

    朱培培,楊澤國(guó),王 莉,嚴(yán) 鵬,贠克明

    普羅帕酮(propafenone,PPF),又名心律平、丙苯酮、丙胺苯丙酮、羥丙苯丙酮,主要用于致命性室性心律失常的治療,也用于治療室上性心律失常以及在急性心肌梗死時(shí)出現(xiàn)的心律失常。由于在臨床患者中應(yīng)用較多,醫(yī)生對(duì)病人的監(jiān)管有一定的局限性,故誤服中毒成為常見(jiàn)原因之一,偶有中毒或死亡的病例報(bào)告[1-4]。有關(guān)普羅帕酮法醫(yī)毒物動(dòng)力學(xué)研究報(bào)道較少,僅見(jiàn)個(gè)別中毒(死)案件的檢驗(yàn)報(bào)道[5-7]。本實(shí)驗(yàn)建立了普羅帕酮口服中毒致死家兔的動(dòng)物模型,研究普羅帕酮在家兔體內(nèi)的死后分布規(guī)律,為口服普羅帕酮自殺和中毒案件的法醫(yī)學(xué)鑒定提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康家兔9只,體重(2.0±0.3)kg,雄性,由山西醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供,實(shí)驗(yàn)前隔夜禁食。

    1.2 試劑和藥品 PPF和地西泮標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于公安部物證鑒定中心。標(biāo)準(zhǔn)液:普羅帕酮標(biāo)準(zhǔn)品溶液,4℃冰箱保存。內(nèi)標(biāo)液:地西泮標(biāo)準(zhǔn)品甲醇溶液,4℃冰箱保存。普羅帕酮片劑每片50 mg,石藥集團(tuán)中諾藥業(yè)(石家莊)有限公司生產(chǎn),批號(hào):H13021670。

    1.3 染毒和樣品采集 健康家兔9只,分實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組家兔6只,經(jīng)胃管注入8LD50劑量的普羅帕酮0.44 g/kg,觀察其表現(xiàn),待家兔血壓、呼吸和心電全部消失后,迅速解剖動(dòng)物,取心血、膽汁、尿液、玻璃體液各1 mL,心、肝、脾、肺、腎、腦、肌肉等組織各1 g,按下述方法提取,高效液相色譜內(nèi)標(biāo)法定量檢測(cè)其中普羅帕酮。

    1.4 主要儀器及檢測(cè)條件 日本島津LC-20AT高效液相色譜儀,C18柱(日本島津5μm;150 mm×4.6 mm);柱溫25℃;流動(dòng)相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(62.3∶37.7∶0.034∶0.068);檢測(cè)波長(zhǎng)310 nm;流速1 mL/min;進(jìn)樣量20μL。

    1.5 檢材提取 取固體檢材1 g或液體檢材1mL,固體檢材超聲細(xì)胞粉碎勻漿3 min,加入內(nèi)標(biāo)液20μL,振蕩,加入p H=10的緩沖液0.5mL,振蕩搖勻,加入5mL乙醚,振蕩15 min,3 000 r/min離心10 min,將上清液移入另一干凈且干燥試管中,重復(fù)萃取一次。40℃恒溫水浴揮干,500μL甲醇定容,取20μL進(jìn)樣。利用保留時(shí)間定性,內(nèi)標(biāo)法和工作曲線法(液相色譜)定量[8,9]。

    1.6 精密度實(shí)驗(yàn) 取濃度為10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的三種普羅帕酮標(biāo)準(zhǔn)溶液在上述液相色譜條件下每樣品每日測(cè)定5次,連續(xù)測(cè)定2 d,由峰面積計(jì)算日內(nèi),日間變異系數(shù)(CV=S/X×100%)。

    1.7 工作曲線和回收率實(shí)驗(yàn) 取空白檢材(血、肝臟),分別加入普羅帕酮標(biāo)準(zhǔn)溶液及地西泮溶液,配制成含有普羅帕酮0.05 μg/g、0.1μg/g、0.2μg/g、0.5μg/g、1μg/g、2μg/g、4μg/g、8 μg/g、10μg/g、20μg/g和地西泮20μg/g的系列樣品,按照上述方法提取并檢測(cè)。以普羅帕酮濃度(μg/g或μg/mL)為橫坐標(biāo)(x),普羅帕酮與內(nèi)標(biāo)地西泮的峰面積之比為縱坐標(biāo)(y)進(jìn)行線性回歸,所得血線性回歸方程Y=1.1012X-0.283,R2=0.994,肝臟線性回歸方程Y=1.025 6X+0.035 3,R2=0.997;取肝組織1 g或心血1mL,各9份,分別加入標(biāo)準(zhǔn)品4μg(3份)、6μg(3份)、8μg(3份),按上述方法提取檢測(cè),標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算回收率。

    2 結(jié) 果

    2.1 中毒癥狀 實(shí)驗(yàn)組家兔染毒后,均出現(xiàn)精神萎靡、尿失禁、驚厥、昏迷、死亡。對(duì)照組無(wú)死亡。

    2.2 液相色譜圖 高效液相色譜檢測(cè),普羅帕酮和內(nèi)標(biāo)物地西泮可完全分離,峰形對(duì)稱(chēng),溶劑和臟器提取內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)普羅帕酮和地西泮無(wú)干擾??瞻讓?duì)照組未見(jiàn)異常峰。詳見(jiàn)圖1。

    圖1 染毒家兔血中普羅帕酮高效液相色譜圖

    2.3 死后分布 染毒死亡家兔膽汁、肺和肝中普羅帕酮濃度最高,玻璃體、肌肉中含量最低,與其他組織臟器樣本檢測(cè)值比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其含量順序?yàn)槟懼?、肺、肝>腎、脾、尿>心血、心、腦>玻璃體液、肌肉。詳見(jiàn)表1。

    表1 普羅帕酮在中毒死亡家兔體內(nèi)含量(±s) μg/g

    表1 普羅帕酮在中毒死亡家兔體內(nèi)含量(±s) μg/g

    最大值 最小值心樣品(±s 7.47±10.63 28.07 0.06肝 47.11±53.97 132.63 0.12脾 20.09±15.02 43.44 2.82肺 78.59±37.82 130.29 33.19腎 20.57±12.78 37.99 6.19腦 5.62±5.99 17.33 1.29肌 1.96±1.61 3.88 0.00心血 12.99±15.87 43.09 0.31尿 20.05±18.85 45.71 0.06膽汁 109.59±66.25 212.39 35.62玻璃體液2.10±3.51 8.75 0.00

    3 討 論

    3.1 HPLC檢測(cè) 普羅帕酮的檢測(cè)方法主要有薄層掃描和高效液相色譜法[10]。薄層掃描法簡(jiǎn)便、快速、定性好,但定量重復(fù)性稍差。已報(bào)告的高效液相色譜檢測(cè)方法主要是藥物和血清中普羅帕酮的檢測(cè),生物組織檢材中普羅帕酮的高效液相色譜檢測(cè)方法報(bào)告較少[11],而高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用法未見(jiàn)報(bào)告。本文采用本實(shí)驗(yàn)室先期建立的生物檢材中普羅帕酮的提取方法,建立了生物檢材中普羅帕酮的高效液相色譜檢測(cè)方法,未見(jiàn)內(nèi)源性雜質(zhì)干擾,具有操作簡(jiǎn)便快速﹑定性定量準(zhǔn)確的特點(diǎn),組織檢材中普羅帕酮提取物檢測(cè)線性范圍、最小檢出濃度均達(dá)到生物檢材中藥物檢測(cè)要求[12],可應(yīng)用于普羅帕酮中毒的法醫(yī)學(xué)鑒定。

    3.2 死后分布 劉佳佳等[13]報(bào)道4LD50染毒致死大鼠體內(nèi)鹽酸普羅帕酮含量順序?yàn)榧∪狻⒎?、脾、肝、外周血、心血、心、腎、大腦。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,4LD50染毒死家兔各臟器組織樣本中普羅帕酮含量由高到低分別為:膽汁、肺、肝>脾、腎、尿>心血、心、腦>玻璃體、肌肉。其中膽汁、肺和肝中濃度最高,玻璃體、肌肉樣本中含量最低。說(shuō)明鹽酸普羅帕酮的死后分布可能存在劑量和種屬差異。因此,在普羅帕酮中毒(死)案件法醫(yī)學(xué)鑒定時(shí),除血外,還應(yīng)采取胃(胃內(nèi)容)、膽汁、肺、肝等藥物分布量高的臟器,進(jìn)行全面定性和定量分析,并應(yīng)考慮中毒量、中毒死亡時(shí)間和種屬差異的影響。其死后分布含量關(guān)系還可用于極端條件下尸體血中普羅帕酮含量的推斷。

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