復(fù)方血塞通滴丸中葛根的血清藥化研究

李志平

（黑龍江省牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院藥劑科，牡丹江157011）

復(fù)方血塞通滴丸中葛根的血清藥化研究

李志平

（黑龍江省牡丹江醫(yī)學(xué)院紅旗醫(yī)院藥劑科，牡丹江157011）

本實驗利用血清藥物化學(xué)和復(fù)方拆方分析的研究方法，首先對血塞通滴丸體外成分建立了分析方法，在此基礎(chǔ)上對口服血塞通滴丸的大鼠血清中的移行成分建立了分析方法，對血塞通滴丸中的葛根在大鼠血中移行成分進行了對比，在液相色譜的條件下，我們通過對全方進行拆方對比確定了血塞通滴丸中的原型成分為葛根素，其他成分的認定有待進一步的研究。

HPLC；復(fù)方血塞通滴丸；葛根素

復(fù)方血塞通滴丸是由三七總皂苷、葛根與山楂提取物三味中藥經(jīng)科學(xué)制備，滴制而成的現(xiàn)代中藥制劑。具有活血化瘀，通經(jīng)活絡(luò)的功效，用于瘀血阻絡(luò)所致的眩暈、中風(fēng)，癥見肢體不用、言語不利及頭暈?zāi)垦?，腦動脈硬化，缺血性中風(fēng)及腦出血后遺癥的治療。本實驗采用HPLC法觀察葛根素在滴丸中經(jīng)口服后的體內(nèi)動態(tài)過程。

1 資料與方法

1.1 實驗儀器高效液相色譜儀：Waters600泵，Waters2487可調(diào)節(jié)紫外-可見檢測器，Waters公司Empower色譜工作站；色譜柱：Agela Technologies C18色譜柱（4.6mm×200mm，5μm）；METTLER TOLEDO AG135型電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司，十萬分之一）；KDC-160HR高速冷凍離心機（科大創(chuàng)新股份有限公司中佳分公司）；XW-80A漩渦混和器（江蘇海門市其林貝爾儀器制造有限公司）。

1.2 實驗試劑葛根素對照品（批號：110752-200511，購自中國藥品生物制品檢定所），甲醇、乙腈為色譜純，純凈水，其余均為分析純。葛根（購于哈爾濱寶豐藥店）按藥典鑒定均符合標(biāo)準。

1.3 實驗動物Wistar大鼠（購于沈陽），體重（200± 20）g，雄性。

1.4 實驗方法

1.4.1 單味葛根灌胃藥液制備取葛根260g加10倍量70%乙醇提取2次，每次1h，合并濾液，濃縮至藥液體積與生藥量比為1:1，加5倍量水，室溫靜置24h，離心，回收濾液。水浴揮干濃縮成浸膏，放入烘干箱中烘干。處方量的葛根干粉加適量水和處方量PEG4000和6000配制成單味葛根灌胃藥液。處方量山楂、三七加適量水和處方量PEG4000和6000配制成缺葛根灌胃藥液。滴丸自制。

1.4.2 含藥血清制備取Wistar大鼠，隨機分為4組，每組6只，實驗前禁食約12h，水自由飲取。分別給予血塞通滴丸藥液、單味葛根藥液、缺味葛根藥液和蒸餾水灌胃。按2ml/100g給大鼠灌胃，在給藥后0.0833h、0.167h、0.25h、0.5h、0.75h、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h、48h、72h尾靜脈取0.25ml血漿。給藥后lh給大鼠供水。將每次采集的血樣立刻轉(zhuǎn)入涂過肝素鈉的1.5ml微型離心試管中，在6000rpm下離心10min。取上清液150μl，加入600μl甲醇溶液，旋渦振蕩混合30s，靜置5min后再次旋渦振蕩30s，混合液在6000rpm下離心10min除去蛋白質(zhì)，上清液過0.45μm微孔濾膜后取20μl進樣分析。

1.4.3 色譜條件色譜柱：Agela Technologies Venusil XBP-C18（5μm，100A4.6×250mm）；流動相：乙腈（A）-0.5%磷酸水（B），0～50min：5%（A）～20%（A），50～130min：20%（A）-60%（A）；流速：1.0ml/min；柱溫：30℃；檢測波長：203nm。

2 結(jié)果

從圖1到圖8均為色譜對比圖，依次為葛根素對照品、空白血漿圖、空白加葛根素、葛根缺味、葛根單味體內(nèi)、滴丸體內(nèi)、葛根單味體外和滴丸體外圖。

圖1 葛根素對照品

圖2 空白血漿

圖3 空白加葛根素

圖4 葛根缺味

圖5 葛根單味體內(nèi)

圖6 滴丸體內(nèi)

圖7 葛根單味體外

由上圖我們可以得出葛根對血中移行成分的貢獻，對比圖7和8可以發(fā)現(xiàn)葛根對滴丸的貢獻有6個成分，對比圖5、6、7、8發(fā)現(xiàn)滴丸體內(nèi)成分有3個峰是葛根的貢獻，包括葛根素以及峰5，峰6，其他幾個峰并未在血中測出。對比圖5和7可知，峰7是葛根吸收入血后產(chǎn)生的新成分，這可能是因為藥物代謝過程中發(fā)生變化而改變了原來的結(jié)構(gòu)。對比圖5和6可知滴丸體內(nèi)并沒有測到峰7正是因為中藥配伍才產(chǎn)生了不同的吸收峰，這可能是因為藥物間相互作用而產(chǎn)生的變化。

3 討論

葛根素在提高小鼠耐缺氧能力方面有獨特之處，對小鼠的常壓缺氧、減壓缺氧、氰化鉀所致組織缺氧等均有顯著的延長存活時間的功能[1]。鐘飛等[2]進行實驗并證實，葛根及葛根粉在體外對超氧陰離子自由基(O2-.)和羥自由基（?OH）均有明顯的清除作用（P＜0.01），且這種清除氧自由基作用的能力隨其濃度的增加而升高。葛根素能夠使大鼠心、肝等組織中SOD活性顯著升高，心、腦、肝等組織中MDA含量顯著下降，提示葛根素可清除體內(nèi)脂質(zhì)過氧化物，減輕對機體的過氧化損傷[3]。

本文觀察葛根素后經(jīng)口服后的體內(nèi)動態(tài)過程。結(jié)果表明，復(fù)方中的其他配伍中藥對葛根素的吸收有較大的影響，可明顯提高葛根素在大鼠體內(nèi)的吸收利用程度。說明復(fù)方配伍改變了葛根素的作用效應(yīng)，說明中藥配伍應(yīng)用的科學(xué)性，從血清藥化角度揭示了復(fù)方配伍的科學(xué)合理性，為其進一步的研究開發(fā)，臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)，為復(fù)方中藥的分析研究提供了一定的思路?！餝

[1]郭密,韋倩,張仲君.中藥葛根素抗缺氧及抗氧化的藥效學(xué)研究[J].解放軍保健醫(yī)學(xué)雜志,2007,9(2):104-106.

[2]鐘飛,王曉春,林麗.葛根體外清除氧自由基作用的研究[J].湖南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報,2004,24(2):17-18.

[3]鐘星明,江麗霞,肖海.葛根素抗衰老作用的研究[J].時珍國醫(yī)國藥,2006, 17(12):2430-2431.

Serum Pharmacochemistry Study of Puerarin in Co-Xuesaitong Dropping Pill

Li Zhiping
(Pharmacy Department of Hongqi Hospital Affiliated Heilongjiang Mudanjiang Medical College,Mudanjiang,157011,China)

Serum chemistry and decomposed recipes methods was used in this study.It established the method to analyze the components of Xuesaitong dropping pill that out of the body,then the method to analyze the migration components of pueraria in rat blood was established based on this method.The migration elements of pueraria in rat blood are detected.The puerain was detected by HLPC as the orginal ingredients of the Xuesaitong dropping pill,while the other ingredients need to be found in further study.

HPLC;Co-Xuesaitong dropping pill;Puerarin

10.3969/j.issn.1672-2779.2012.05.109

1672-2779（2012）-05-0156-02

：崔紅

2011-11-30）