薄層色譜掃描法測(cè)定板連沖劑中靛玉紅與靛藍(lán)的含量

史長(zhǎng)生 許 立*

（1 武警河北總隊(duì)醫(yī)院醫(yī)務(wù)處，河北 石家莊 050081；2 武警河北總隊(duì)醫(yī)院藥劑科，河北 石家莊 050081）

板藍(lán)根、連翹為臨床常用中藥，均具有清熱解毒之功效，臨產(chǎn)上常用于治療病毒引起的流感、上感、風(fēng)熱等癥。入秋以來(lái)，甲型H1N1流感疫情明顯增多，市場(chǎng)上的抗病毒中藥日趨緊張，為加強(qiáng)部隊(duì)?wèi)?yīng)對(duì)甲型H1N1流感及季節(jié)性流感的衛(wèi)勤保障能力，我院組織有關(guān)專家及技術(shù)人員研發(fā)了板連沖劑復(fù)方中藥制劑保障部隊(duì)使用。板藍(lán)根的有效成分：靛藍(lán)、靛玉紅、喹唑酮酸、棕櫚酸、苯甲酸、水楊酸、22氨基苯甲酸、丁香酸、脯氨酸、精氨酸、腺苷、尿苷、尿嘌呤、鳥(niǎo)嘌呤和次黃嘌呤[1-3]。《中國(guó)藥典》中并未明確對(duì)板藍(lán)根質(zhì)量控制中的含量測(cè)定方法和指標(biāo)，而本試驗(yàn)采用了TLC法對(duì)復(fù)方板藍(lán)根顆粒進(jìn)行定性鑒別，以便更好地控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量，保證臨床用藥的有效性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品、試劑與儀器：靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110717200204）；靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110716200610）；板連沖劑（武警河北總隊(duì)醫(yī)院制劑室研發(fā)，規(guī)格10g/袋）；硅膠HPTLC板（青島海洋化工有限公司）；石油醚、乙酸乙酯、氯仿均為色譜純。CS-930型薄層掃描儀（日本島津）；DHG-9243BS型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱；AR64CN型電子天平（奧豪斯儀器(上海)有限公司）；微量進(jìn)樣器（山東滕海分析儀器有限公司）。

1.1.2 色譜條件：薄層層析板：硅膠HPTLC板；展開(kāi)劑：石油醚-乙酸乙酯-氯仿（1∶1∶8）。

1.2 方法

1.2.1 硅膠HPTLC板于105℃活化1h，冷卻后置干燥器中備用。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密稱取靛玉紅標(biāo)準(zhǔn)品10mg，置于100mL容量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，搖勻。配成每毫升含0.1mg靛玉紅的標(biāo)準(zhǔn)溶液。避光保存。

靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備：精密稱取靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)品50mg，置于250mL容量瓶中，加氯仿溶解，定容至刻度，搖勻。配成每毫升含0.2mg靛藍(lán)的標(biāo)準(zhǔn)溶液。避光保存。

1.2.3 供試品溶液的制備

將板連沖劑研磨，過(guò)篩，烘干。精密稱取5g，用氯仿100mL索式回流提取，過(guò)濾，濾液水浴蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜?0mL。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密吸取上述靛玉紅、靛藍(lán)對(duì)照品溶液1μL、2μL、3μL、4μL、5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠HPTLC板上，依法展開(kāi)[4]，并進(jìn)行全程掃描測(cè)定各斑點(diǎn)的面積。以斑點(diǎn)面積積分值為縱坐標(biāo)Y，以點(diǎn)樣量為橫坐標(biāo)X，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.2.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液5μL點(diǎn)于硅膠HPTLC板上，依上述條件層析展開(kāi)，顯色，每間隔0.5h測(cè)定一次峰面積積分值，計(jì)算RSD。

1.2.6 精密性實(shí)驗(yàn)

精密吸取對(duì)照品溶液3μL在同一塊薄層板上點(diǎn)樣6次，依法展開(kāi)，計(jì)算各斑點(diǎn)的峰面積積分值RSD。

1.2.7 樣品含量測(cè)定

分別精密吸取不同供試品溶液2μL，對(duì)照品溶液1μL和3μL，交叉點(diǎn)于同一硅膠HPTLC板上，按上述條件展開(kāi)，顯色，掃描測(cè)定各樣品中靛玉紅、靛藍(lán)的含量，以外標(biāo)二點(diǎn)法計(jì)算含量。

1.2.8 加樣回收實(shí)驗(yàn)

取5份已知含量（0.496mg/g）的供試品粉末2g，精密加入靛玉紅及靛藍(lán)對(duì)照品，按供試品溶液制備，測(cè)定回收率。

1.2.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.1.1 以靛玉紅對(duì)照品濃度c對(duì)峰面積A進(jìn)行線性回歸分析，得一不過(guò)原點(diǎn)的線，因此使用外標(biāo)兩點(diǎn)法進(jìn)行含量測(cè)定。靛玉紅在點(diǎn)樣量0.1～0.5μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，得回歸方程為：Y=9991X+1017.9，r =0.9999，見(jiàn)圖1。

圖1 靛玉紅對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

2.1.2 同2.1.1方法得靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為：Y=19955X+2080.5，r =0.9998，見(jiàn)圖2。

2.2 穩(wěn)定性及精密性實(shí)驗(yàn)

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的RSD為1.18%（n=5），精密性實(shí)驗(yàn)結(jié)果的RSD為2.18%。

圖2 靛藍(lán)對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果測(cè)定板連沖劑中靛玉紅與靛藍(lán)含量的RSD分別為2.74%、3.54%和4.53%、2.96%，見(jiàn)表1。

表1 回收率測(cè)定結(jié)果表

2.3 板連沖劑中靛玉紅與靛藍(lán)的含量，見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討 論

近些年來(lái)季節(jié)性流感的感染情況愈發(fā)嚴(yán)重，年初以來(lái)?yè)?jù)衛(wèi)生部公布的數(shù)據(jù)已經(jīng)有10萬(wàn)多人次感染甲型H1N1流感，死亡300多例。隨著國(guó)內(nèi)外對(duì)板藍(lán)根抗病毒作用的進(jìn)一步研究，傳統(tǒng)中藥板藍(lán)根在預(yù)防與治療病毒性流感方面的作用更加顯著，從而導(dǎo)致了這一類藥物在市場(chǎng)上的緊俏[5-6]。目前關(guān)于板藍(lán)根的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)尚無(wú)確切定論，本實(shí)驗(yàn)參考了近些年來(lái)的研究，通過(guò)檢測(cè)板連沖劑中的靛玉紅以及靛藍(lán)的含量來(lái)對(duì)制劑進(jìn)行治療控制，通過(guò)查閱相關(guān)文獻(xiàn)資料本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示板連沖劑中的板藍(lán)根有效成分含量較高[6,7]，因此下一步將按照申請(qǐng)新藥的標(biāo)準(zhǔn)繼續(xù)完善制劑的質(zhì)量，以期盡早形成量產(chǎn)。

[1]王瑞,楊海英,楊琪偉,等.板藍(lán)根的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究[J].中草藥,2010,3(3):478-480.

[2]崔卓,王穎,康廷國(guó).板藍(lán)根有效成分質(zhì)量研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2004,8(8):692-693.

[3]馬方,陳秀英.薄層層析法檢測(cè)板藍(lán)根所含靛玉紅、靛藍(lán)的方法研究[J].河南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),2008,23(135):39-41.

[4]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典·一部[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:附錄Ⅵ B.

[5]陳慶.板藍(lán)根藥理作用與臨床應(yīng)用[J].中國(guó)藥事,2009,23(6):607-608.

[6]丁越,張彤,陶建生.板藍(lán)根藥材中有效成分的含量測(cè)定研究[J].中成藥,2008,30(11):1697-1701.

[7]馬莉,孫琴,李友,等.HPLC法測(cè)定板藍(lán)根藥材及制劑中靛藍(lán)和靛玉紅含量[J].藥物分析雜志,2010,30(9):1642-1645.