口服阿苯達(dá)唑三種不同溶液抗小鼠旋毛蟲成囊期幼蟲的效果觀察＊

李潤花，趙文婧，裴彥江，李起超，殷國榮

旋毛形線蟲（Trichinella spiralis），簡稱旋毛蟲，其成蟲和幼蟲分別寄生于同一宿主的小腸和肌肉內(nèi)，由其引起的旋毛蟲病（trichinosis）是一種嚴(yán)重的人獸共患寄生蟲病。成囊期幼蟲（肌肉期幼蟲）可在宿主肌肉中存活數(shù)年，既是主要致病期，又是唯一傳播蟲期。近年來，燒、烤、涮等飲食方式的多樣化，已發(fā)生多起旋毛蟲病暴發(fā)，旋毛蟲病發(fā)病率有逐年上升的趨勢［1］。

阿苯達(dá)唑?qū)πx的幼蟲和成蟲均有效，已成為治療旋毛蟲病的首選藥物［2］。但是，阿苯達(dá)唑治療同一種寄生蟲病的療效存在很大差異，這是由于阿苯達(dá)唑的低水溶性及腸道的低吸收率所致［3］。動物研究表明，提高阿苯達(dá)唑生物藥效率的主要策略是應(yīng)用共溶劑或表面活性劑以增加水溶性和脂溶性。將阿苯達(dá)唑與共溶劑（二甘醇單乙醚）結(jié)合可使小鼠體內(nèi)阿苯達(dá)唑的相對生物藥效率增加1.8倍［4］。與商品片劑相比，用花生油－吐溫80或羥丙基－β－環(huán)糊精作為賦形劑可提高阿苯達(dá)唑生物藥效率4.3～9.7倍［5］。大豆油可增加阿苯達(dá)唑溶解度，其相對生物藥效率比片劑提高了1.6倍［6］。

本研究比較了吐溫－80、羧甲基纖維素和羥丙基－β－環(huán)糊精作為阿苯達(dá)唑片劑的溶劑對其抗小鼠旋毛蟲成囊期幼蟲效果的影響。

1 材料與方法

1.1 阿苯達(dá)唑及溶劑 阿苯達(dá)唑（Albendazole，ABZ）片劑，購自中美天津史克制藥有限公司，批號10110360。吐溫－80，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所。羧甲基纖維素（Carboxymethyl cellulose，CMC）、羥丙基－β－環(huán)糊精（hydroxypropyl-β-cyclodextrin，HP-β-CD），購自美國Sigma公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)動物及蟲株 8周齡BALB/c小鼠32只（SPF級），體重20～24g，購自中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物研究所。旋毛形線蟲（T.spiralis），山西醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)寄生蟲學(xué)研究所小鼠保種。

1.3 動物感染與治療 將小鼠隨機(jī)分為4組，每組8只。每鼠口飼感染成囊期幼蟲50條，感染后第14 d，頓服300mg/kg，吐溫－80和3%乙醇溶液配制成阿苯達(dá)唑混懸液［7］，驅(qū)除腸道成蟲。驅(qū)蟲后第29 d，分別用不同溶劑的阿苯達(dá)唑治療，連續(xù)6d，劑量均為200mg/（kg·d）。對照組不治療。吐溫組：阿苯達(dá)唑用7%吐溫－80和3%乙醇溶解；羧纖組：用1%羧甲基纖維素和3%乙醇溶解；羥環(huán)組：用7%羥丙基－β－環(huán)糊精3%乙醇溶解。45℃磁力攪拌10h，以使阿苯達(dá)唑充分溶解。

1.4 療效觀察 治療后第14d處死小鼠，壓片法鏡檢計(jì)數(shù)膈肌和腓腸肌成囊期幼蟲。按照李潤花等［8］制定的判斷存活和死亡成囊期幼蟲的標(biāo)準(zhǔn)，確定幼蟲的存活或死亡。以每克肌肉中成囊期幼蟲的總蟲數(shù)、活蟲數(shù)和死亡蟲數(shù)為療效評價(jià)指標(biāo)，計(jì)算減蟲率、活蟲率和死蟲率?？傁x數(shù)＝鏡檢蟲數(shù)÷肌肉重量（克）；減蟲率＝［（對照組平均蟲數(shù)－治療組平均蟲數(shù)）÷對照組平均蟲數(shù)］×100%；死蟲率＝死亡蟲數(shù)÷總蟲數(shù)×100%。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)采用（±s）表示，使用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件處理。多個(gè)樣本均數(shù)比較用方差分析及LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 小鼠健康狀況 實(shí)驗(yàn)期間，各組小鼠采食、飲水正常，健康狀況良好，未見藥物不良反應(yīng)。

2.2 成囊期幼蟲的蟲荷及減蟲率、死蟲率 與對照組相比，3個(gè)治療組膈肌和腓腸肌中成囊期幼蟲總蟲數(shù)和存活蟲數(shù)均顯著減少（P＜0.05、P＜0.01），死亡蟲數(shù)顯著增加（P＜0.05、P＜0.01），療效最高的為羥環(huán)組。將吐溫組阿苯達(dá)唑的相對藥效率設(shè)為1.0，以減蟲率計(jì)算，羧纖組和羥環(huán)組對膈肌和腓腸肌中成囊期幼蟲相對藥效率分別為吐溫組的1.55、1.33和1.95、1.83倍；而以死蟲率計(jì)算，該數(shù)據(jù)分別為1.93、1.82和2.45、3.22倍（表1、2）。

3 討 論

薛劍等實(shí)驗(yàn)表明，連續(xù)7d口服阿苯達(dá)唑200 mg/（kg·d）治療小鼠旋毛蟲成囊期幼蟲，總蟲數(shù)顯著少于對照組（P＜0.01），膈肌減蟲率為71.8%［7］。本研究中吐溫組的阿苯達(dá)唑劑量及配制方法與薛劍等的實(shí)驗(yàn)相同，但膈肌和腓腸肌的減蟲率僅為28.13%和42.95%。出現(xiàn)這種差異的原因雖然與本研究給藥時(shí)間較短（6d）有關(guān)，但主要原因是薛劍等的實(shí)驗(yàn)是采用胃蛋白酶消化法回收肌肉中的幼蟲，只有當(dāng)幼蟲的活力較強(qiáng)時(shí)，才能被回收，亦即死亡和受損幼蟲都不可能被回收計(jì)數(shù)，因而治療組回收的幼蟲較少。而本研究是采用肌肉壓片法計(jì)數(shù)肌肉中的幼蟲，無論是活的或死亡的幼蟲都被計(jì)算到總蟲數(shù)中，故而治療組的減蟲率相對較低。支持這一觀點(diǎn)的直接證據(jù)是，本研究治療組膈肌的活蟲數(shù)顯著減少，而死蟲數(shù)顯著增加。

表1 口服不同溶劑對阿苯達(dá)唑抗小鼠膈肌旋毛蟲成囊期幼蟲的效果Tab.1 Effect of 3different oral liquid formulations of albendazole against Trichinella spiralis encapsulated larvae in diaphragmatic muscle in mice

表2 口服不同溶劑對阿苯達(dá)唑抗小鼠腓腸肌旋毛蟲成囊期幼蟲的效果Tab.2 Effect of 3different oral liquid formulations of albendazole against Trichinella spiralis encapsulated larvae in gastrocnemius muscle in mice

本研究的主要發(fā)現(xiàn)是，口服相同劑量阿苯達(dá)唑，用1%羧甲基纖維素和3%乙醇（羧纖組）或7%羥丙基－β－環(huán)糊精3%乙醇溶解阿苯達(dá)唑（羥環(huán)組），膈肌和腓腸肌的減蟲率、死蟲率均顯著高于7%吐溫－80和3%乙醇（吐溫組）溶解，阿苯達(dá)唑的相對藥效也顯著提高。這些數(shù)據(jù)表明，用羧甲基纖維素和羥丙基－β－環(huán)糊精溶解阿苯達(dá)唑可有效提高其生物藥效率。

已有研究表明，在小鼠旋毛蟲感染模型比較了阿苯達(dá)唑－環(huán)糊精混合劑（ABZ-CDC）和阿苯達(dá)唑－羧甲基纖維素混懸液（ABZ-CMC）的生物藥效率和驅(qū)腸蟲效能。ABZ-CDC的驅(qū)腸蟲效能和活性代謝物（ABZSO）血漿濃度顯著高于 ABZ-CMC［9］。García等研究表明，口服溶于羥丙基－β－環(huán)糊精（HP-β-CD）的阿苯達(dá)唑溶液的生物藥效率和驅(qū)蟲效果優(yōu)于羧甲基纖維素（CMC）阿苯達(dá)唑混懸液［10］。Casulli等也證實(shí)，HP-β-CD可有效提高阿苯達(dá)唑的生物藥效率和抗旋毛蟲成囊期幼蟲的效果［11］。

表面活性劑吐溫－80可增加阿苯達(dá)唑的脂溶性，乙醇也為脂溶性溶劑，CMC則常作為片劑的黏合劑、崩解劑或混懸劑的助懸劑，HP-β-CD可增加阿苯達(dá)唑的水溶性。本研究表明可增加水溶性的HP-β-CD（7%）與增加脂溶性的乙醇（3%）制備的阿苯達(dá)唑溶液的生物藥效率和抗旋毛蟲成囊期幼蟲效果顯著高于吐溫－80與乙醇溶劑，也優(yōu)于CMC與乙醇溶劑。

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