鷹嘴豆肽抑制腫瘤作用和對(duì)免疫功能的影響

高 捷，王 華，寇曉虹，薛照輝*

(天津大學(xué)化工學(xué)院食品科學(xué)系，天津 300072)

鷹嘴豆肽抑制腫瘤作用和對(duì)免疫功能的影響

高 捷，王 華，寇曉虹，薛照輝*

(天津大學(xué)化工學(xué)院食品科學(xué)系，天津 300072)

目的：探討鷹嘴豆肽抑制肝癌H22細(xì)胞移植瘤的效果及對(duì)免疫功能的影響。方法：將小鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組、腫瘤對(duì)照組和鷹嘴豆肽低、中、高劑量組(50、100、200mg/(kg·d))，除正常組外，其余各組小鼠均在皮下接種肝癌H22細(xì)胞，建立肝癌小鼠模型。建模后第2天開始灌胃給藥，連續(xù)給藥10d。末次給藥24h后拉托頸椎處死小鼠，測(cè)體質(zhì)量、腫瘤大小、抑瘤率、胸腺指數(shù)、脾指數(shù)、巨噬細(xì)胞吞噬能力、脾細(xì)胞吞噬能力等。 結(jié)果：鷹嘴豆肽低、中、高3個(gè)劑量均可抑制H22腫瘤的生長(zhǎng)，且沒有阻礙小鼠體質(zhì)量和免疫器官的增長(zhǎng)。與腫瘤對(duì)照組相比，鷹嘴豆高劑量組可以顯著提高小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)的能力、淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞吞噬能力(P＜0.05)，鷹嘴豆低、中劑量組對(duì)其也有一定的改善作用，但是沒有表現(xiàn)出劑量依賴效應(yīng)。 討論：鷹嘴豆肽可能是通過(guò)增強(qiáng)H22肝癌小鼠的免疫功能來(lái)抑制腫瘤的生長(zhǎng)，具體的作用機(jī)制還需要更深入的研究。

鷹嘴豆肽；抗腫瘤；H22腫瘤；免疫功能

腫瘤是一類嚴(yán)重危害人類身體健康的常見病、多發(fā)病，其中惡性腫瘤對(duì)人類的危害尤為嚴(yán)重。肝癌是嚴(yán)重威脅我國(guó)人民健康的惡性腫瘤之一，而且具有起病隱匿、惡化程度高、易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)和預(yù)后差的特點(diǎn)[1]。目前，化學(xué)藥物治療是治療肝癌的主要手段，但臨床常用的化療藥物具有嚴(yán)重的非特異性的細(xì)胞毒作用，在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)對(duì)機(jī)體正常組織器官也會(huì)造成一定程度的損傷，在很大程度上限制了其應(yīng)用，此外，許多腫瘤細(xì)胞對(duì)常規(guī)化療有了多重耐藥性[2]。因此，尋找對(duì)腫瘤細(xì)胞具有選擇性殺傷作用，而且對(duì)正常細(xì)胞有相對(duì)低毒性的藥物成為迫切的要求。

鷹嘴豆(Cicer arietinum L.)系豆科蝶形花亞科典型代表植物，原產(chǎn)于西亞土耳其一帶，2500年前即已傳入我國(guó)新疆，目前，在世界各地均有栽培，我國(guó)主要在西部、北部等干旱和半干旱地區(qū)種植[3]。鷹嘴豆是一種優(yōu)良的植物蛋白質(zhì)資源，其蛋白質(zhì)含量占籽粒干基總量的15%～30%，含有人體所必需的8種氨基酸，含量高，組成均衡[4-5]。在我國(guó)它是一味維族民間藥和傳統(tǒng)中藥，可清熱解毒，主治消渴、肝炎、腳氣。此外，鷹嘴豆還具有抗骨質(zhì)疏松[6]、抗氧化[7]、降低血糖、血脂和調(diào)節(jié)膽固醇水平[8-9]等藥理活性。鷹嘴豆異黃酮還可以防止癌細(xì)胞的增殖，促使癌細(xì)胞的死亡，尤其是與性腺相關(guān)的癌癥細(xì)胞，如乳腺癌[10-11]、前列腺癌[12-13]等。本研究通過(guò)抑瘤率、淋巴細(xì)胞吞噬能力、免疫器官指數(shù)等免疫抑制指標(biāo)，探討鷹嘴豆肽抑制肝癌H22細(xì)胞移植瘤的效果及對(duì)免疫功能的影響，為鷹嘴豆肽的綜合利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

小鼠肝癌H22細(xì)胞、KM小鼠(18～20g)購(gòu)于中國(guó)放射性醫(yī)學(xué)研究所；鷹嘴豆購(gòu)于新疆市場(chǎng)；鷹嘴豆肽由實(shí)驗(yàn)室自制[14-15]。

RPMI-1640培養(yǎng)基 美國(guó)Gibco公司。刀豆蛋白A (Con A) 美國(guó)Sigma公司；四氮甲基偶氮唑鹽(MTT) 美國(guó)Amresco公司；注射用環(huán)磷酰胺(Cy)(批號(hào)：10022321)江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；印度墨汁 北京化學(xué)試劑公司；胎牛血清 美國(guó)MD 公司；紅細(xì)胞裂解液 碧云天生物技術(shù)研究所；其余試劑均為分析純。

72862-415 CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱 美國(guó)Forma Scientific公司；普通光學(xué)顯微鏡 日本Olympus公司；電子分析天平 賽多利斯科學(xué)儀器(北京)有限公司；臺(tái)式高速離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠；超凈工作臺(tái) 蘇州凈化設(shè)備有限公司；WH-1微型渦旋混合儀 上海滬西分析儀器廠有限公司；酶標(biāo)儀 美國(guó)Thermo公司。

1.2 方法

1.2.1 接種方法

無(wú)菌獲取肝癌H22細(xì)胞，以無(wú)菌生理鹽水配制成細(xì)胞數(shù)為1×106個(gè)/mL 的細(xì)胞懸液，每只小鼠右腋皮下接種0.2mL。

1.2.2 動(dòng)物分組與給藥劑量

實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物隨機(jī)分為正常組(NC)、陽(yáng)性對(duì)照組(PC)、腫瘤對(duì)照組(TC)、鷹嘴豆肽低劑量組(CPe-LD)、鷹嘴豆肽中劑量組(CPe-MD)、鷹嘴豆肽高劑量組(CPe-HD)共6組。除正常組，其他各組小鼠均接種肝癌H22細(xì)胞液，接種后第2天，按表1設(shè)計(jì)方案連續(xù)灌胃10d。

表1 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)方案Table 1 Experimental design for mouse grouping

1.2.3 腫瘤抑制實(shí)驗(yàn)

從接種肝癌H22細(xì)胞后第4天開始測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)徑和短徑，每隔2d測(cè)1次，按照式(1)計(jì)算腫瘤體積。

末次灌胃24h后，對(duì)小鼠眼窩取血，取血后拉托頸椎處死小鼠，并摘取腫瘤、胸腺和脾，經(jīng)生理鹽水洗滌后用濾紙吸干稱質(zhì)量，分別計(jì)算抑瘤率、胸腺指數(shù)和脾指數(shù)。

1.2.4 遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)

接種肝癌H22細(xì)胞后第5天，小鼠腹部去毛，用1%二硝基氟苯(DNFB)丙酮麻油溶液在去毛處均勻涂抹致敏(每鼠25μL)，24h后重復(fù)操作加強(qiáng)致敏一次。加強(qiáng)致敏后第4天，用10μL DNFB溶液均勻涂抹右耳(兩面)進(jìn)行攻擊，對(duì)照組同樣涂耳但未致敏。24h后處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器在雙耳相應(yīng)部分各取下直徑8mm的耳片，稱質(zhì)量，以左右兩耳質(zhì)量差表示腫脹程度。

1.2.5 巨噬細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn)(碳粒廓清實(shí)驗(yàn))

1)將稀釋的印度墨汁(0.1mL/10g 以體質(zhì)量計(jì))經(jīng)尾靜脈注入體內(nèi)，待墨汁注射完畢，立即計(jì)時(shí)。2)注入墨汁后的2min和10min，用血色素吸管分別從小鼠左右眼眶后靜脈叢取血滴于載玻片上，用微量移液器吸取20μL于裝有2mL 0.1% Na2CO3溶液的一次性塑料試管中，搖勻。3)以Na2CO3溶液為空白，于波長(zhǎng)600nm處測(cè)光密度值(OD)。4)拉脫頸椎處死小鼠，取出脾臟和肝臟，用濾紙吸干其表面血液，稱質(zhì)量。按式(5)、(6)計(jì)算吞噬指數(shù)：

式中：OD1為t1=2min血標(biāo)本的光密度值；OD2為t2=10min血標(biāo)本的光密度值。

式中：α為吞噬指數(shù)；m體為體質(zhì)量/g；m肝為肝質(zhì)量/g；m脾為脾質(zhì)量/g。

1.2.6MTT法淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

1)脾淋巴細(xì)胞懸液：將小鼠拉托頸椎處死，用75%酒精浸泡5～10min，剪開腹部皮膚和腹膜，無(wú)菌取出脾臟，放入有5mL PBS(pH7.4)的平皿中，用5mL注射器抽取平皿中PBS液體緩緩注入脾臟內(nèi)，使脾細(xì)胞沖洗出來(lái)。反復(fù)沖洗，直到脾臟變白為止(約沖洗2～3次)，將細(xì)胞移入10mL無(wú)菌離心管中，1000r/min 5min離心，棄上清。加紅細(xì)胞裂解液(細(xì)胞體積的3～5倍)，裂解3min，1000r/min離心5min，棄去上清。用PBS重復(fù)洗脾細(xì)胞1次，以2mL 10%FCS-R/RPMI-1640培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色檢測(cè)細(xì)胞存活率＞95%，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×107個(gè)/mL。

2)孵育：每份細(xì)胞懸液按100μL/孔加入96孔培養(yǎng)板中，每個(gè)樣品設(shè)3重復(fù)，實(shí)驗(yàn)組每孔加100μL 10μg/mL的ConA液，對(duì)照組加入100μL 10% FCS-R/ RPMI -1640培養(yǎng)液。置于37℃、5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育72h。

3)MTT處理：培養(yǎng)結(jié)束前4h，每孔棄去上清100μL，加入MTT(5mg/mL)10μL/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4h。

4)測(cè)定：培養(yǎng)結(jié)束后，離心去上清，每孔中加入150μL DMSO，微型振蕩器上800r/min振蕩5min，使紫色結(jié)晶完全溶解。30min內(nèi)在酶聯(lián)檢測(cè)儀波長(zhǎng)490nm處比色。

5)結(jié)果表示及評(píng)價(jià)：結(jié)果以波長(zhǎng)490nm處的光密度值來(lái)表示。用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值代表淋巴細(xì)胞的增殖能力。若實(shí)驗(yàn)組的光密度值明顯高于對(duì)照組的光密度值，說(shuō)明該實(shí)驗(yàn)物對(duì)ConA刺激的淋巴細(xì)胞增殖功能有促進(jìn)作用。

1.2.7 數(shù)據(jù)處理

應(yīng)用SPSS 15. 0 for Windows 統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)用±s表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠及腫瘤外觀表征

從整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間看，正常組小鼠：身體勻稱，生長(zhǎng)旺盛、活躍、動(dòng)作敏捷、反應(yīng)靈活、被毛乳白色、濃密、整齊而且富有光澤。

腫瘤對(duì)照組小鼠：隨著腫瘤的增大，小鼠逐漸表現(xiàn)出活動(dòng)力低下，反應(yīng)遲鈍，喜歡蜷縮，毛發(fā)干枯、凌亂而且無(wú)光澤，個(gè)別小鼠表現(xiàn)出消瘦、發(fā)抖。

鷹嘴豆肽組小鼠：隨著腫瘤的增大，部分小鼠逐漸出現(xiàn)活動(dòng)遲緩，個(gè)別小鼠被毛稀疏蓬亂，第9天后大多數(shù)小鼠狀態(tài)優(yōu)于腫瘤對(duì)照組，且食欲有明顯改善。

腫瘤對(duì)照組腫瘤體積較大、顏色紅潤(rùn)、質(zhì)脆，瘤塊假膜不完整，部分浸潤(rùn)生長(zhǎng)至腿部肌肉，剝離時(shí)容易出血，也有部分腫瘤成灰黑色，切開后可見壞死組織，還有部分腫瘤發(fā)生液化，腫瘤形態(tài)不完整；鷹嘴豆肽灌胃后的腫瘤組織體積相對(duì)較小，顏色略蒼白、質(zhì)韌，瘤塊假膜完整，剝離時(shí)基本無(wú)出血。

2.2 接種后不同時(shí)間各組腫瘤體積及腫瘤生長(zhǎng)體積曲線

隨著實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行，鷹嘴豆肽組小鼠腫瘤的生長(zhǎng)呈現(xiàn)不同程度的抑制狀態(tài)(圖1)，其腫瘤體積與腫瘤對(duì)照組的差別逐漸增大，以鷹嘴豆肽中劑量組表現(xiàn)最明顯，腫瘤體積的增長(zhǎng)速度最為緩慢，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，鷹嘴豆肽中劑量組與腫瘤對(duì)照組腫瘤體積相比差異顯著(P＜0.05)。

圖1 接種后不同生長(zhǎng)時(shí)間腫瘤生長(zhǎng)體積曲線Fig.1 Effect of inoculation time on tumor growth

2.3 鷹嘴豆肽對(duì)H22肝癌小鼠的抑瘤作用和對(duì)小鼠免疫器官的影響

表2 鷹嘴豆肽對(duì)H22小鼠的抑瘤作用和對(duì)免疫器官的影響(±s，n=10)Table 2 Effect of chickpea peptides on tumor inhibition and immune organs in H22-bearing mice(±s，n=10)

表2 鷹嘴豆肽對(duì)H22小鼠的抑瘤作用和對(duì)免疫器官的影響(±s，n=10)Table 2 Effect of chickpea peptides on tumor inhibition and immune organs in H22-bearing mice(±s，n=10)

注：*. 與腫瘤對(duì)照組(TC)相比，有顯著性差異(P＜0.05)。下同。

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由表2可知，在飼喂期間，各組小鼠的體質(zhì)量均表現(xiàn)出不同程度的增長(zhǎng)趨勢(shì)。鷹嘴豆中劑量組生長(zhǎng)速度最快，與腫瘤對(duì)照組體質(zhì)量差異顯著(P＜0.05)，而鷹嘴豆低劑量組與腫瘤對(duì)照組差異不顯著。陽(yáng)性對(duì)照組小鼠體質(zhì)量增加較少，個(gè)別小鼠的體質(zhì)量還出現(xiàn)降低現(xiàn)象。腫瘤對(duì)照組的腫瘤平均質(zhì)量為(2.08±0.41)g，H22肝癌小鼠經(jīng)不同劑量鷹嘴豆肽灌胃后，平均質(zhì)量均有所減輕，低、中、高劑量組分別降為(1.33±0.32)、(0.97±0.17)、(1.06±0.22)g，其中，低、中、高劑量組與腫瘤對(duì)照組相比均有顯著性差異(P＜0.05)，而且中等劑量的效果最好，這表明可能存在抑制腫瘤生長(zhǎng)的最佳濃度。另外，鷹嘴豆肽低、中、高劑量組的抑瘤率分別達(dá)到36.06%、53.37%、49.04%，但是均低于陽(yáng)性對(duì)照組。

胸腺屬于中樞免疫器官，是T淋巴細(xì)胞發(fā)育和成熟的場(chǎng)所。脾臟是最大的淋巴器官，含有大量的B淋巴細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，也是重要的外周免疫器官之一，另外也是對(duì)血源性抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答的場(chǎng)所，可以通過(guò)多種機(jī)制發(fā)揮抗腫瘤作用。當(dāng)受到腫瘤抗原刺激后，B及T淋巴細(xì)胞經(jīng)克隆擴(kuò)增，數(shù)目明顯增多，致B及T淋巴細(xì)胞區(qū)體積擴(kuò)大，這些免疫器官的體積和質(zhì)量亦相應(yīng)的增大。B淋巴細(xì)胞可以轉(zhuǎn)化為漿細(xì)胞，繼而分泌特異性抗腫瘤的免疫球蛋白，T淋巴細(xì)胞可以直接參與細(xì)胞免疫，并對(duì)外周血中T細(xì)胞亞群的分布有重要調(diào)節(jié)作用。因此，胸腺指數(shù)和脾指數(shù)可直接反應(yīng)機(jī)體的免疫水平。鷹嘴豆肽各組與腫瘤對(duì)照組相比，脾臟指數(shù)顯著升高(P＜0.05)，胸腺指數(shù)也有略微升高。而在環(huán)磷酰胺的治療過(guò)程中，脾指數(shù)和胸腺指數(shù)均下降，表明環(huán)磷酰胺在治療過(guò)程中，雖然有較高的抑瘤率，但是對(duì)免疫器官造成了一定損傷，致使脾臟和胸腺明顯萎縮，導(dǎo)致免疫功能降低；而鷹嘴豆低、中、高3個(gè)劑量組，在抑制腫瘤的過(guò)程中均能促進(jìn)脾臟和胸腺的生長(zhǎng)，以提高機(jī)體的免疫功能。

2.4 鷹嘴豆肽對(duì)H22肝癌小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響

二硝基氟苯(DNFB)是一種半抗原，與皮膚蛋白結(jié)合形成抗原，能刺激T淋巴細(xì)胞增殖成致敏淋巴細(xì)胞，再次攻擊后會(huì)誘發(fā)遲發(fā)型超敏反應(yīng)。

表3 鷹嘴豆肽對(duì)H22小鼠遲發(fā)型免疫(DTH)的影響(±s，n=10)Table 3 Effect of chickpea peptides on DTH of H22-bearing mice (±s，n=10)

表3 鷹嘴豆肽對(duì)H22小鼠遲發(fā)型免疫(DTH)的影響(±s，n=10)Table 3 Effect of chickpea peptides on DTH of H22-bearing mice (±s，n=10)

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由表3可知，鷹嘴豆肽各劑量組均提高了肝癌小鼠DTH反應(yīng)強(qiáng)度，與腫瘤對(duì)照組相比均有顯著性差異(P＜0.05)。其中，鷹嘴豆肽中劑量組效果最明顯，其左右耳質(zhì)量差為腫瘤對(duì)照組的1.7倍。

2.5 脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)

表4 鷹嘴豆肽對(duì)H22小鼠脾淋巴細(xì)胞的影響(χˉ±s，n=10) Table 4 Effect of chickpea peptides on splenic lymphocytes in H22-bearing mice (χˉ±s，n=10)

由表4可知，脾淋巴細(xì)胞的增殖能力為：CPe-HD＞PC＞CPe-MD＞CPe-LD＞TC，說(shuō)明鷹嘴豆肽能顯著提高脾淋巴細(xì)胞增殖能力，而且鷹嘴豆肽提高脾淋巴細(xì)胞的增殖能力呈明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系，隨著劑量的增加，脾淋巴細(xì)胞的增殖能力逐漸增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)中，相對(duì)于鷹嘴豆肽低劑量組，高劑量鷹嘴豆肽可將脾淋巴細(xì)胞增殖能力提高1.7倍。說(shuō)明鷹嘴豆肽高劑量組可以顯著提高H22肝癌小鼠的免疫功能。

2.6 碳粒廓清實(shí)驗(yàn)

機(jī)體免疫系統(tǒng)在抗腫瘤方面起著非常重要的作用，巨噬細(xì)胞是體內(nèi)抗感染和抗腫瘤的主要效應(yīng)細(xì)胞。當(dāng)巨噬細(xì)胞受到異物、腫瘤等激活后可直接殺傷腫瘤細(xì)胞，而不傷害正常細(xì)胞，還可分泌NO、TNF-α等細(xì)胞因子發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)并參與免疫調(diào)節(jié)[16]。一定濃度的印度墨汁經(jīng)小鼠尾靜脈注射進(jìn)入血液，經(jīng)血流帶到肝、脾等處，而被這些部位的巨噬細(xì)胞及整個(gè)單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的其他巨噬細(xì)胞迅速吞噬而從血液中廓清，在一定濃度范圍內(nèi)，碳粒的清除速率與其劑量成指數(shù)函數(shù)關(guān)系。因此，可借助測(cè)定血液中碳粒的消失速度來(lái)反映單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬異物的能力。

表5 鷹嘴豆肽對(duì)H22小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響(±s，n=10)Table 5 Effect of chickpea peptides on peritoneal macrophage phagocytotic activity in H22-bearing mices，n=10)

表5 鷹嘴豆肽對(duì)H22小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響(±s，n=10)Table 5 Effect of chickpea peptides on peritoneal macrophage phagocytotic activity in H22-bearing mices，n=10)

分組鷹嘴豆肽劑量/(mg/(kg·d))腹腔巨噬細(xì)胞吞噬指數(shù)TC3.082±0.200 PC204.007±0.310* CPe-LD503.919±0.658* CPe-MD1003.413±0.421 CPe-HD2004.258±0.581*

由表5可知，鷹嘴豆肽對(duì)H22小鼠巨噬細(xì)胞吞噬能力的影響：CPe-HD＞PC＞CPe-LD＞CPe-MD＞TC，鷹嘴豆肽高劑量組和低劑量組都與腫瘤對(duì)照組有顯著性差異(P＜0.05)，其中鷹嘴豆肽高劑量組效果最好，巨噬細(xì)胞的吞噬能力約為腫瘤對(duì)照組的1.4倍，而且高于化療藥物環(huán)磷酰胺的作用效果。表明鷹嘴豆肽對(duì)H22小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力有促進(jìn)作用，可以促進(jìn)H22小鼠非特異性免疫功能，從而發(fā)揮抗腫瘤的作用。

3 討 論

免疫治療在抗腫瘤過(guò)程中有著特殊的地位和作用。一般認(rèn)為，機(jī)體免疫機(jī)能的降低有利于腫瘤的形成和發(fā)展，而癌癥患者常有免疫機(jī)能受抑制及免疫器官萎縮[17]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)在惡性腫瘤的防治過(guò)程中，把增強(qiáng)機(jī)體免疫功能作為非常重要的防病策略和治病目標(biāo)。但是，化療藥物如本實(shí)驗(yàn)中環(huán)磷酰胺的使用，引起了機(jī)體免疫機(jī)能嚴(yán)重下降，脾臟明顯萎縮，胸腺指數(shù)也較腫瘤對(duì)照組有所下降。

本研究中，鷹嘴豆肽對(duì)H22肝癌小鼠的活動(dòng)力、反應(yīng)能力以及被毛的色澤和濃密情況等有一定的改善作用。與腫瘤對(duì)照組相比，鷹嘴豆肽低、中、高3個(gè)劑量組均可以顯著抑制H22腫瘤的生長(zhǎng)，與陽(yáng)性對(duì)照組相比，沒有阻礙小鼠體質(zhì)量的增長(zhǎng)，對(duì)免疫器官也沒有造成損傷，并在一定程度上促進(jìn)了免疫器官脾臟和胸腺的增長(zhǎng)。鷹嘴豆肽各劑量組均提高了肝癌小鼠DTH反應(yīng)強(qiáng)度，與腫瘤對(duì)照組相比差異顯著；同時(shí)，鷹嘴豆肽亦能顯著提高脾淋巴細(xì)胞的增殖能力，增強(qiáng)肝癌小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬能力，鷹嘴豆肽低劑量組和高劑量組與腫瘤對(duì)照組相比差異顯著。

綜上所述，鷹嘴豆肽對(duì)H22小鼠的細(xì)胞免疫功能、非特異性免疫功能均有一定的促進(jìn)作用，提示鷹嘴豆肽可作用于免疫系統(tǒng)的多個(gè)環(huán)節(jié)，明顯改善機(jī)體的免疫功能，逆轉(zhuǎn)因腫瘤生長(zhǎng)而造成的免疫抑制狀態(tài)，這可能是其抑制H22腫瘤生長(zhǎng)的重要機(jī)制之一。因此可以認(rèn)為，鷹嘴豆肽在發(fā)揮抑癌作用時(shí)，并不損壞機(jī)體的免疫功能，可以作為一種天然的抗腫瘤成分。另外，鷹嘴豆肽3個(gè)劑量組均有不同程度的調(diào)節(jié)H22小鼠的免疫功能，但是免疫功能并沒有隨著鷹嘴豆肽劑量的增加而增加，高劑量時(shí)效果并不一定比低、中劑量好，因此是否更大劑量的使用會(huì)出現(xiàn)免疫抑制或雙向調(diào)節(jié)的作用，其關(guān)系機(jī)制還需進(jìn)一步研究闡明。

近些年，國(guó)內(nèi)外對(duì)鷹嘴豆肽的研究已經(jīng)非常多，但都集中在體外實(shí)驗(yàn)，包括鷹嘴豆肽的分離純化[14]、抗菌能力[18]、抗氧化活性評(píng)價(jià)[19]、ACE抑制肽[20]等。本研究是利用動(dòng)物模型對(duì)鷹嘴豆肽的抗腫瘤作用進(jìn)行體內(nèi)評(píng)價(jià)，具有較高的說(shuō)服力。為進(jìn)一步將鷹嘴豆肽開發(fā)成為一種新型的功能性基料或食品添加劑應(yīng)用于食品工業(yè)和醫(yī)藥行業(yè)奠定了基礎(chǔ)。

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Antitumor and Immune-Enhancing Activity of Chickpea Peptides in Hepatoma H22-Bearing Mice

GAO Jie，WANG Hua，KOU Xiao-hong，XUE Zhao-hui*
(Department of Food Science, School of Chemical Engineering and Technology, Tianjin University, Tianjin 300072, China)

Objective: To find out whether chickpea peptides has antitumor and immune-enhancing activity in hepatoma H22-bearing mice. Methods: KM mice were randomly divided to normal control group, positive control group (PC), tumor control group and chickpea peptide groups at the doses of 50, 100 mg/(kg·d) and 200 mg/(kg·d). The H22-bearing mice were treated with chickpea peptide and Cy by gavage at the volume of 0.2 mL/mouse per day for 10 consecutive days. Distilled water was used for the normal control group. The body weight, tumor growth, tumor inhibitory rate, thymus index, spleen index, cellmediated immune functions including lymphocyte proliferation, peritoneal macrophage phagocytosis and splenic lymphocytes were detected at 24 h after the last administration. Results: An inhibitory tend of tumor growth was observed in the chickpea peptide group. Compared with the tumor control group, a significant increase in relative spleen weight, delayed-type hypersensitivity (DTH), peritoneal macrophage phagocytotic activity and splenic lymphocyte in the chickpea groups was also observed. However, no dose-dependent effect was achieved. Conclusion: Peptides derived from chickpea have anti-tumor activity probably by enhancing immune functions in hepatoma H22-bearing mice. The detailed mechanism remains to be further studied.

chickpea；anti-tumor；hepatoma-H22；immune function

TS255.1

A

1002-6630(2012)03-0215-05

2011-03-07

天津大學(xué)創(chuàng)新基金項(xiàng)目(2010XJ-0216）

高捷(1986—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物化學(xué)及活性。E-mail：gaojie_950814@163.com

*通信作者：薛照輝(1973—），男，副教授，博士，研究方向?yàn)樘烊划a(chǎn)物化學(xué)及活性。E-mail：zhhxue@tju.edu.cn