協(xié)日音?湯質(zhì)量標準研究

李郁英高 鋼徐 華

協(xié)日音?湯質(zhì)量標準研究

李郁英1高 鋼2徐 華2

目的建立協(xié)日音?湯的質(zhì)量標準。方法采用薄層色譜法鑒別制劑中的苦地丁，采用高效液相色譜法測定處方中秦艽的成分龍膽苦苷。結(jié)果采用薄層色譜法鑒別制劑中的苦地?。徊捎酶咝б合嗌V法測定龍膽苦苷，在0.2104～0.7364μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=12838X+18492，r=1；平均加樣回收率為99.07%（n=9，RSD=0.98%）。結(jié)論方法可行，重現(xiàn)性好，能準確監(jiān)控該制劑的質(zhì)量。

苦地丁；協(xié)日音?湯；龍膽苦苷

協(xié)日音?湯為蒙醫(yī)院常用的蒙藥制劑，由苦地丁、秦艽、麥冬等五味藥組成，治療由“協(xié)日”引起的各種黃疸病。為有效的控制該制劑的質(zhì)量，本試驗采用TLC法對處方中的苦地丁進行定性鑒別；采用 HPLC，以龍膽苦苷為定量指標，建立處方中龍膽苦苷的測定方法。該標準操作簡單、方法可行，重現(xiàn)性好，能準確監(jiān)控該制劑的質(zhì)量。

1 儀器與材料

島津LC-10ATvp泵，SPD-10Avp型檢測器，島津工作站，惠普上分6010紫外分光光度儀。

苦地丁對照藥材（批號：990-9401）、龍膽苦苷（110770-200308，供含量測定用）購自中國藥品生物制品檢定所。協(xié)日音?湯（批號：090512、090620、090726）由包頭市蒙中醫(yī)院提供；模擬樣（20091120）自制；甲醇為色譜純，水為高純水，其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1苦地丁薄層色譜鑒別

2.1.1樣品溶液制備取樣品 5g，加丙酮 30ml，超聲（150W，40KHZ）處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為樣品溶液。

2.1.2陰性對照溶液的制備取同工藝制備的不含苦地丁的樣品4.5g，加丙酮30ml，超聲（150W，40KHZ）處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為陰性對照溶液。

2.1.3苦地丁對照藥材溶液的制備取苦地丁藥材1g，加丙酮30ml，超聲（150W，40KHZ）處理30min，濾過，濾液蒸干，殘渣加丙酮1ml使溶解，作為對照藥材溶液。

2.1.4樣品測定吸取上述三種溶液各10μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為粘合劑的硅膠G簿層板上，以環(huán)己烷—丙酮（9:1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（254nm）下檢視，見圖1、2。

圖1 苦地丁薄層色譜鑒別方法學(xué)研究

圖2 三批樣品的薄層色譜鑒別

2.1.5試驗結(jié)果在色譜中，樣品溶液在與苦地丁對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。而陰性對照溶液在此處未出現(xiàn)斑點；故此方法專屬性強，可作苦地丁的鑒別方法。

2.2龍膽苦苷的HPLC測定

2.2.1色譜柱十八烷基硅烷鍵合硅膠柱 Agilent Tc-C18（5μ，4.6×250mm）；流動相：甲醇-水（30:70）；檢測波長：254.0nm；柱溫：25℃；流速：1ml/min；理論板數(shù)按龍膽苦苷峰計算應(yīng)不低于3000。

2.2.2提取溶劑及提取效率的考察

2.2.2.1提取溶劑的選擇參照《中國藥典》2005年版一部“秦艽”項下的龍膽苦苷含量測定方法，選用甲醇作為提取溶劑。

2.2.2.2提取效率的考察以甲醇作為提取溶劑進行超聲提取（功率300W，頻率50kHz），為保證被測成分提取完全，實驗中考察了超聲提取 20min、30min和40min不同超聲提取時間對提取效率的影響，結(jié)果：三份樣品分別超聲處理（功率 300W，頻率50KHz）30、40、50min后，含量基本一致，含量分別為1.055、1.104、1.099。

2.2.3對照品溶液的制備取龍膽苦苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，作為對照品溶液。

2.2.4樣品溶液的制備取樣品約2.5g，精密稱定，加入甲醇20ml，超聲（300W，40KHZ）處理30min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液。

2.2.5陰性對照溶液制備取同工藝制備的不含苦地丁的樣品約2.3g，精密稱定，加入甲醇20ml，超聲（300W，40KHZ）處理30min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為陰性對照溶液。

2.2.6測定分別精密吸取對照品溶液、陰性對照溶液、樣品溶液各10ul，分別注入液相色譜儀，測得結(jié)果為：陰性對照色譜圖中在與龍膽苦苷對照品以及供試品色譜圖相對應(yīng)的保留時間處無色譜峰出現(xiàn)，表明其他組分龍膽苦苷的測定無干擾。

2.2.7線性關(guān)系考察取龍膽苦苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，精密量取 0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7ml，分別置 5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密吸取10μl注入色譜儀測定。結(jié)果：在0.2104～0.7364μg濃度范圍內(nèi)，濃度與檢測峰面積呈線性?；貧w方程為：Y=12838X+18492，r=1。

2.2.8穩(wěn)定性試驗取同一份供試品溶液，分別在0h、4h、6h、8h、12h進行測定，其檢測峰面積的RSD為0.41%，說明龍膽苦苷在12h內(nèi)的峰面積分值基本穩(wěn)定不變。

2.2.9精密度取樣品（批號：090512）6份，每份約2.5g，精密稱定，加入甲醇50ml，超聲（300W，40KHZ）處理30min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液；另精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液；分別精密吸取10ul，注入液相色譜儀，測定。結(jié)果：6次測定的平均值為1.101mg/g，RSD為0.26%。

2.2.10加樣回收率測定取樣品（批號：090512，含量為1.101mg/g）約0.6g、0.7g、0.8g各三份，精密稱定，分別精密加入龍膽苦苷對照品，加入甲醇25ml，超聲（300W，40KHZ）處理30min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液；另精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液；分別精密吸取10ul，注入液相色譜儀，測定。結(jié)果：平均回收率為99.07%。RSD為0.98%。

表1 加樣回收率測定結(jié)果

2.2.11樣品含量測定取樣品約2.5g，精密稱定，加入甲醇50ml，超聲（300W，40KHZ）處理30min，取出，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為樣品溶液；另精密稱取龍膽苦苷對照品適量，加甲醇制成每 1ml含0.05mg的溶液，作為對照品溶液；分別精密吸取10ul，注入液相色譜儀，測定。

3 討論

在苦地丁的薄層色中，展開后立刻置紫外光燈（254nm）下檢視，斑點顯藍色，放置一定時間后顯黃色。參照中國藥典2005年版，采用HPLC法測定樣品中的龍膽苦苷；藥典的方法是對樣品進行熱提取而本法采用超聲處理，經(jīng)兩種方法比較試驗，測得結(jié)果基本一致。該方法操作簡單，重現(xiàn)性好，能準確監(jiān)控該制劑的質(zhì)量。

[1]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2005:苦地丁.

[2]中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所.中藥志[M].第四冊.北京:人民衛(wèi)生出版社,1988:22.

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[4]國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2005:秦艽.

[5]呂惠子,崔興日,王廣錄.苦地丁的化學(xué)成分與藥理[J].中國野生植物資源,2002,21(4):54-55.

[6]吳青業(yè),關(guān)業(yè)枝,劉嬋,等.苦地丁的提取工藝[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2010,30(8):1969-1970.

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[8]羅晨曲,呂情花,彭建,等.HPLC法測定強肝膠囊中龍膽苦苷的含量[J].中國藥房,2008,19(36):2849-2850.

1 包頭醫(yī)學(xué)院職業(yè)技術(shù)學(xué)院，內(nèi)蒙古包頭 010030

2 包頭市藥品檢驗所，內(nèi)蒙古包頭 014030