大鯢人工催產(chǎn)與孵化技術(shù)研究

張紅星 沈建忠 趙虎 等

摘要：對(duì)大鯢（Ａｎｄｒｉａｓ ｄａｖｉｄｉａｎｕｓ）的人工催產(chǎn)和孵化技術(shù)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，ＬＲＨ－Ａ２和ＨＣＧ催產(chǎn)效果較好，經(jīng)人為調(diào)控可使大鯢性腺成熟度狀態(tài)良好；人工孵化時(shí)通過(guò)嚴(yán)格控制水溫１８～２１ ℃、溶氧保持在５ ｍｇ／Ｌ以上、光照度３００ ｌｘ以下，給予適當(dāng)?shù)牧魉碳ぃ趸士蛇_(dá)７６．４％。

關(guān)鍵詞：大鯢（Ａｎｄｒｉａｓ ｄａｖｉｄｉａｎｕｓ）；催產(chǎn)；受精；孵化

中圖分類(lèi)號(hào)：Ｓ９６１．２；Ｓ９６６．６文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０12）15－3282-02

Ｓｔｕｄｙ ｏｎ Ｓｐａｗｎｉｎｇ Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｉａｎｔ Ｓａｌａｍａｎｄｅｒ（Ａｎｄｒｉａｓ ｄａｖｉｄｉａｎｕｓ）

ＺＨＡＮＧ Ｈｏｎｇ－ｘｉｎｇ１，ＳＨＥＮ Ｊｉａｎ－ｚｈｏｎｇ２，ＺＨＡＯ Ｈｕ１，ＷＡＮＧ Ｑｉ－ｊｕｎ１，ＷＡＮＧ Ｚｈｏｎｇ－ｑｉａｎ３

（１． Ｓｈａａｎｘｉ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｚｏｏｌｏｇｙ， Ｘｉａｎ ７１００３２， Ｃｈｉｎａ； ２． Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆＦｉｓｈｅｒｉｅｓ， Ｈｕａｚｈｏｎｇ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｗｕｈａｎ ４３００７０，Ｃｈｉｎａ；

３． Ｓｈａａｎｘｉ Ｆｉｓｈｅｒｉｅｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｘｉａｎ ７１００８６，Ｃｈｉｎａ）

Ａｂｓｔｒａｃｔ： Ｔｈe ｓｐａｗｎｉｎｇ ａｎｄ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ｏｆ ｇｉａｎｔ ｓａｌａｍａｎｄｅｒｓ（Ａｎｄｒｉａｓ ｄａｖｉｄｉａｎｕｓ） was studied． Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗed ｔｈａｔ ＬＲＨ－Ａ２ ａｎｄ ＨＣＧ ｏｘｙｔｏｃｉｎ ｗｅｒｅ ｂｅｔｔｅｒ spawning agents. Bｙ ｈｕｍａｎ ｃｏｎｔｒｏｌ， ｇｏｎａｄ ｍａｔｕｒｉｔｉｅｓ ｏｆ ｇｉａｎｔ ｓａｌａｍａｎｄｅｒｓ would be at ｉｄｅａｌ ｓｔａｔｅ． Ｂｙ ｃｏｎｔｒｏｌｉｎｇ ｗａｔｅｒ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ at １８～２１ ℃， ｄｉｓｓｏｌｖｅｄ ｏｘｙｇｅｎ higher than ５ ｍｇ／Ｌ， ｌｉｇｈｔ ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ at ３００ ｌｘ ａｎｄ ｗａｔｅｒ ｆｌｏｗ， ｔｈｅ ｈａｔｃｈｉｎｇ ｒａｔｅ could be ｕｐ ｔｏ ７６．４％ by ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ．

Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： gｉａｎｔ ｓａｌａｍａｎｄｅｒ（Ａｎｄｒｉａｓ ｄａｖｉｄｉａｎｕｓ）； ｓｐａｗｎｉｎｇ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ； ｆｅｒｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ； ｉｎｃｕｂａｔｉｏｎ

大鯢（Ａｎｄｒｉａｓ ｄａｖｉｄｉａｎｕｓ）的產(chǎn)卵季節(jié)為７～９月，屬一年一次產(chǎn)卵類(lèi)型［１，２］。在親鯢培育池中培育出雌、雄性腺同步發(fā)育成熟的群體，通過(guò)人工催產(chǎn)和孵化，可以有效提高大鯢的催產(chǎn)率、受精率和孵化率，從而促進(jìn)大鯢規(guī)?；B(yǎng)殖的健康發(fā)展［３-6］。本試驗(yàn)在人工養(yǎng)殖條件下進(jìn)行了大鯢的人工催產(chǎn)和孵化技術(shù)研究，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

１材料與方法

１．１親鯢來(lái)源

試驗(yàn)用親鯢由陜西省寧陜縣龍泉大鯢馴養(yǎng)繁育場(chǎng)提供，選擇性腺成熟度較好的雌鯢１７尾、雄鯢１５尾。

１．２試驗(yàn)條件

試驗(yàn)于2008年8月在陜西省寧陜縣龍泉大鯢馴養(yǎng)繁育場(chǎng)進(jìn)行。繁育場(chǎng)海拔８５６ ｍ，泉水流量０．３５ ｍ３／ｓ，水質(zhì)清新無(wú)污染，溶氧８ ｍｇ／Ｌ，ｐＨ ７．３２，試驗(yàn)期間水溫１９．５～２１．６ ℃。大鯢親本培育池規(guī)格１．２ ｍ×１．５ ｍ×１．０ ｍ，進(jìn)排水方便。繁育場(chǎng)具備孵化室，進(jìn)排水能控制，水、電條件能滿足孵化要求。選擇活爽、潔凈的水源，孵化用水經(jīng)沙棒濾水器過(guò)濾、紫外線 殺菌水處理器殺菌（或用臭氧機(jī)制臭氧殺菌）后注入孵化槽。配備空壓泵、增氧氣泡石和電控調(diào)溫器、孵化槽、孵化篩、揀卵器、弱光源燈等。

１．３雌雄鑒別與性腺成熟度判斷

親鯢的性別在非繁殖期從外形上較難區(qū)別，但是在繁殖期可通過(guò)觀察泄殖孔和腹褶形態(tài)特征進(jìn)行區(qū)分。雄性親鯢泄殖孔橢圓形，邊緣有一排外突的小白點(diǎn)，外圍有一橢圓形的隆起；雌性親鯢泄殖孔近圓形，略向內(nèi)凹，邊緣平滑，無(wú)小白點(diǎn)和橢圓形隆起，腹部膨大而松軟，腹褶短小［7］。

大鯢親體性腺成熟度直接影響著催產(chǎn)率的高低與出苗的成敗。采用經(jīng)驗(yàn)鑒別與形態(tài)檢查相結(jié)合的方法，依據(jù)親鯢腹褶的形態(tài)、泄殖孔內(nèi)凹程度、腹部松軟程度以及活動(dòng)姿態(tài)而定。在繁殖季節(jié)，雌鯢泄殖孔充血，腹部膨大而柔軟、富有彈性；雄鯢泄殖孔邊緣有一排外突的小白點(diǎn)，外圍有一橢圓形隆起。

１．４精液常規(guī)檢測(cè)

用量筒測(cè)量精液量，用精密ｐＨ試紙（測(cè)量范圍６．４～８．０）測(cè)定精液ｐＨ值。將精液用３％氯化鈉溶液稀釋?zhuān)当叮陲@微鏡下用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，測(cè)定精液的密度。

精子的運(yùn)動(dòng)有３種類(lèi)型，即直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)、旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)和振擺運(yùn)動(dòng)，在顯微鏡視野中觀察精子的運(yùn)動(dòng)，估測(cè)直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)精子數(shù)占精子總數(shù)的百分比，根據(jù)直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子比例評(píng)價(jià)精子活力。采用十級(jí)制評(píng)定精子的活力等級(jí)，直線前進(jìn)運(yùn)動(dòng)的精子比例為１００％者評(píng)定為１．０級(jí)，９０％者評(píng)定為０．９級(jí)，以此類(lèi)推［８］。

１．５人工催產(chǎn)與授精

催產(chǎn)藥物選用ＬＲＨ－Ａ２和ＨＣＧ，采用一次性腹腔注射，從親鯢背部（靠后）肋間進(jìn)針０．５～０．８ cm，注射劑量為ＬＲＨ－Ａ２ ２～４ μｇ／ｋｇ，ＨＣＧ ２００～１ ０００ ＩＵ／ｋｇ，雌雄注射相同劑量。

人工授精采用干濕法。在室內(nèi)操作控制光照，當(dāng)發(fā)現(xiàn)雌鯢產(chǎn)出卵帶后，一人立即用手托住卵帶放入盆中，另一人用手輕擠雄鯢腹部，用小燒杯在泄殖孔處接收精液，將采集的精液加入到卵帶盆中，加入精子營(yíng)養(yǎng)液，輕輕搖晃卵帶盆，使卵受精均勻。１５ ｍｉｎ后，將卵帶盆里的水更換２次，然后將卵帶放入孵化篩內(nèi)進(jìn)行孵化。

１．６人工孵化

受精卵的孵化采用流水孵化法，采用槽式孵化篩，水體經(jīng)紫外線殺菌水處理器消毒、多級(jí)凈水增氧，溶氧保持在5 mg/L以上；通過(guò)電動(dòng)調(diào)溫器嚴(yán)格控制水溫１８～２１ ℃，水流量０．０３ ｍ３／ｍｉｎ，光照度３００ ｌｘ以下，適時(shí)翻卵和揀卵，以滿足卵子發(fā)育的生理?xiàng)l件。每天定時(shí)用溫度計(jì)測(cè)量水溫，檢查受精卵，及時(shí)剔除死卵并做好記錄。

２結(jié)果與分析

２．１催產(chǎn)效應(yīng)

親體一次性腹腔注射ＬＲＨ－Ａ２和ＨＣＧ后，產(chǎn)卵效應(yīng)時(shí)間為４～１２ ｄ，其中最佳時(shí)間為４～６ ｄ。催產(chǎn)后親鯢表現(xiàn)明顯的性活動(dòng)行為，產(chǎn)卵和受精及時(shí)，從而提高了繁育率。

２．２大鯢精液常規(guī)檢測(cè)

對(duì)該場(chǎng)６尾性成熟并參與繁殖的雄性親鯢進(jìn)行精液常規(guī)檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表１。由表１可知，親鯢體重均達(dá)到參繁要求，排精量在１２．８～６４．１ ｍＬ，相對(duì)排精量為２．１～１２．１ ｍＬ／ｋｇ，精液呈中性偏酸，密度（２．１５～１０．７５）×１０６個(gè)／ｍＬ，精子活力在０．７級(jí)以上，達(dá)到受精要求。

２．３參繁情況

１７尾雌鯢有１４尾產(chǎn)卵，雌性親鯢的參繁率為８２．４％；１５尾雄鯢性腺全部發(fā)育成熟，其中有２尾未經(jīng)催情就能多次擠出乳白色優(yōu)質(zhì)精液，經(jīng)鏡檢精子活力良好。

２．４產(chǎn)卵量與受精率

２００８年８月，產(chǎn)卵９ ３３５粒；人工授精采用干濕法，獲受精卵８ ４９５粒，卵的受精率達(dá)９１．０％。在孵化室內(nèi)精心孵化，孵化出苗６ ４９１尾，出苗率達(dá) ７６．４％。

３小結(jié)與討論

３．１影響催產(chǎn)的因素

催產(chǎn)是輔助生殖途徑中的重要環(huán)節(jié)，催產(chǎn)效果的好壞直接影響到子代的成活率和發(fā)育狀況。影響催產(chǎn)的因素包括外在因素和內(nèi)在因素，其中外在因素有水質(zhì)、水溫、水流量、催產(chǎn)劑的種類(lèi)和劑量、注射次數(shù)等，內(nèi)在因素有親鯢的年齡和成熟度等。內(nèi)在因素是主因，外在因素是輔因，外在因素要配合內(nèi)在因素方能到達(dá)良好的催產(chǎn)效果。水質(zhì)好（溶氧量高、濁度低）、水溫適宜（１８～２１ ℃）、有流水刺激時(shí)效應(yīng)時(shí)間會(huì)明顯縮短。親鯢一般達(dá)到５～６齡即可開(kāi)始參繁，成熟度好的親鯢催產(chǎn)后效應(yīng)時(shí)間短。根據(jù)親鯢發(fā)育狀況，選擇適合的催產(chǎn)劑、注射劑量和注射次數(shù)均可縮短效應(yīng)時(shí)間。經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期試驗(yàn)總結(jié)，ＬＲＨ－Ａ２和ＨＣＧ對(duì)大鯢催產(chǎn)效果較好，經(jīng)濟(jì)實(shí)用。

３．２精液指標(biāo)方面

大鯢精液常規(guī)指標(biāo)測(cè)定表明，相對(duì)排精量最多可達(dá)１２．１ ｍＬ／ｋｇ。原因可以歸結(jié)為人工飼養(yǎng)環(huán)境良好、營(yíng)養(yǎng)豐富，高質(zhì)量的精液對(duì)人工授精的成功具有重要意義。精液密度最高可達(dá)１．０７５×１０７個(gè)／ｍＬ，精液活力最高可達(dá)０．9級(jí)，該數(shù)據(jù)與劉鑒毅等［9］和李駿珉等［１０］的報(bào)道有一定差異，產(chǎn)生該差異的原因可能與親鯢的營(yíng)養(yǎng)水平和養(yǎng)殖環(huán)境狀況不同有關(guān)。

３．３人工孵化方面

在人工孵化過(guò)程中水溫對(duì)孵化影響極大。水溫１８～２１ ℃，孵化期為２８～３５ ｄ；水溫１６～１８ ℃，孵化期為３５～４０ ｄ。日溫差變幅不宜超過(guò)１．５ ℃。孵化水溫超過(guò)２３ ℃，則易造成胚體死亡或產(chǎn)出畸形苗。因此，適宜的孵化水溫為１８～２１ ℃。水中溶氧保持在５ ｍｇ／Ｌ以上，嚴(yán)格控制光照在３００ ｌｘ以下，水流量在0.03 m3/min，保持卵的靜態(tài)翻（滾）動(dòng)。嚴(yán)防卵體感染水霉及發(fā)生胚胎“貼殼”死亡，若發(fā)現(xiàn)卵或胚胎停止發(fā)育而死亡應(yīng)立即剔除。

本試驗(yàn)是在規(guī)?；B(yǎng)殖情況下對(duì)大鯢人工催產(chǎn)與孵化技術(shù)的一次驗(yàn)證，但關(guān)于親鯢的選配、受精及胚胎發(fā)育等方面還有待進(jìn)一步的探討和研究。

參考文獻(xiàn)：

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［4］ 李培青，相學(xué)軍，朱必才．中國(guó)大鯢生殖激素的初步研究［Ｊ］．生物學(xué)雜志，２００８，２５（３）：３０－３２．

［5］ 王海文，卓君華，歐東升．促使雌雄大鯢性同步發(fā)育技術(shù)［Ｊ］．水產(chǎn)養(yǎng)殖，２００９（１）：８－１０．

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［7］ 陳云祥，陽(yáng)愛(ài)生，江輝，等． 大鯢性腺成熟度的外部感官鑒別［Ｊ］．水利漁業(yè)，２００６，２６（６）：５２．

［８］ 桑潤(rùn)滋．動(dòng)物繁殖生物技術(shù)［Ｍ］． 第二版． 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，２００２．

［９］ 劉鑒毅，肖漢兵，楊焱清，等．大鯢成熟精、卵的形態(tài)學(xué)觀察及受精卵孵化中的形態(tài)變化［Ｊ］． 淡水漁業(yè)，１９９９，２９（３）：６－９．

［１０］ 李駿珉，方樹(shù)淼，范維端，等．大鯢的自然受精試驗(yàn)［Ｊ］． 四川動(dòng)物，２００４，２３（３）：２９６－２９７．