衢州地區(qū)宮頸病變患者HPV感染分子流行病學(xué)分析

徐小敏 余曉 夏利花

[摘要] 目的 分析衢州地區(qū)1 280例宮頸病變女性中人乳頭瘤病毒（human papillomavirus， HPV）21種基因型的分子流行病學(xué)特點。方法 對衢州地區(qū)1 280例宮頸病變的女性進行21種HPV基因型分型檢測，比較不同基因型的流行病學(xué)特點。 結(jié)果 本組病例中總HPV感染率為55.31%（708/1280），其中HR-HPV感染率為38.83%，LR-HPV感染率為16.48%，高危型最常見類型為HPV 16、58、52，低危型最常見類型為HPV6、11。HR-HPV亞型中16、58、52是主要的獨立影響因素，而LR-HPV亞型中6、11是主要的影響因素。HPV單一型感染率11.1%，兩種亞型合并感染率42.9%，三種亞型合并感染率30.6%，四種及以上亞型合并感染率15.4%。不同年齡段感染HPV及感染HR-HPV的比例均有顯著性差異，最高為31～40歲組，分別占67.39%和50.58%，其次為21～30歲組，分別占61.75%和45.78%，HPV感染與宮頸病變程度呈正相關(guān)。 結(jié)論 本研究提供了衢州地區(qū)宮頸病變女性的21種HPV基因型分子流行病學(xué)資料，為本地區(qū)宮頸癌的臨床防治工作提供了可靠的科學(xué)依據(jù)，對本地區(qū)今后疫苗的開發(fā)、應(yīng)用也具有重要價值。

[關(guān)鍵詞] HPV；基因型；高危型；宮頸病變

[中圖分類號] R737.33[文獻標識碼] B[文章編號] 1673-9701（2012）32-0011-03

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，流行病學(xué)調(diào)查和分子生物學(xué)研究均已證實人乳頭瘤病毒（HPV）感染是引起宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌的主要原因，其中高危型HPV（HR-HPV）感染被認為是引起宮頸癌的最重要因素[1]。目前已發(fā)現(xiàn)的HPV亞型共有100多種，但能從被感染生殖道中分離出的亞型僅30多種[2]， 不同種族、不同地區(qū)、不同的研究人群其感染的HPV亞型分布也有所不同[3]。衢州市因地屬浙西山區(qū)，女性宮頸病變的發(fā)病率一直較高，已嚴重影響到本地區(qū)女性的生殖健康和生命安全，因此，我們對本地區(qū)宮頸病變的女性進行HPV感染分子流行病學(xué)調(diào)查，旨在為本地區(qū)HPV感染防治措施的制度以及今后HPV疫苗的使用提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2009年1月～2010年12月間來我院婦科門診就診時自愿做TCT宮頸疾病篩查的患者共17 578例，其中1 280例患者TCT診斷為不能明確意義的非典型鱗狀上皮細胞（ASCUS）及以上，對該部分患者均進行了HPV病毒檢測，并在陰道鏡下行多點活檢組織病理學(xué)確診，同時行相關(guān)流行病學(xué)調(diào)查分析。該組患者年齡 27～56歲，平均（43.8±21.4）歲，最終經(jīng)病理確診為炎癥846例、濕疣104例、CINⅠ237例、CINⅡ和Ⅲ共92例、鱗癌1例。

1.2 試劑和儀器

采用香港凱普生物科技有限公司生產(chǎn)的HPV核酸擴增分型檢測試劑盒（包括DNA提取試劑盒、PCR擴增試劑盒及雜交試劑盒）和醫(yī)用核酸分子快速雜交儀，美國ABI公司生產(chǎn)的ABI2720普通擴增儀和Beckman公司生產(chǎn)的DU 800紫外分光光度儀，同時對21種HPV亞型（包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68等15種高危亞型以及6、11、42、43、44、CP8304等6種低危亞型）進行檢測。

1.3 實驗方法

1.3.1 標本采集及保存用棉拭子輕輕擦凈宮頸口分泌物，再將專用拭子插入宮頸管內(nèi)，順時針旋轉(zhuǎn)4～5周以獲取足夠的上皮細胞樣本，取出后將其置入內(nèi)有專用細胞保存液的取樣管中，將宮頸刷柄折斷，旋緊瓶蓋，做好樣品編號及登記，4℃保存并于1周內(nèi)檢測。

1.3.2 PCR擴增及雜交檢測①DNA提?。何吮颈４嬉?.5 mL，離心1 min（14 000 r/min）后棄上清液，剩余標本用DNA試劑盒隨帶的提取液進行HPV-DNA提取。②PCR擴增：在ABI 2720擴增儀中進行PCR擴增，采用HPV通用引物，引物序列5端帶生物素標記。擴增過程：20℃ 10 min （UNG酶作用）、95℃ 9 min（預(yù)變性）、95℃ 20 s（變性）、55℃ 30 s（退火）、72℃ 30 s（延伸），共進行40個循環(huán)后行72℃ 5 min（再延伸）。③雜交：在醫(yī)用核酸分子快速雜交儀中進行雜交，具體操作按雜交試劑盒說明書進行。

1.4 結(jié)果判斷[4]

雜交膜共設(shè)24個點，Biotin和IC設(shè)為對照點，當兩點均為陽性則提示檢測結(jié)果可信，兩點全部或其中之一陰性均提示檢測結(jié)果不可信；當對照點正常時，其他點出現(xiàn)藍紫色圓點時其對應(yīng)的HPV亞型判定為陽性。任何一種HPV亞型陽性均判定為HPV感染，其中兩種或以上HPV亞型陽性均判定為HPV復(fù)合感染，HR-HPV陽性或HR-HPV和低危型HPV（LR-HPV）同時陽性者均判定為HR-HPV感染，僅LR-HPV陽性則判定為LR-HPV感染。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析，多因素分析采用Cox回歸分析，計數(shù)資料采用χ2檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 1 280例標本檢測結(jié)果

1 280例標本HPV總感染率55.31%（708/1 280），根據(jù)病毒致癌性大小將其分為低危型和高危型兩大類，實驗結(jié)果顯示HR-HPV感染率為38.83%（497/1280），LR-HPV感染率為16.48%（211/1280）。HR-HPV陽性率由高到低排序依次為：16、58、52、33、31、68、18、53、39、56、59、66、45、51、35；LR-HPV陽性率由高到低排序依次為：6、11、cp8304、42、43、44。對實驗數(shù)據(jù)進行Cox回歸分析，發(fā)現(xiàn)HR-HPV亞型中16、58、52是主要的獨立影響因素，而LR-HPV亞型中6、11是主要的影響因素，見表1、2。

2.2 不同年齡段HPV感染率構(gòu)成比

結(jié)果顯示，不同年齡段感染HPV及感染HR-HPV比例最高均為31～40歲組，分別占67.39%和50.58%，其次為21～30歲組，分別占61.75%和45.78%，LR-HPV感染比例最高為51～60歲組，占22.78%。總HPV感染率及HR-HPV感染率各組差異比較均有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=144.08、149.09，P < 0.01），LR-HPV感染率各組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=3.11，P > 0.05），見表3。

2.3 HPV多重感染分布

由于存在較多雙重及多重復(fù)合感染病例，故708例感染標本檢出各亞型陽性為1 001次，其中檢出HR-HPV陽性668次，檢出LR-HPV陽性333次，見表4。

2.4 不同宮頸病變HPV的感染率

由表5可知，宮頸炎、濕疣、CIN I 、CINⅡ、CINⅢ、鱗癌的HPV陽性的感染率分別為44.9%、65.3%、75.1%、84.7%、91.3%、100.0%，對實驗數(shù)據(jù)進行Cox回歸分析，結(jié)果顯示，HPV感染與宮頸病變程度呈正相關(guān)，宮頸病變程度越重，HPV的感染率也越高。

3 討論

根據(jù)世界衛(wèi)生組織調(diào)查統(tǒng)計，HPV感染目前已成為全球第一大傳染性疾病，性活躍期男女曾感染過HPV的比率為50%，到50歲時該比率上升到80%[5]。在大多數(shù)國家，HPV感染都極為常見，通常感染HPV后患者并無癥狀，但因其與宮頸癌的發(fā)生關(guān)系密切，因此已引起全世界的廣泛關(guān)注。目前己發(fā)現(xiàn)有30多種HPV亞型與女性下生殖道感染和宮頸病變有關(guān)，并根據(jù)病毒致癌性大小將其分為低危型和高危型兩大類。大量組織學(xué)及分子生物學(xué)研究均證實[6]，LR-HPV感染后一般不導(dǎo)致宮頸癌，通常僅表現(xiàn)為外陰及宮頸疣狀病變，而HR-HPV的DNA通?？烧系剿拗骰蚪M中，其持續(xù)感染是導(dǎo)致女性宮頸癌的最重要因素。由于HPV感染多為亞臨床性，肉眼難于識別[7]，且其致病性與基因型密切相關(guān)，因此對于HPV感染的高危人群定期進行HPV基因型檢測對宮頸癌的防治均具有重大意義。

目前認為，HPV亞型的分布具有地域性[8]，本方法所檢測的21種HPV亞型約占中國人群HPV感染的95%，為國內(nèi)HPV感染的主要基因型。本研究結(jié)果顯示，衢州地區(qū)宮頸病變女性中HPV總感染率和HR-HPV感染率均較高，分別達到55.31%和38.83%，在HPV感染病例中，HR-HPV感染的比例更是高達70.20%（497/708），因此提示在本地區(qū)發(fā)現(xiàn)宮頸病變的女性中進行HPV分型檢測極具必要性，通過篩查出HR-HPV感染患者，對其進行隨訪跟蹤，可有效進行宮頸癌變的預(yù)防并適時提前進行干預(yù)治療。同時該結(jié)果也顯示，本地區(qū)HR-HPV感染中以HPV16型占11.88%高居首位，其次為HPV58、52型（8.91%和7.97%），HPV18型并不常見，僅占2.5%；LR-HPV感染中以HPV6、11型（10.47%和9.84%）最多，因此，如果今后條件允許，現(xiàn)有的預(yù)防性兩價Cervarix疫苗和四價Gardasi1疫苗是否該在本地區(qū)推廣應(yīng)用尚有待探討。本研究中還發(fā)現(xiàn)，不同年齡段HPV感染率和HR-HPV感染率均以31～40歲組最高（67.39%和50.58%），其次為21～30歲組（61.75%和45.78%），各組間差異比較有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P < 0.01），而將21～30歲組及31～40歲組兩組感染HPV的人數(shù)和感染HR-HPV的人數(shù)相加，其感染率更是高達86.16%和91.75%，因此，顯示了HPV感染的年齡有高度集中的趨勢?？紤]到21～40歲年齡段為性活動非?；钴S期，推測其如此高的HPV感染率可能與性生活頻率及性伴侶數(shù)量有關(guān)，因此認為HPV感染與性行為因素有密切關(guān)聯(lián)；而該年齡段如此高的HR-HPV感染率，也提示著該人群罹患宮頸癌的高度危險性，因此建議本地區(qū)今后針對該年齡段人群進行宮頸疾病篩查時，將HPV分型檢測納入到初篩內(nèi)容中。另外，研究中我們也發(fā)現(xiàn)，不同宮頸疾病患者中HPV感染率及基因型分布也存在差異，今后將擴大樣本量繼續(xù)深入研究分析，探討各種HPV感染高危因素與本地區(qū)HPV感染率及基因型分布的相關(guān)性，為本地區(qū)女性宮頸疾病防治工作的開展提供有效幫助。

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（收稿日期：2012-08-02）