GnRH受體在人類子宮內(nèi)膜的表達及意義

謝鳳云，謝梅青

(1.珠海市婦幼保健院婦科，廣東 珠海 519000；2.廣州市中山大學附屬第二醫(yī)院婦科，廣東 廣州 510120)

促性腺激素釋放激素(Gonadotropin-releasing hormone，GnRH)由下丘腦弓狀核合成，經(jīng)過垂體門脈系統(tǒng)到達垂體前葉，與垂體前葉的促性腺激素細胞的胞膜受體(Gonadotropin-releasing hormone receptor，GnRH-R)結(jié)合，促進促性腺激素細胞合成并分泌促性腺激素(Gonadotropin)。GnRH-R屬G蛋白耦聯(lián)的膜受體，其分子結(jié)構(gòu)由327～328個氨基酸殘基組成，有7個跨膜結(jié)構(gòu)域。人類GnRH-R基因位于染色體4長臂l3.2～21.1區(qū)，含20～25 kb，是由3個外顯子和2個內(nèi)含子構(gòu)成的單拷貝基因[1]。GnRH與受體的結(jié)合具有高度特異性，根據(jù)GnRH對受體的親和力，GnRH分為三型：GnRH-Ⅰ、GnRH-Ⅱ及GnRH-Ⅲ，相應(yīng)地，GnRHR也分為三型?，F(xiàn)在已經(jīng)證實人類存在Gn-RHR-Ⅰ及GnRHR-Ⅱ，而GnRHR-Ⅲ尚未見報道在人類有表達[2]。繼1971年Schally和Guillemin等從豬和羊的下丘腦組織中分離純化了GnRH后，1973年Grant首先以氘標記的GnRH對垂體細胞膜上的GnRH-R的結(jié)合特性進行了研究，從此有關(guān)GnRH-R的研究開始迅速發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)，GnRH和GnRH-R除位于下丘腦垂體系統(tǒng)外，在機體的其他組織，尤其是生殖器官也有分布[3-4]。近年來有許多對人類不同類型子宮內(nèi)膜表達GnRH-R的研究報道，推測子宮內(nèi)膜GnRH和GnRH-R系統(tǒng)在調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜的自分泌或旁分泌中起重要作用，并參與子宮內(nèi)膜的增殖調(diào)節(jié)。

1 GnRH-R在正常子宮內(nèi)膜上的表達

Raga等[5]于1998年通過體外實驗首次報道GnRH和GnRH-R mRNA在生育年齡女性整個月經(jīng)周期的子宮內(nèi)膜上均有表達，GnRH mRNA表達的濃度在增殖期比在黃體期低，而無論在增殖期和黃體期的子宮內(nèi)膜上均可探及GnRH-R呈低水平。張一萍等[6]在蛋白水平檢測到正常子宮內(nèi)膜局部有GnRH的表達。2006年，岳瑛等[7]在研究GnRH-R mRNA在正常子宮內(nèi)膜及子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達時發(fā)現(xiàn)增生期及分泌期正常子宮內(nèi)膜組織的GnRH-R mRNA陽性表達率均為17%，在子宮內(nèi)膜腺癌組織中的表達率為40%，從而推測子宮內(nèi)膜GnRH-R可能參與激素調(diào)節(jié)以外的作用，如子宮內(nèi)膜的增殖調(diào)節(jié)，而不直接參與子宮內(nèi)膜的周期性變化調(diào)節(jié)。GnRH-R在正常子宮內(nèi)膜組織中有表達，在子宮內(nèi)膜局部亦存在GnRH核酸水平及蛋白水平的表達，說明GnRH除了主要作用于腦垂體的GnRH-R外，還直接作用于子宮內(nèi)膜，通過自分泌或旁分泌作用調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜功能[4]。

2 GnRH-R在子宮內(nèi)膜異位癥(Endometrosis，EMS)患者中在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜上的表達

Borroni等[8]于1999年采用RT-PCR和原位雜交等方法檢測到卵巢型子宮內(nèi)膜異位癥病灶細胞表面有GnRH-R的表達，而在無內(nèi)異癥病灶的的腹膜組織上未探及，從而首次證實GnRH-R基因在子宮異位內(nèi)膜組織上的表達，同時研究還發(fā)現(xiàn)GnRH類似物可能通過激活GnRH-R，抑制體外子宮內(nèi)膜異位癥細胞的增殖。Batzer等[9]亦認為，GnRHa治療EMS的作用機制中，除了GnRHa對下丘腦-垂體卵巢軸的降調(diào)節(jié)作用外，GnRHa也可能對內(nèi)膜異位病灶細胞的生長產(chǎn)生直接的抑制作用。

杜英等[10]及岳瑛等[11]先后采用免疫組化法檢測子宮內(nèi)膜異位癥患者在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜GnRH-R的表達。兩者研究中發(fā)現(xiàn)異位內(nèi)膜組織GnRH-R的表達率分別為62.38%、66.67%，在位內(nèi)膜GnRH-R的表達率均為100%，他們還進一步研究不同期別EMS患者卵巢異位內(nèi)膜及在位內(nèi)膜GnRH-R的表達，發(fā)現(xiàn)病變輕的EMS患者GnRH-R表達率高于病變重的EMS患者；同時還發(fā)現(xiàn)經(jīng)GnRHa治療后GnRH-R陽性者卵巢內(nèi)膜異位囊腫復(fù)發(fā)率低于GnRH-R陰性者，推測異位內(nèi)膜GnRH-R表達的缺失有可能與子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)；通過測定異位內(nèi)膜GnRH-R的表達，有可能為臨床EMS患者的治療及療效預(yù)測提供一定的參考依據(jù)。

黃堅等[12]在2006年研究了卵巢、陰道直腸、腹壁切口及子宮漿膜層幾個部位內(nèi)異組織中GnRH-R的表達，發(fā)現(xiàn)不同部位內(nèi)異組織中GnRH-R的表達率不同，推測其對GnRHa的反應(yīng)及治療效果可能不同，如何更有效地運用GnRHa治療不同部位的內(nèi)異癥有待進一步研究。

近年來，對于GnRH-Ⅱ及其受體在EMS患者中的表達及意義亦有研究。黃鳳英等[13]發(fā)現(xiàn)EMS患者的異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞具有分泌血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的功能，分泌量與在位子宮內(nèi)膜相近，這對內(nèi)異癥的形成和發(fā)展可能起重要作用，GnRH-Ⅱ呈劑量依賴性地抑制異位內(nèi)膜間質(zhì)細胞分泌VEGF，其抑制作用明顯強于在位，且GnRH-Ⅱ明顯強于GnRH-Ⅰ，為尋找EMS抗血管形成方面的新藥治療提供了新的依據(jù)。

3 GnRH-R在增生過長的子宮內(nèi)膜及子內(nèi)膜癌組織中的表達

張一萍等[6]在2005年采用免疫組化法測得增生過長的子宮內(nèi)膜組織GnRH和GnRH-R表達率均為92.3%，而子宮內(nèi)膜癌組織分別為58.8%和82.4%。岳瑛等[7]則于2006年發(fā)現(xiàn)，子宮內(nèi)膜腺癌組織GnRH-R mRNA的陽性表達率為40%(12/30)，明顯高于正常子宮內(nèi)膜組織的17%(9/53)，推測可能是由于子宮內(nèi)膜細胞發(fā)生癌變使細胞表面GnRH-R增加，或GnRH-R可能參與子宮內(nèi)膜腺癌細胞增殖。

張玉泉[14]在2006年研究增生過長的子宮內(nèi)膜GnRH-R的表達及其與ER、PR的關(guān)系，把子宮內(nèi)膜增生分為增生期、分泌期、單純性增生、復(fù)雜性增生及不典型增生5組類型內(nèi)膜進行研究(97例)，發(fā)現(xiàn)5組類型子宮內(nèi)膜GnRH-R表達的陽性率為25%～46.7%，表達陽性等級差異無統(tǒng)計學意義，而Dong等于1998年報道GnRH mRNA在增殖期呈低水平表達，而在分泌早期急劇增長約10倍的這種改變可能引起其受體的改變。兩者研究結(jié)論不一致，考慮可能是前者研究樣本數(shù)量不夠或存在某些混雜因素的原因。

上述研究結(jié)果為臨床內(nèi)分泌治療提供了參考依據(jù)。GnRH-R在異常增生的子宮內(nèi)膜和內(nèi)膜癌中的高表達可能成為臨床診斷指標和治療的靶點，可用于定向靶細胞化療治療子宮內(nèi)膜癌[15]。既往有文獻報道GnRH的抑瘤效應(yīng)是間接通過降低血清雌激素水平來實現(xiàn)的，現(xiàn)在認為，GnRH主要發(fā)揮間接抑制腫瘤作用的同時還有直接抑制腫瘤的作用，利用癌細胞表面GnRH-R增加的事實，選擇殺傷癌細胞的靶點，這種癌細胞特異性殺傷作用可能成為今后研究的一個方向[16]。有研究發(fā)現(xiàn)GnRH誘導(dǎo)某些生殖道腫瘤細胞調(diào)亡的作用與Fas耦連密不可分，表現(xiàn)為GnRH類似物誘導(dǎo)出的Fas-GnRH-R陽性腫瘤細胞的生長明顯被抑制，而Fas陰性細胞不受影響。故用GnRH類似物治療某些生殖道腫瘤前，測定腫瘤細胞的Fas表達陽性率，將能更好地選擇GnRH類似物治療的對象；而對于Fas陰性的腫瘤細胞，研究能誘導(dǎo)其表達Fas的方法，將能擴大GnRH類似物的治療范圍。

Eicke等[17]發(fā)現(xiàn)在卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌中，Ⅱ型GnRH(GnRH-Ⅱ)比GnRH-Ⅰ具有更強的抗增殖效應(yīng)，且GnRH-Ⅱ的作用并不是由GnRHR-Ⅰ介導(dǎo)的。Fister等[18]于2007年研究發(fā)現(xiàn)，對卵巢癌和子宮內(nèi)膜癌，GnRH-Ⅱ拮抗劑是一個高效、低毒性的內(nèi)分泌治療方法。

4 結(jié)論和展望

GnRH及GnRH-R在正常子宮內(nèi)膜組織中有表達，說明GnRH能夠通過自分泌或旁分泌作用調(diào)節(jié)子宮內(nèi)膜功能。GnRHa是目前治療內(nèi)異癥最有效的藥物[19]，“如何提高異位內(nèi)膜GnRH-R的表達率，增強GnRHa對EMS患者的療效”將是我們以后研究的方向。

GnRH-R在內(nèi)膜增生過長和內(nèi)膜癌中的高表達可能成為臨床診斷指標和治療的靶點，在內(nèi)膜癌中的高表達可被用于定向靶細胞化療。對于GnRHR-Ⅱ，有學者認為，從理論上講人類不存在功能性的GnRHR-Ⅱ[20]。2004年，日本學者利用抑制基因表達的方法首次證明了人類可能存在功能性的GnRHR-Ⅱ，當GnRHR-Ⅱ基因被抑制表達時，GnRH-Ⅱ及Cetrorelix不能發(fā)揮作用，而GnRH-Ⅰ的作用不受影響。但是該作者未能真正測得人類GnRHR-Ⅱ的功能性蛋白的表達[21]。2005年，澳大利亞學者則用免疫組化法測得人類子宮肉瘤上有GnRHR-Ⅱ的表達，說明人類存在功能性的GnRHR-Ⅱ[22]。故研究GnRHR-Ⅱ及其類似物將具有更好的臨床應(yīng)用前景。

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