禽腺病毒載體研究進(jìn)展

趙 莉，周 潔，高 誠＊

（1.上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心，上海201203；2.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，江蘇揚(yáng)州225009；3.中科院上海藥物所，上海201203）

最新的病毒分類第八次報(bào)告將腺病毒科分為哺乳動(dòng)物腺病毒、禽腺病毒（Fowl adenovirus，F(xiàn)Ad V）、腺胸腺病毒、唾液腺病毒4個(gè)屬。FAd V現(xiàn)在是指過去的Ⅰ群FAd V，包括傳統(tǒng)FAd V及分離自雞、火雞、鵝和其他禽類的腺病毒，享有一種共同的群抗原。而以前被定義為Ⅱ群FAd V的火雞出血性腸炎病毒、大理石脾病病毒及相關(guān)病毒現(xiàn)在統(tǒng)稱為火雞腺病毒A型，被歸為新立的唾液腺病毒屬。過去將與減蛋綜合征有關(guān)的一類病毒定義為Ⅲ群FAd V，現(xiàn)定名為鴨腺病毒A型，被列入腺胸腺病毒屬。由于FAd V多數(shù)呈隱性感染，不引起明顯臨床癥狀，被認(rèn)為是活病毒載體的候選株。

1 FAd V基因組結(jié)構(gòu)及功能特點(diǎn)

雞胚致死孤兒病毒（Chicken embryo lethal orphan viru，CELOV）是FAd V的代表種，其基因組具有腺病毒科共有的一些特點(diǎn)：①DNA單鏈5′端結(jié)合著由腺病毒編碼的末端蛋白，可提高腺病毒感染性。②DNA兩末端各具一個(gè)40 bp～200 bp的abc……c′b′a′型的末端倒轉(zhuǎn)重復(fù)序列（inverted terminal repeat，ITR）。CELOV 的 54 bp ITR 是DNA復(fù)制的起點(diǎn)。③ 包裝信號(hào)φ位于所有已知腺病毒基因組左端100 bp～500 bp之間，在5′ITR附近。④位于基因組兩端的ITR序列和左末端的包裝信號(hào)序列共約500 bp是腺病毒的順式作用元件，缺失后不能裝配成有感染性的病毒粒子。

CELOV基因組全長(zhǎng)43 804 bp，具有與人腺病毒（Human adenovirus，HAd V）序列同源的L區(qū)和E2區(qū)，位于基因組左中段，而不存在可識(shí)別的E1、E3、E4區(qū)。CELOV基因組左末端約5 kb和右末端約12 kb的序列富含開放性讀碼框（ORF），這些ORFs是否有類似于 HAd V E1、E3、E4區(qū)的功能，還有待驗(yàn)證。位于基因組794 bp處的ORF1編碼一種功能上與d UTP焦磷酸酶同源的蛋白，位于基因組1 999 bp處的ORF2編碼與細(xì)小病毒REP蛋白同源的產(chǎn)物，在基因組右末端的ORF8編碼一種新型抗凋亡蛋白GAM－1，在阻斷細(xì)胞凋亡方面的功能類似于Bcl－2和腺病毒E1B 19 ku蛋白。ORF22編碼一種與E1A蛋白相似的產(chǎn)物，具有誘導(dǎo)凋亡活性，與視網(wǎng)膜神經(jīng)膠質(zhì)瘤蛋白相互作用。GAM－1蛋白和ORF22產(chǎn)物對(duì)DNA的有效復(fù)制起著重要作用，能激活E2F途徑，促進(jìn)細(xì)胞從G1期向S期的轉(zhuǎn)化。在兩端邊界序列中，編碼大于99個(gè)氨基酸的ORF有22個(gè)，已明確研究過功能的卻不多，深入研究這些ORFs顯得非常重要。

2 FAd V載體的研究現(xiàn)狀

FAd V屬包括12個(gè)血清型，其中CELOV（FAd V－1）和FAd V－8已完成了全基因組測(cè)序，在國外被廣泛的用作FAd V載體研究。

2.1 CELOV（FAd V－1）載體

較早的研究對(duì)CELOV基因組序列和結(jié)構(gòu)已有詳細(xì)報(bào)道。Michou A I等［1］進(jìn)行了CELOV基因組的突變研究，對(duì)含有CELOV兩末端片段的質(zhì)粒載體進(jìn)行突變修飾和插入標(biāo)記基因表達(dá)盒，并酶切線性化CELOV全基因組質(zhì)粒，兩者共轉(zhuǎn)化大腸埃希菌發(fā)生同源重組，產(chǎn)生的重組腺病毒質(zhì)粒經(jīng)鑒定后轉(zhuǎn)染雞肝癌細(xì)胞系（chicken hepatocellular carcinoma cell line，LMH），監(jiān)測(cè)各種突變后能否產(chǎn)生有感染力的重組病毒。結(jié)果鑒定了一系列可被缺失但需通過反式提供調(diào)節(jié)因子修復(fù)復(fù)制的病毒復(fù)制必需區(qū)和CELOV基因組右末端的一個(gè)復(fù)制非必需區(qū)（40 064 bp～43 685 bp），缺失該3 620 bp片段對(duì)病毒在LMH細(xì)胞和雞胚上的復(fù)制沒有可見的影響，并可用于承載外源基因。此外，該研究還證實(shí)CELOV載體有效轉(zhuǎn)導(dǎo)多種哺乳動(dòng)物細(xì)胞，有望替代HAd V5載體用于哺乳動(dòng)物轉(zhuǎn)基因研究。Francois A等［2］發(fā)展了柯斯質(zhì)粒用作改良的載體構(gòu)建系統(tǒng)，對(duì)CELOV基因組中22個(gè)未定義的ORFs中的16個(gè)進(jìn)行了點(diǎn)突變來研究它們是否為病毒復(fù)制所必需。結(jié)果表明所有16個(gè)經(jīng)過突變的CELOV都能在LMH細(xì)胞系上獨(dú)立復(fù)制，包括基因組左末端的ORF1～4，12～15和右末端的ORF7～11，16～18，對(duì)于這16個(gè)ORFs的非必需性，研究者推測(cè)一方面可能由于它們?cè)隗w外細(xì)胞水平不起作用而在病毒進(jìn)入宿主體內(nèi)后的全身作用中才體現(xiàn)功能，如與逃避機(jī)體免疫有關(guān)。另一方面，可能這16個(gè)ORFs與病毒其他基因（復(fù)制相關(guān)基因）在功能上具有同源性聯(lián)系，缺失其中一個(gè)甚至幾個(gè)導(dǎo)致的病毒功能喪失可被病毒自身平衡。最后，還有可能是化學(xué)誘變得到的LMH細(xì)胞系特別有利于CELOV的增殖，而使缺失ORF導(dǎo)致的功能異常不易被觀察到或細(xì)胞因子償代了這部分缺失的功能。Washietl S等［3］注釋了CELOV基因組邊界序列中ORFs的特征，有可能揭示FAd V與宿主間作用的新型模式。通過序列分析發(fā)現(xiàn)原屬于平行進(jìn)化同源基因群的一些ORFs出現(xiàn)了極大的功能偏離，包括 ORF2、ORF12、ORF13和ORF14，這些ORFs都具有一個(gè)極可能來源于腺相關(guān)細(xì)小病毒的ATPase／helicase區(qū)域，但均不具有ATPase／helicase功能。此外，還確認(rèn)了ORF9、ORF10和ORF11為3個(gè)有IG類似區(qū)的假定的I型跨膜糖蛋白，具有補(bǔ)償CELOV缺失的類似哺乳動(dòng)物腺病毒具備的免疫調(diào)節(jié)功能。ORF16與脊椎動(dòng)物單一ADP核糖體轉(zhuǎn)移酶有較遠(yuǎn)的同源關(guān)系，故認(rèn)為ORF16在CELOV生活周期具有免疫調(diào)節(jié)或類似功能。合并的ORF18／19編碼了一個(gè)假定的甘油三酸酯分解酵素，由于它們只存在于FAd V和馬立克病毒基因組中，可能在感染鳥類中具有特定的功能。Logunov D Y等［4］構(gòu)建了一系列重組CELOV載體并證實(shí)即使在體內(nèi)已有HAdv5抗體的情況下它們也能很好的將基因轉(zhuǎn)入各種器官內(nèi)。CELO－p53載體修復(fù)了p53基因抑制腫瘤活性的功能，既能在體外人腫瘤細(xì)胞中也能在移植裸鼠體內(nèi)的異種移植物中發(fā)揮抗腫瘤活性，在裸鼠身上甚至伴隨抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用。Francois A等［5］將VP2基因置于CMV啟動(dòng)子之下，分別插入到CELOV 基 因 組1 660 bp～1 989 bp 缺 失 區(qū) 和40 065 bp～43 685 bp缺失區(qū)，構(gòu)建了表達(dá)IBDV抗原基因的重組病毒，通過皮下或皮內(nèi)接種途徑免疫，可保護(hù)SPF雞不出現(xiàn)臨床癥狀和死亡，但不能夠提供完全的保護(hù)力避免法氏囊的病理損傷。Cherenova L V 等［6］構(gòu)建了表達(dá)人白介素2（Ibperleukin－2，IL－2）基因的CELOV載體，但未對(duì)CELOV基因組有任何缺失。從體外培養(yǎng)的LMH和293細(xì)胞系上以及雞胚尿囊液中均獲得了重組病毒表達(dá)的有生物活性的IL2產(chǎn)物。在多次瘤內(nèi)注射CELO－IL2重組病毒載體后，患黑色素瘤的C57BL／6小鼠的平均存活時(shí)間提高。對(duì)于該載體的實(shí)際應(yīng)用，研究者建議去除與HAdv5致癌基因E1B和E1A有同源性的CELOV的2個(gè)早期基因GAM－1和ORF22。為提高CELOV載體對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，可以對(duì)CELOV的長(zhǎng)纖突進(jìn)行改造。構(gòu)建缺失絕大部分病毒基因的無腸型CELOV載體也可延長(zhǎng)外源基因的表達(dá)時(shí)間并提高載體的包裝容量。在Le Goff F等［7］的研究中，CELOV 基因組右末端約3 620 bp片段缺失后，分別表達(dá)熒光素酶和分泌型堿性磷酸酶的重組病毒的體內(nèi)效應(yīng)被評(píng)估。雞群經(jīng)口鼻途徑接種野生病毒和2種重組病毒后，結(jié)果病毒的組織生物學(xué)分布相似。盡管缺失基因組右末端的重組病毒在復(fù)制效率上有所降低，但其承載的異源性抗原能刺激宿主產(chǎn)生相應(yīng)抗體。Shashkova E V 等［8］評(píng)估了表達(dá) HSV1腺苷激酶（herpes simplex virus 1－thymidine kinase，HSV1－tk）的重組CELOV載體的抗癌效果。將HSV－TK或增強(qiáng)型綠色熒光蛋白（enhancer green fluorescebp protein ，EGFP）基因插入到CELOV基因組41 697 bp～43 669 bp處，缺失了1 954 bp的復(fù)制非必需區(qū)。CELO－TK載體既能將有功能活性的HSV1－TK產(chǎn)物轉(zhuǎn)移到體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞系中，也能將EGFP和HSV1－TK基因轉(zhuǎn)導(dǎo)至C57／BL6小鼠的皮下黑色素瘤內(nèi)表達(dá)，與抗病毒藥更昔洛韋聯(lián)合用藥，可抑制腫瘤生長(zhǎng)。Stevenson M等［9］探索了用非基因性的聚合體包裝CELOV，并用堿性成纖維生長(zhǎng)因子重建靶向，實(shí)現(xiàn)了載體靶向性的有效改造，并可抵抗預(yù)先存在的免疫反應(yīng)。Rauw F等［10］構(gòu)建了表達(dá)雞γ干擾素（chicken ibperferon－gamma，ChIFN－γ）的 復(fù) 制 型CELOV載體，ChIFN－γ表達(dá)框被插入到CELOV基因組右末端最大的復(fù)制非必需區(qū)D片段中。重組病毒表達(dá)的ChIFN－γ能很好地抑制溶細(xì)胞病毒在雞胚成纖維細(xì)胞和激活的巨噬細(xì)胞上的復(fù)制，并且在體內(nèi)外都很穩(wěn)定。Barra C等［11］初步鑒定了CELOV的順式作用元件。為定位CELOV基因組中編碼病毒殼體化的基因，他們?nèi)笔Я嘶蚪M80 bp～350 bp之間6個(gè)不同的區(qū)域來驗(yàn)證是否能產(chǎn)生活病毒。通過在初步確定的包裝序列假定位置兩側(cè)插入Lox P位點(diǎn)，成功構(gòu)建CELOV輔助病毒，同時(shí)建立了相應(yīng)的表達(dá)Cre重組酶的LMH細(xì)胞系。結(jié)果表明基因組左末端200 bp～250 bp和250 bp～300 bp的區(qū)域?qū)Σ《景b分別起著很重要和必須的作用。重組FAd V載體的優(yōu)點(diǎn)之一是可以利用雞胚系統(tǒng)生產(chǎn)轉(zhuǎn)基因產(chǎn)物。Tutykhina I L等［12］為開發(fā)有效的重組乳鐵蛋白生產(chǎn)系統(tǒng)，參考前人［5］構(gòu)建重組CELOV載體的方法，缺失了CELOV基因組40 045 bp～43 000 bp的復(fù)制非必需區(qū)并插入了包含人乳鐵蛋白（human lactoferrin，h Lf）基因的表達(dá)盒。用該CELO－Lf重組病毒感染雞胚，感染3 d后即可在尿囊液中檢測(cè)到高表達(dá)的h Lf（每胚0.8 mg）。利用聚丙烯酰胺凝膠電泳、蛋白印跡分析和糖基化分析等方法對(duì)尿囊液生產(chǎn)的h Lf和人乳中天然乳鐵蛋白進(jìn)行比較，顯示兩者具有相似的功能活性。利用雞胚系統(tǒng)生產(chǎn)這種結(jié)構(gòu)和功能準(zhǔn)確的h Lf產(chǎn)物，為以后將h Lf用作人用藥物奠定了基礎(chǔ)。

2.2 FAd V－4載體

Schonewille E等［13］將一株毒力很強(qiáng)的 FAd V－4在成纖維細(xì)胞系QT35上傳代適應(yīng)，得到了弱化毒FAd V－4／QT35。用弱化毒感染1日齡雞，未出現(xiàn)臨床癥狀和死亡。然后用雞胚肝細(xì)胞上生長(zhǎng)的FAd V－4肌內(nèi)注射未接種弱化毒的21日齡的雞群，結(jié)果出現(xiàn)了高死亡率，而在1日齡接種過弱化毒的雞群未出現(xiàn)死亡。通過酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)和病毒中和試驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)接種過弱化毒的雞群中僅一部分雞在攻毒前可檢測(cè)到微弱的抗體反應(yīng)，在攻毒后體內(nèi)抗體滴度立即升高，另一部分雞雖未檢測(cè)到中和抗體仍受到了保護(hù)。而未接種弱化毒的雞群在攻毒后抗體反應(yīng)出現(xiàn)了延遲。這表明中和性抗體對(duì)于保護(hù)雞群免受FAd V強(qiáng)毒感染不是必需的，此前未有FAd Vs存在此類現(xiàn)象的報(bào)道。Griffin B D等［14］報(bào)道了屬于FAd V－C種群的FAd V－4全長(zhǎng)45 667 bp的基因組序列，通過生物軟件結(jié)合FAd V－A和FAd V－D種間序列保守性分析評(píng)估了FAd V－4基因組序列的蛋白編碼潛力。46個(gè)潛在的編碼蛋白的ORFs被認(rèn)定，包括蛋白編碼高潛力的33個(gè)ORFs和蛋白編碼低潛力的13個(gè)ORFs。其中FAd V－4與腺病毒家族同源的基因，除了少數(shù)幾個(gè)，均被認(rèn)定為蛋白編碼高潛力，而FAd V特有的的ORFs分為蛋白編碼高潛力組和蛋白編碼低潛力組。高編碼潛力的基因包括之前報(bào)道過的fiber1基因、假定存在的10.3 kb和10.5 kb基因。對(duì)被認(rèn)定為低編碼潛力的且長(zhǎng)度小于300 bp的上游ORFs中的數(shù)個(gè)進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄分析，表明這類在腺病毒科內(nèi)普遍存在的上游ORFS可轉(zhuǎn)錄為重要的mRNA，可能屬于翻譯調(diào)節(jié)因子。這些結(jié)果有助于進(jìn)一步明確FAd V－4的蛋白編碼模式和新一代載體的開發(fā)。Mansoor M K等［15］為開發(fā)針對(duì)肉雞心包積水癥的有效疫苗，對(duì)FAd V－4弱毒活疫苗與商業(yè)化福爾馬林滅活肝臟苗進(jìn)行了肉雞免疫效果的評(píng)估比較。分離自心包積水癥患雞的病毒分離株在雞胚上盲傳4代可獲得雞胚適應(yīng)性，繼續(xù)傳代12次使其完全減毒成為弱毒活疫苗。分別用弱毒活疫苗與商業(yè)化滅活肝臟苗對(duì)不帶母源抗體的14日齡肉雞進(jìn)行了免疫。在免疫后的第7、14、21天檢測(cè)抗體水平，結(jié)果弱毒活疫苗免疫的雞群與肝臟滅活苗免疫的雞群相比，出現(xiàn)了顯著的高反應(yīng)性（P＜0.05）。對(duì)各組肉雞在24日齡時(shí)攻毒，并連續(xù)觀察了7 d。弱毒活疫苗對(duì)雞群提供了94.73%的保護(hù)率，而肝臟滅活苗對(duì)雞群僅提供了55%的保護(hù)率，與弱毒活疫苗比顯著降低（P＜0.05），未免疫的對(duì)照組雞群僅有10%的保護(hù)率。證明FAd V－4弱毒活疫苗能產(chǎn)生很好的免疫性，可控制雞群心包積水癥的感染。

2.3 FAd V－8載體

與CELOV 類 似，F(xiàn)Ad V－8基因組中段與HAd V同源性高，含有大量結(jié)構(gòu)蛋白基因，而在基因組左端6 kb和右末端13 kb與HAd V不存在同源性。Johnson M A等［16］將ChIFN－γ插入至FAd V－8基因組右末端一個(gè)編碼CELOV 36 ku蛋白類似物的ORF缺失區(qū)，構(gòu)建了3種重組病毒用于表達(dá)雞生長(zhǎng)因子。這3種重組病毒在雞腎細(xì)胞生長(zhǎng)特性表現(xiàn)出了差異，表明缺失編碼36 ku蛋白類似物的ORF影響病毒在體外的復(fù)制。用表達(dá)ChIFN－γ的重組病毒接種雞群，可增加雞的體重。Johnson M A等［17］將禽傳染性支氣管炎病毒包膜突起蛋白S1亞單位基因表達(dá)盒分別插入FAV－8基因組Sna BⅠ和XbaⅠ位點(diǎn)之間的2.4 kb和SpeⅠ位點(diǎn)之間的50 bp的缺失區(qū)，獲得了2株重組病毒。用重組病毒免疫商品仔雞后，在35日齡時(shí)用不同血清型的禽傳染性支氣管炎強(qiáng)毒株攻擊，可達(dá)到很高的保護(hù)率，顯示了FAd V－8用于構(gòu)建重組病毒預(yù)防禽傳染性支氣管炎的潛力。Greenall S A 等［18］將不同的轉(zhuǎn)基因（scFv或scFv－Fc）分別插入到基因組右末端52 bp和2.3 kb缺失處，構(gòu)建了兩個(gè)FAd V－8載體。結(jié)果缺失2.3 kb基因的重組FAd V－8載體，成功表達(dá)了分泌型的scFv和scFv－Fc片段，均可在體內(nèi)外中和禽法氏囊病毒。FAd V－8載體在禽體內(nèi)傳遞和表達(dá)治療性分子有較大的開發(fā)潛力。

2.4 FAd V－9載體

OjkicD等［19］研究表明，F(xiàn)Ad V－9在基因組右末端存在兩類串聯(lián)重復(fù)序列區(qū)域，較長(zhǎng)的重復(fù)區(qū)（the long tandemly repeated region），TR－2由13個(gè)連續(xù)的135 bp直接重復(fù)序列組成，功能未知。將EGFP報(bào)告基因插入到FAd V－9的TR－2區(qū)，獲得了缺失TR－2的復(fù)制型重組病毒，證實(shí)了TR－2是FAd V－9的復(fù)制非必需區(qū)。在后續(xù)的工作中，Ojkic D等［20］又進(jìn)一步研究了該重組病毒的體內(nèi)作用。肌內(nèi)注射接種野生型或重組FAd V－9后，檢測(cè)了病毒在雞體內(nèi)的組織分布和抗體反應(yīng)情況，兩者的結(jié)果均相似，故TR－2區(qū)的缺失不影響FAd V－9在體內(nèi)的分布和誘導(dǎo)相應(yīng)的免疫反應(yīng)。通過一系列基因缺失株的構(gòu)建，Corredor J C等［21］分析了 FAd V－9基因組左末端400 bp～2 782 bp區(qū)域，此區(qū)域包含了包裝信號(hào)功能域和一些ORFs。缺失了此區(qū)特定片段的活病毒在體外的生長(zhǎng)特性與野生病毒基本類似，但是其中一株缺失了該區(qū)ORFs但保留包裝信號(hào)功能域的病毒，在體內(nèi)的復(fù)制特性未能達(dá)到野生病毒的水平，表明此區(qū)的一些ORFs盡管對(duì)于FAV－9的體外復(fù)制是非必需的，對(duì)病毒的體內(nèi)復(fù)制卻有重要的作用。Corredor J C等［22］又驗(yàn)證了 FAd V－9基因組左末端的復(fù)制非必需區(qū)，同時(shí)檢測(cè)FAd V－9在體外的生長(zhǎng)特性以及轉(zhuǎn)導(dǎo)非禽源細(xì)胞的能力。在基因組左末端插入EGFP基因表達(dá)盒而未缺失任何區(qū)域構(gòu)建了FAd V－9inEGFP，分別在基因組1194 bp～2 342 bp和491 bp～2 782 bp處插入EGFP基因表達(dá)盒構(gòu)建了FAd V－9△1－EGP 和FAd V－9△4－EGP，這三株重組病毒均具有類似于野生病毒的生長(zhǎng)特性，且負(fù)載的EGFP基因在禽源性細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)均可表達(dá)。表明FAd V－9可構(gòu)建成重組病毒載體用于禽類免疫或哺乳動(dòng)物基因投遞。Corredor J C等［23］構(gòu)建了兩種不同的復(fù)制型重組病毒，并分析了雞群對(duì)重組病毒及其表達(dá)的外源基因產(chǎn)物、EGFP產(chǎn)生的抗體情況和雞群糞便排毒情況。結(jié)果在接種重組病毒3周～7周后的雞體內(nèi)檢測(cè)到了針對(duì)EGFP的抗體，在分別接種重組病毒和野生病毒的雞體內(nèi)均檢測(cè)到了針對(duì)FAd V－9的抗體，并且抗體產(chǎn)生水平無顯著性差異（P＞0.06）。接種重組病毒的雞群未出現(xiàn)糞便排毒，而接種野生病毒的雞群出現(xiàn)了糞便排毒。這些結(jié)果進(jìn)一步支持了FAd V－9左末端復(fù)制非必需區(qū)適合插入外源基因但對(duì)病毒體內(nèi)復(fù)制有重要作用的結(jié)論。

2.5 其他FAV載體

何秀苗［24］確定了FAd V江蘇株基因組的一個(gè)復(fù)制非必需區(qū)（40 064 bp～42 284 bp），通過真核細(xì)胞內(nèi)同源重組的方法獲得了表達(dá)EGFP的重組FAd V，為研究FAd V江蘇株的重組基因工程疫苗奠定了基礎(chǔ)。Corredor J C等［25］先后對(duì)部分血清型的 FAd V（FAd V－2、FAd V－4、FAd V－8、FAd V－10）基因組左末端和右末端進(jìn)行了序列分析，并與FAd V－1和FAd V－9的序列進(jìn)行了比較。結(jié)果同種群內(nèi)的FAd V（D群的FAd V－2和FAd V－9，C群的FAd V－4和FAd V－10）的核酸序列同源性和氨基酸序列的一致性很高，而不同群的各型FAd Vs之間存在不同程度的差異性。FAV基因組左末端和右末端的基因排列和ORFs的位置較高的保守性暗示了可能具有相似的基因功能。

綜上所述，許多抗原基因已成功克隆到FAd V載體并有效表達(dá)，動(dòng)物試驗(yàn)也證實(shí)重組FAd V能誘導(dǎo)較高水平的抗體，攻毒保護(hù)效果良好，并具有很好的安全性，因此，F(xiàn)Ad V可作為基因工程重組疫苗的候選載體。

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