蠐螬化學(xué)成分研究

李 林，李小年，魏暑飔，3，晏永明，鐘惠民，程永現(xiàn)*

（1.中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，昆明 650204；2.青島科技大學(xué)化學(xué)與分子工程學(xué)院，山東青島 266042；3.河南中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，鄭州 450008）

蠐螬為節(jié)肢動(dòng)物門昆蟲綱鞘翅目金龜子科昆蟲朝鮮黑金龜子Holotrichia diomphalia Bates等同屬近緣昆蟲的干燥幼體〔1〕，具有破血逐淤，明目退翳的功效，內(nèi)服可用于婦女經(jīng)閉、癥瘕，外用可治療丹毒、癰疽、痔漏、跌打損傷等〔2〕?；谙擉┑拿髂客唆韫π?，現(xiàn)代臨床上將其制成滴眼液，用于治療白內(nèi)障、眼角膜翳等效果顯著〔3〕。藥理研究證明蠐螬具有抗腫瘤、保肝、抗菌等作用〔4〕，如蠐螬石油醚提取物可誘導(dǎo)人宮頸癌Hela細(xì)胞凋亡〔5〕，有研究表明蠐螬的保肝作用甚至勝過水飛薊素〔6〕。但蠐螬的化學(xué)成分研究較少，也比較薄弱，報(bào)道稱蠐螬含有脂肪酸類〔7-8〕、氨基酸、多肽或蛋白質(zhì)、糖類、生物堿、有機(jī)酸鹽、甾體化合物等〔9〕，但實(shí)際上這些化合物幾乎在每個(gè)昆蟲中均存在。GC-MS分析表明蠐螬的石油醚提取物含有反油酸、十六酸，硬脂酸等〔10〕。國(guó)外學(xué)者報(bào)道蠐螬含有兩種酚氧化酶原（Propo-Ⅰ和Propo-Ⅱ）和三種酚氧化酶原活化因子（PPAF-Ⅰ、PPAF-Ⅱ和PPAF-Ⅲ）〔4〕。但相對(duì)于蠐螬顯著的臨床療效，目前的化學(xué)研究還遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能揭示其藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。我們對(duì)該蟲類中藥進(jìn)行了研究，從其乙醇提取物中分離得到10個(gè)化合物，經(jīng)波譜學(xué)方法鑒定其結(jié)構(gòu)為反-1，2-環(huán)己二醇（1），甘油醇-1-單油酸酯（ 2），水楊苷（ 3），對(duì)甲氧基苯乙酸（ 4），苯甲酸甘油-1-酯（ 5），Yangjinhualine A（ 6），（ ±）2-羥基戊二酸二甲酯（ 7），鄰羥基苯甲醇（ 8），對(duì)羥基苯乙酸（9）和Oxiran-2-ylmethanol（ 10），以上化合物均為首次從該種動(dòng)物藥中分離得到。

1 儀器與材料

核磁共振波譜用Bruker AM-400、Bruker DRX-500和Bruker Avance-600核磁共振儀測(cè)定，TMS作為內(nèi)標(biāo)；ESIMS用API QSTAR飛行時(shí)間質(zhì)譜儀測(cè)定；比旋光度用Horiba SEPA-300旋光儀測(cè)定；高效液相色譜儀型號(hào)為Agilent 1200；薄層層析硅膠GF254和柱層析硅膠（200-300目）均為青島海洋化工廠產(chǎn)品；大孔吸附樹脂為天津海光化工有限公司D101樹脂；Sephadex LH-20為Pharmacia公司產(chǎn)品；反相硅膠RP-18和MCI gel CHP 20P分別為Daiso公司和三菱公司產(chǎn)品。

2 提取與分離

蠐螬（18 kg）于2009年7月購(gòu)自安徽省亳州藥材交易中心，經(jīng)湖南中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室周小江副教授鑒定為朝鮮黑金龜子（Holotrichia diomphalia Bates）的干燥幼蟲。藥材粉碎后用95%乙醇冷浸提取3次，每次3 d，減壓回收溶劑得浸膏2 kg。浸膏加水混懸，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取物55 g經(jīng)硅膠柱層析（600 g，氯仿∶甲醇10∶0～1∶1），分為4部分EA-1-EA-4。 經(jīng)過反復(fù)硅膠柱層析、反相柱層析和Sephadex LH-20柱層析，從EA-2分得化合物1（ 40 mg）；對(duì)EA-3進(jìn)行反復(fù)MCI gel CHP 20P柱層析、反相柱層析和Sephadex LH-20柱層析得化合物2（16 mg）。正丁醇萃取物76 g經(jīng)D101大孔吸附樹脂柱層析，用乙醇/水梯度洗脫，分為4部分（nB-1-nB-4）。經(jīng)過反復(fù)硅膠柱層析、反相柱層析、MCI gel CHP 20P柱層析和Sephadex LH-20柱層析，從nB-2分得化合物3（ 2 mg）；從nB-3分得化合物4（ 30 mg）和5（ 16 mg）。 濃縮水相部分得浸膏740 g，取其一半370 g進(jìn)行分離，經(jīng)硅膠柱層析（氯仿∶甲醇15∶0～4∶1梯度洗脫）， 分為3部分EQ-1-EQ-3，經(jīng)過反復(fù)MCI gel CHP 20P柱層析、Sephadex LH-20柱層析、反相柱層析及HPLC純化，從EQ-1部分得到化合物6（ 7 mg）和7（ 1 mg），從EQ-2部分得到化合物8（ 9 mg），從EQ-3部分得到化合物9（ 3 mg）和10（ 2 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

反-1，2-環(huán)己二醇（ 1）：白色固體；1H NMR（ 500 MHz，CD3OD）：δH3.30（ 2H，m，H-1，2），1.91（ 2H，m，H-3a，6a），1.68（ 2H，m，H-3b，6b），1.27（ 4H，m，H-4，5）；13C NMR （ 125 MHz，CD3OD）：δC76.1 （ d，C-1，2），34.0（ t，C-3，6），25.3（ t，C-4，5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)數(shù)值相符〔11〕。

甘油醇-1-單油酸酯（2）：白色固體；C21H40O4，ESI+MS m/z：357〔M+H〕+，379〔M+Na〕+；1H NMR（ 400 MHz，CD3OD）：δH5.27 （ 2H，m，H-9，10），4.07（1H，dd，J=11.4，4.3 Hz，H-1′），3.98 （ 1H，dd，J=11.4，6.3 Hz，H-1′），3.76（ 1H，m，H-3′），3.59（1H，m，H-2′），3.47 （1H，m，H-3′），2.28 （2H，t，J=7.4 Hz，H-2），1.95（ 4H，m，H-8，11），1.54（ 2H，m，H-3），1.23（ 24H，m，H-4，5，6，7，8，11，12，13，14，15，16，17），0.80（3H，t，J=6.8 Hz，H-18）；13C NMR （ 100 MHz，CD3OD）：δC175.5（s，C-1），130.9（ d，C-9），130.8（d，C-10），71.1 （ d，C-2′），66.5 （ d，C-1′），64.0 （ d，C-3′），34.9，33.1，30.8，30.8，30.6，30.5，30.4，30.3，30.2，30.0，28.1，26.0，23.8，14.5。 以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符〔12〕。

水楊苷 （3）： 白色固體；1H NMR（500 MHz，C5D5N）：δH7.76 （ 1H，d，J=7.3 Hz，H-6），7.63（ 1H，d，J=7.3 Hz，H-3），7.25 （ 1H，t，J=7.3 Hz，H-4），7.10（ 1H，t，J=7.3 Hz，H-5），5.33 （ 1H，d，J=13.2 Hz，H-7a），5.10 （ 1H，d，J=13.2 Hz，H-7b），5.50（ 1H，d，J=5.4 Hz，H-1′），4.54（ 1H，d，J=12.2 Hz，H-6′a），4.40 （ 1H，dd，J=12.2 Hz，4.9 Hz，H-6′b），3.5-4.3（ 4H，m，H-2′，3′，4′，5′）；13C NMR（ 125 MHz，C5D5N）：δC156.8（ s，C-2），133.0（ s，C-1），128.8（ d，C-6），128.7（ d，C-4），122.9（ d，C-5），116.5（ d，C-3），103.7（ d，C-1′），79.0（ d，C-3′），78.6（ d，C-5′），75.2（ d，C-2′），71.3（ d，C-4′），62.4（ t，C-6′），60.5（ t，C-7）。 以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符〔13〕。

對(duì)甲氧基苯乙酸（ 4）：白色固體；1H NMR（ 400 MHz，CD3OD）：δH7.08（ 2H，dd，J=8.5，1.5 Hz，H-3′，5′），6.74 （ 2H，dd，J=8.5，1.5 Hz，H-2′，6′），3.67（ 3H，s，OCH3），3.54 （ 2H，s，H-2）；13C NMR（ 100 MHz，CD3OD）：δC174.6 （ s，C-1），157.6 （ s，C-4′），131.3（d，C-2′，6′），126.3（s，C-1′），116.2（ d，C-3′，5′），50.4（ q，OCH3），40.9（ t，C-2）。 以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符〔14〕。

苯甲酸甘油-1-酯（ 5）：白色粉末；1H NMR（ 400 MHz，CDCl3）：δH8.04 （2H，d，J=7.6 Hz，H-3′，7′），7.58 （ 1H，t，J=7.6 Hz，H-5′），7.45 （ 2H，d，J=7.6 Hz，H-4′，6′），4.42（ 2H，m，H-3），4.07（ 1H，m，H-2），3.77（ 1H，dd，J=11.5，3.4 Hz，H-1a），3.68（ 1H，dd，J=8.5，5.7 Hz，H-1b）；13C NMR （ 100 MHz，CDCl3）：δC167.0（ s，C-1′），133.4（ d，C-5′），129.7（ d，C-2′，7′），129.5（ s，C-2′），128.4（ d，C-4′，6′），70.3（ d，C-2），65.7（ t，C-1），63.3（ t，C-3）。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符〔15〕。

Yangjinhualine A（ 6）：黃色粉末；1H NMR（ 600 MHz，CD3OD）：δH7.58（ 2H，d，J=8.2 Hz，H-2′，6′），6.92（ 2H，d，J=8.2 Hz，H-3′，5′），6.43（ 1H，s，H-5），2.10 （ 3H，s，H-6）；13C NMR （ 150 MHz，CD3OD）：δC175.4 （ s，C-2），160.7 （ s，C-4′），156.8 （ s，C-4），131.7（ d，C-2′，6′），123.7（ s，C-1′），122.5（ s，C-3），116.7（d，C-3′，5′），99.1（ d，C-5），10.5（ q，C-6）。以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符〔16〕。

（±）2-羥基戊二酸二甲酯（7）：無色油狀物；〔α〕26D0 （ c 0.77，CHCl3）；1H NMR （ 400 MHz，CDCl3）：δH4.24 （ 1H，dd，J=7.2，3.8 Hz，H-2），3.80（ 3H，s，OCH3-1），3.68（ 3H，s，OCH3-5），2.95（ 1H，brs，OH-2），2.49（ 2H，m，H-4），2.17（ 1H，m，H-3a） ，1.95（ 1H，m，H-3b） ；13C NMR （ 100 MHz，CDCl3）：δC175.0（ s，C-1），173.6（ s，C-5），69.4（ d，C-2），52.7（ q，OCH3-1），51.7（ q，OCH3-5），29.4（ t，C-3） ，29.2（ t，C-4）。 以上NMR數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符〔17〕，但比旋光度為零，即該物質(zhì)為外消旋體。

鄰羥基苯甲醇（ 8）：無色油狀物；1H NMR（ 400 MHz，CD3OD）：δH7.49（ 1H，d，J=8.0 Hz，H-6），7.44（ 1H，d，J=8.0 Hz，H-3），7.29（ 1H，t，J=8.0 Hz，H-4），7.22（ 1H，d，J=8.0 Hz，H-5），3.33（ 2H，brs，H-7）；13C NMR（ 100 MHz，CD3OD）：δC149.7（ s，C-2），134.2（s，C-1），128.2（ d，C-4），127.7（ d，C-6），124.9（ d，C-5），121.9（ d，C-3），59.0（ t，C-7）。 以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符〔18〕。

對(duì)羥基苯乙酸（9）：無色針晶；1H NMR（600 MHz，D2O）：δH7.01 （ 2H，d，J=8.5 Hz，H-2′，6′），6.68（ 2H，d，J=8.5 Hz，H-3′，5′），3.35（ 2H，s，H-2）；13C NMR（150 MHz，D2O）：δC178.3（ s，C-1），153.9（ s，C-4′），130.8（ d，C-2′，6′），126.0（ s，C-1′），115.8（ d，C-3′，5′），40.7（ t，C-2）。 以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符〔18〕。

Oxiran-2-ylmethanol（ 10）： 無色油狀物 ；1H NMR （ 600 MHz，D2O）：δH3.60 （ 1H，m，H-2），3.47（ 2H，dd，J=11.8，4.4 Hz，H-1），3.38 （ 2H，dd，J=11.8，6.5 Hz，H-3）。 以上數(shù)值與文獻(xiàn)數(shù)值相符〔18〕。

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