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    原發(fā)性肝癌患者外周血CD105陽性細(xì)胞的測定及其意義

    2012-03-27 01:26:36陳霞劉蕾牛國超梁育飛張曉嵐
    河北醫(yī)藥 2012年13期
    關(guān)鍵詞:陽性細(xì)胞內(nèi)皮細(xì)胞外周血

    陳霞 劉蕾 牛國超 梁育飛 張曉嵐

    肝硬化被視為原發(fā)性肝癌(HCC)的一種癌前疾病。肝癌的篩查方法包括血清甲胎蛋白(AFP)檢測、B超及放射學(xué)檢查等,但是AFP檢測對肝癌診斷的陽性率差別很大。CD105是一種增生相關(guān)內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞膜抗原。CD105參與了血管生成的某些過程,因此可以將CD105作為腫瘤新生血管標(biāo)記物。CD105參與血管生成,是新生血管的標(biāo)志,因此,可以預(yù)見CD105在惡性腫瘤的診斷、治療和預(yù)后中發(fā)揮重要的作用。HCC患者外周血CD105陽性細(xì)胞的測定及在預(yù)測HCC的價值筆者尚未見報道。本研究通過檢測外周血CD105陽性細(xì)胞和血清AFP在肝硬化及HCC患者的表達(dá)水平,探討HCC患者與肝硬化患者及正常對照間外周血CD105陽性細(xì)胞表達(dá)的差異及其意義,判定CD105在肝硬化肝癌早期診斷中的價值。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    1.1.1 納入標(biāo)準(zhǔn):①肝硬化病例均符合2000年9月西安中華醫(yī)學(xué)會傳染病與寄生蟲病學(xué)會分會、肝炎后肝硬化診斷標(biāo)準(zhǔn);②HCC患者符合2001年9月第八屆全國肝癌學(xué)術(shù)會議通過的原發(fā)性肝癌的臨床診斷與分期標(biāo)準(zhǔn);③臨床資料齊全,包括肝功能、凝血常規(guī)檢測,B超或CT影像學(xué)檢查。

    1.1.2 排除標(biāo)準(zhǔn):①合并其他部位腫瘤;②風(fēng)濕免疫性疾?。?];③妊娠女性;④心肌梗死急性期[1]。

    1.1.3 病例資料 選取滄州市中心醫(yī)院住院肝硬化患者60例為肝硬化組,男44例,女16例;平均年齡(55±12)歲。HCC患者40例為HCC組,男30例,女10例;平均年齡(54±8)歲。另外,選取健康志愿者30例作為正常對照組,男14例,女16例;平均年齡(59±10)歲。

    1.2 方法

    1.2.1 標(biāo)本采集:清晨空腹抽血后,樣本分送CD105和AFP檢測。

    1.2.2 CD105 測定:抽取抗凝靜脈全血 1 ml,取其中 100 μl全血置于一試管中,加入 20 μlγ1 對照液,后加入 20 μl CD45;另取一試管 100 μl全血,加入 20 μl CD105,再加入 20 μl CD45,隨后2管避光放置20 min,各加入溶血素1 ml,再避光放置10 min,以1500 r/min的速度離心5 min,棄上清液,各加緩沖液2 ml,同一速度再次離心5 min,棄上清液,再加入400 μl緩沖液后上機(jī),用流式細(xì)胞儀檢測,以Cell Quest軟件獲取分析數(shù)據(jù),定量分析每管樣品中10 000個細(xì)胞,以CD105+細(xì)胞為陽性細(xì)胞,收集數(shù)據(jù),計數(shù)陽性細(xì)胞的數(shù)目,判定結(jié)果。檢測外周血中CD105陽性細(xì)胞的表達(dá)率。

    1.2.3 AFP測定:采用微粒子捕捉免疫發(fā)光技術(shù)(MEIA),酶標(biāo)抗體采用堿性磷酸酶(ALP)作為標(biāo)記物,取血清的上清液1 ml,置于測量杯中,儀器自動吸取樣品 50 μl,液相試劑250 μl,固相試劑 250 μl,37℃ 溫水浴 7.5 min,沖洗后,自動加入反應(yīng)試劑(堿性雙氧水),激發(fā)反應(yīng),其發(fā)光強(qiáng)度與樣品濃度成正比。直接讀取結(jié)果。

    1.3 統(tǒng)計學(xué)分析應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件,計量資料以表示,多組間均數(shù)差異性比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA)及q檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 HCC患者外周血CD105陽性細(xì)胞變化 HCC組外周血CD105陽性細(xì)胞水平高于肝硬化組與正常對照組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。肝硬化組外周血CD105陽性細(xì)胞水平高于正常對照組,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

    表1 3組CD105陽性細(xì)胞的表達(dá)%,±s

    表1 3組CD105陽性細(xì)胞的表達(dá)%,±s

    注:與HCC 組比較,*P <0.05

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    2.2 HCC患者外周血CD105陽性細(xì)胞的測定與血清AFP水平比較 HCC患者的血清AFP的表達(dá)水平較肝硬化組和正常對照組升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。其中AFP>400 ng/ml的HCC患者外周血CD105陽性細(xì)胞水平顯著高于AFP<400 ng/ml者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表2、3。

    表2 3組血清AFP的表達(dá)ng/ml,±s

    表2 3組血清AFP的表達(dá)ng/ml,±s

    注:與HCC 組比較,*P <0.01

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    表3 不同AFP等級的肝癌中CD105陽性細(xì)胞比例與肝硬化的比較%,±s

    表3 不同AFP等級的肝癌中CD105陽性細(xì)胞比例與肝硬化的比較%,±s

    注:與HCC AFP<400 ng/ml組比較,*P <0.01;與肝硬化組比較,#P <0.05,△P <0.01

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    2.3 HCC患者外周血CD105陽性細(xì)胞的水平與腫瘤大小的關(guān)系 腫瘤直徑>5 cm的患者外周血CD105陽性細(xì)胞水平高于腫瘤直徑≤5 cm患者,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。見表4。

    表4 不同等級直徑肝癌CD105陽性細(xì)胞的表達(dá)比例%,±s

    表4 不同等級直徑肝癌CD105陽性細(xì)胞的表達(dá)比例%,±s

    注:與直徑≤5 cm比較,*P <0.01

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    3 討論

    HCC是一種發(fā)病率及病死率均很高的惡性腫瘤。早期診斷、早期治療才能延長肝癌患者的生存期,肝癌缺乏特異的臨床表現(xiàn),早期診斷率低,許多患者診斷時已發(fā)展為進(jìn)展期肝癌。目前臨床上常用的肝癌早期篩查手段是AFP檢測、B超和影像學(xué)檢查等。AFP是目前診斷肝癌最常用的血清學(xué)指標(biāo),AFP的特異性較高,但敏感性不高,因此,尋找一個敏感性更高的血清診斷學(xué)指標(biāo)對提高早期診斷率有一定幫助。

    CD105是血管內(nèi)皮細(xì)胞上可以結(jié)合轉(zhuǎn)化生長因子-β(TGF-β)的受體蛋白,是由2個相對分子質(zhì)量約為9.5萬的單體聚合而成。有學(xué)者[2]發(fā)現(xiàn)了主要定位于各組織血管內(nèi)皮細(xì)胞的endoglin,并且在眾多正常組織間質(zhì)的血管內(nèi)皮細(xì)胞和體外培養(yǎng)的血管內(nèi)皮細(xì)胞上檢測到CD105。近幾年檢測腫瘤組織中新生血管內(nèi)皮表面的TGF-β受體,使得CD105與腫瘤的生長和預(yù)后密切相關(guān)。CD105的存在,為提純內(nèi)皮細(xì)胞或?yàn)閬碓从趦?nèi)皮細(xì)胞的腫瘤分類提供了一個可能有效的方法[3]。

    CD105能調(diào)節(jié)內(nèi)皮-間質(zhì)間的信號傳遞,參與血管新生過程,而血管新生是腫瘤普遍存在的特征,與腫瘤組織的浸潤、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。在不同組織來源的惡性腫瘤中,CD105在腫瘤組織及其周圍血管的內(nèi)皮細(xì)胞中高表達(dá)[4],且CD105主要在未成熟的血管內(nèi)皮表達(dá),少數(shù)情況下可在腫瘤細(xì)胞中弱表達(dá)[5],進(jìn)一步的研究表明,Endoglin無論在體內(nèi)和體外都過表達(dá)新生的血管內(nèi)皮細(xì)胞,并與增殖指標(biāo)cyclin A、ki-67過表達(dá)直接相關(guān),是血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的標(biāo)志,與內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物如CD31、CD34、Ⅷ因子相關(guān)抗原等相比,CD105陽性細(xì)胞僅在新生的血管內(nèi)皮細(xì)胞上高表達(dá),而在正常組織的血管上無表達(dá)或弱表達(dá)[6,7]。

    肝癌是一種富含血管的腫瘤,血管形成是肝癌生長、浸潤與轉(zhuǎn)移的重要條件。Takahashi等[8]發(fā)現(xiàn),直腸癌、乳腺癌等發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者血清S-CD105的表達(dá)水平顯著高于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者,并發(fā)現(xiàn)化療能降低血清S-CD105的含量,從而提出血清S-CD105作為血管生成的標(biāo)志,可以用來預(yù)測惡性腫瘤患者疾病復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移的危險性。Akagi等[9]研究發(fā)現(xiàn),在結(jié)直腸腺瘤由輕度、重度不典型增生至腺癌發(fā)展的過程中,CD105標(biāo)記的MVD值逐漸升高,表明CD105在預(yù)測結(jié)直腸腺瘤癌變的過程中是有效指標(biāo),提示CD105有助于早期診斷疾病,及時治療。

    盡管存在著一定程度的假陽性及假陰性,AFP仍然是目前公認(rèn)的肝癌最佳診斷標(biāo)志物,在HCC早期診斷中具有重要價值。AFP是胚胎干細(xì)胞產(chǎn)生的一種特殊蛋白質(zhì),胎兒出生后不久即逐漸消失,是目前應(yīng)用最廣泛的早期診斷和篩查肝癌的指標(biāo),但其敏感性和特異性均存在不如意地方,尤其是血清中AFP水平與腫瘤大小呈正相關(guān),對小腫瘤不敏感,限制了其在肝癌早期診斷中的價值[10]。于興等[11]報道,有27.7%的良性肝病患者血清AFP水平升高。

    在乙型肝炎——肝硬化——肝癌的發(fā)展過程中,乙肝病毒通過整合到宿主的DNA中,促進(jìn)血管生成。在惡性腫瘤形成中,TGF-β主要起到了促增殖作用。CD105通過激活TGF-β/ALK1信號傳導(dǎo)途徑,同時間接抑制TGF-β/ALK5信號傳導(dǎo)途徑,促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖,導(dǎo)致腫瘤血管生成。在腫瘤缺血缺氧時,內(nèi)皮細(xì)胞開始裂解血管內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞膜上的CD105,釋放可溶性CD105,使原有腫瘤部位的血管內(nèi)皮受損,內(nèi)皮細(xì)胞間的連接松散、擴(kuò)大,可使腫瘤細(xì)胞更好的釋放入血,進(jìn)而遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本研究發(fā)現(xiàn)HCC患者外周血CD105陽性細(xì)胞的水平顯著高于肝硬化組及正常對照組,考慮與以下因素有關(guān):(1)肝癌患者TGFβ1過度調(diào)節(jié)及CD105在有活性的肝臟星狀細(xì)胞表達(dá);(2)CD105在內(nèi)皮細(xì)胞中過表達(dá),而內(nèi)皮細(xì)胞在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中至關(guān)重要,起著決定性作用。

    AFP是由胚胎期卵黃囊和肝細(xì)胞產(chǎn)生的糖蛋白。肝癌患者體內(nèi)AFP基因重新表達(dá),其表達(dá)的調(diào)控主要發(fā)生于轉(zhuǎn)錄水平。大多數(shù)肝癌患者血清AFP顯著升高,但仍有10% ~30%的患者呈陰性。AFP必須聯(lián)合影像學(xué)才能診斷肝癌,但是AFP聯(lián)合影像學(xué)診斷也仍有一定的漏診率。本研究發(fā)現(xiàn)HCC患者外周血CD105陽性細(xì)胞的表達(dá)顯著高于肝硬化患者;AFP>400 ng/ml的肝癌患者外周血CD105陽性細(xì)胞的表達(dá)水平顯著高于 AFP<400 ng/ml者;AFP<400 ng/ml的患者外周血CD105陽性細(xì)胞的表達(dá)顯著高于肝硬化組,提示CD105可能作為AFP不滿足診斷標(biāo)準(zhǔn)的肝癌患者補(bǔ)充診斷指標(biāo)。

    本研究發(fā)現(xiàn)外周血CD105在肝硬化進(jìn)展為肝癌過程中的關(guān)系緊密,這也從側(cè)面反映了血管生成在肝癌發(fā)生發(fā)展過程中的重要性。我們通過分析發(fā)現(xiàn)外周血CD105陽性細(xì)胞和AFP聯(lián)合檢測可提高肝癌的陽性檢出率,減少漏診率,提高診斷的準(zhǔn)確性。

    惡性腫瘤的生長依賴于營養(yǎng)血管的不斷生成。一旦腫瘤直徑超過2 mm,就有毛細(xì)血管的生成,使腫瘤獲得足夠的血供和營養(yǎng)。腫瘤新生血管結(jié)構(gòu)缺乏完整性,管壁薄弱,更容易被腫瘤細(xì)胞穿透,而且腫瘤呈膨脹浸潤性生長,會對周圍組織產(chǎn)生壓力,這樣可使腫瘤細(xì)胞更容易進(jìn)入血液循環(huán),形成轉(zhuǎn)移灶。隨著腫瘤體積的增大,新生血管形成更多,更容易復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移。由于CD105在惡性腫瘤中的表達(dá)可以反映出腫瘤血管生成和內(nèi)皮細(xì)胞活躍情況,所以CD105的高表達(dá)可作為惡性腫瘤患者轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷的指標(biāo)之一。有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的肝癌患者外周血CD105陽性細(xì)胞的水平顯著高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者,分期越晚,外周血CD105陽性細(xì)胞的水平越高。本研究發(fā)現(xiàn)腫瘤直徑>5 cm的肝癌患者外周血CD105陽性細(xì)胞的水平高于腫瘤直徑<5 cm的肝癌患者的CD105陽性細(xì)胞的水平。腫瘤的局部復(fù)發(fā)率隨體積的增大而增加,發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的機(jī)會亦越多。推測外周血CD105陽性細(xì)胞的水平升高可能與肝癌患者腫瘤復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移有一定的關(guān)系,很可能對預(yù)測肝癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移有一定價值,尚需擴(kuò)大樣本量進(jìn)行進(jìn)一步研究。

    CD105在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中起著重要作用,同時也與腫瘤的預(yù)后有關(guān)。CD105在HCC的診斷與治療方面起著重要作用,在靶向治療腫瘤的今天,CD105展現(xiàn)出了一定的臨床應(yīng)用前景。

    1 Li CG,Wilson PB,Bernabeu C,et al.Immunodetection and characterisation of soluble CD105 TGF-beta complexes.JimmunolMethods,1998,218:85-93.

    2 Quackenbush EJ,Letarte M.Identification of several cell surface proteins of non-T non-B acute lymphoblastic leukemia by using monoclonal antibodies.J Immun,1985,134:1276.

    3 Westphal JR,Willems HW,Schalkwijk CJ,et al.Characteristics and possible function of endoglin,a TGF-beta binding protein.Behring Inst Mitt,1993,92:15.

    4 Li SL,Gao DL,Zhao ZH,et al.Correlation of matrix metallopro-teinase suppressor genes RECK,VEGF,and CD105 with angiogenesis and biological behavior in esophageal squamous cell carcinoma.World J Gastroenterol,2007,13:6076-6081.

    5 Yu D,zhuang L,Sun X,et al.Particular distribution and expression pattern of endoglin(CDl05)in the liver of patients with hepato-cellular carcinoma.BMC Cancer,2007,7:122.

    6 Miller DW,Gaulich W,Karges B,et al.Elevated expression of endoglin,a component of the TGF-beta-receptor complex,correlates with proliferation of tumor endothelial cells.Int J Cancer,1999,81:568-572.

    7 Li DY,Sorensen L K,Brooke BS,et al.Defective angiogenesis in mice lacking endoglin.Science,1999,284:1534.

    8 Takahashi N,Kawanishi Tabata R,Haba A,et al.Association of serum endoglin with metastasis in patients with colorectal,breast,and others olid tumors,and suppressive effect of chem.Other apyon the serum endoglin.Clin Cancer Res,2001,7:524-532.

    9 Akagi K,Ikeda Y,Sumiyoshi Y,et al.Estimation of angiogenesis with anti-CD105 immunostaining in the process of colorectal cancer development.Surgery,2002,131:109-113.

    10 Arrieta O,Cacho B,Morales ED,et al.The progressive elevation of alpha fetoprotein for the diagnosis of hepato cellular carcinoma in patients with liver cirrhosis.BMC Cancer,2007,8:28.

    11 于興,胡章華.HCC甲胎蛋白陰性誤診84例分析.中國誤診學(xué)雜志,2003,3:1317.

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