黃精提取物中總皂苷含量的測(cè)定

黃祥元 黃美容

（1.永州職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南 永州 425000；2.安徽科創(chuàng)中藥天然藥物研究所有限責(zé)任公司，安徽 合肥 230088）

黃精屬百合科多年生草本植物，是常用的滋補(bǔ)中藥［1］。近年來(lái)，人們對(duì)黃精屬的研究不斷深入，已從該屬植物中分離得到糖類、皂苷類、黃酮類等化學(xué)成分，其中皂苷類是研究報(bào)道得最多的成分［2］，目前已經(jīng)分離得到了78 種皂苷［3］。黃精皂苷具 有 調(diào)節(jié)血糖［4］、抗腫瘤［5，6］、改善學(xué)習(xí) 記 憶［7］、抗氧化、延緩衰老［8］等生理功效。目前，測(cè)定總皂苷的主要方法是采用分光光度法，該法準(zhǔn)確可靠，重復(fù)性好［9，10］，但是利用分光光度法測(cè)黃精中總皂苷含量的鮮有報(bào)道。

本試驗(yàn)以黃精提取物中有效成分黃精皂苷為檢測(cè)指標(biāo)，采用紫外分光光度法測(cè)定黃精提取物中總皂苷的含量，并進(jìn)行方法學(xué)考察，旨在為黃精提取物中總皂苷的含量測(cè)定提供理論和試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

1.1.1 試驗(yàn)設(shè)備與儀器電子天平：AG135型，梅特勒－托利多儀器有限公司；超聲清洗器：SY－360型，上海寧商超聲儀器有限公司；恒溫水浴鍋：HH－s型，金壇市金城國(guó)勝實(shí)驗(yàn)儀器廠；紫外－可見(jiàn)分光光度計(jì)：UV757CRT 型，上海精科儀器公司。

1.1.2 材料與試劑

黃精片：批號(hào)070601、070602，蕪湖華信生物藥業(yè)有限公司；

人參皂苷Re對(duì)照品：批號(hào)110754－200421，中國(guó)藥品生物制品檢定所；

黃精：天津藥材公司；

硬脂酸鎂：成都市恒昌化工有限責(zé)任公司；

糊精：遼寧東源藥業(yè)有限公司；

所用試劑：均為分析純，市售。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱取人參皂苷Re對(duì)照品8.3mg，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.2 供試品溶液制備 取樣品10片，研細(xì)，取2.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加80%乙醇50 mL，超聲提取30min，濾過(guò)，濾紙、濾渣加80%乙醇洗滌2次，每次15mL，洗液并入濾液。濾液置水浴上蒸干，殘?jiān)?%氫氧化鈉溶液20mL 使其溶解，移入分液漏斗，加水飽和的正丁醇提取3次，每次15mL，合并正丁醇液，加正丁醇飽和的水洗滌2次，每次15mL，正丁醇液置水浴上蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解并定量移入5mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。

1.2.3 測(cè)定波長(zhǎng)選擇 取適量的供試品溶液于10mL具塞試管，于水浴中揮去甲醇，加5%香草醛－冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，搖勻，置60 ℃水浴中加熱15min，立即置冰水浴中冷卻，加入冰醋酸5.0mL，搖勻，以相應(yīng)的試劑為空白，在波長(zhǎng)450～700nm 范圍內(nèi)掃描，供試品溶液在585.2nm 處有最大吸收，故選擇586nm 為測(cè)定波長(zhǎng)。

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備 精密吸取人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.8，0.9mL，分別置10mL具塞刻度試管中，于水浴中揮去甲醇，加5%香草醛－冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，搖勻，置60 ℃水浴中加熱15min，立即置冰水浴中冷卻，加入冰醋酸5.0mL，搖勻，以相應(yīng)的試劑為空白，在586nm 的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)（Y），人參皂苷Re含量為橫坐標(biāo)（X，mg），繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y ＝3.229 9 X ＋0.006 9，相關(guān)系數(shù)r＝0.999 3。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 人參皂苷Re對(duì)照品含量與吸光度相關(guān)性Table 1 Ginsenoside the Re reference substance content absorbance（n ＝8）

結(jié)果表明：人參皂苷Re在0.033 2～0.298 8 mg范圍內(nèi)，其含量與吸光度線性關(guān)系良好，符合技術(shù)要求。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品測(cè)定

精密吸取供試樣品溶液0.5mL，于10mL 具塞刻度試管，置水浴中揮去甲醇，加5%香草醛－冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，搖勻，于60 ℃水浴中加熱15min，立即置冰水浴中冷卻，加入冰醋酸5.0mL，搖勻，顯色。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)含量，計(jì)算總皂苷含量。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.2 陰性對(duì)照試驗(yàn)

按黃精500g，糊精400g，硬脂酸鎂5g的配方，取糊精輔料按樣品測(cè)定方法在波長(zhǎng)450～700nm 范圍內(nèi)掃描，糊精輔料在586nm 處無(wú)最大吸收，表明陰性無(wú)干擾。

表2 總皂苷含量測(cè)定結(jié)果Table 2 Determination of total saponin／（10－2g·g）

2.3 精密度試驗(yàn)

取同一顯色后的供試品溶液，按2.1的方法進(jìn)行測(cè)量，重復(fù)測(cè)定5次，記錄吸光度值，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 精密度試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Precision test results（n ＝5）

結(jié)果表明，精密度試驗(yàn)RSD 為0.2%，表明儀器精密度良好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同 一顯色后的供試品溶液于0，5，10，20，30，40，50min內(nèi)，按2.1 的方法進(jìn)行測(cè)量，分別測(cè)定，記錄吸光度值，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Table 4 Stability test results

結(jié)果表明：穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD 為0.6%，樣品在50min內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

按樣品中總皂苷含量測(cè)定方法及條件，取同一批樣品（070601）分別制備5份供試品溶液，分別測(cè)定，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)含量，計(jì)算總皂苷含量。結(jié)果見(jiàn)表5。

結(jié)果表明：重現(xiàn)性試驗(yàn)RSD 為1.9%，表明重現(xiàn)性良好。

表5 重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果Table 5 Reproducibility of test results（n＝5）

2.6 加樣回收率試驗(yàn)

取已知總皂苷含量為1.145mg／g的華信牌九華山黃精片（070601），6份，分別加入人參皂苷Re對(duì)照品溶液（人參皂苷Re含量為1.35mg／mL）各2mL，按樣品測(cè)定方法制備各供試品溶液，按2.1的方法進(jìn)行測(cè)量，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)含量，計(jì)算總皂苷含量，考察本方法的加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表6。

表6 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 6 Sample recovery test results（n＝6）

結(jié)果表明：本方法的加樣回收率為96.7%，RSD為1.4%。

3 討論

黃精中最主要的兩種化學(xué)成分是皂苷類和黃精多糖類，這兩種成分均可以采用分光光度法來(lái)測(cè)定。故在供試品制備的過(guò)程中加入20mL 的1%氫氧化鈉溶液，其原理是在堿性條件下可以沉淀黃精多糖類成分，從而排除對(duì)黃精總皂苷測(cè)定的影響。目前，測(cè)定總皂苷的方法還是以分光光度法應(yīng)用最廣泛，與其它方法相比，它具有適應(yīng)性廣、穩(wěn)定性高、重現(xiàn)性好的優(yōu)點(diǎn)。

本試驗(yàn)結(jié)果表明：利用紫外分光光度法測(cè)黃精提取物中總皂苷的含量，人參皂苷Re在0.033 2～0.298 8 mg范圍內(nèi)，其含量與吸光度線性關(guān)系良好，穩(wěn)定性好、回收率高，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠。

1 中國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典（一部）［S］.2005 版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：215.

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10 徐佳芮.分光光度法測(cè)定益氣膠囊中總皂苷含量［J］.兒科醫(yī)學(xué)雜志，2010，16（2）：50～71.