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    吸附劑對(duì)豆?jié){中嘌呤物質(zhì)的吸附

    2012-09-07 10:36:26毛玉濤王明力
    食品與機(jī)械 2012年6期
    關(guān)鍵詞:鳥嘌呤腺嘌呤嘌呤

    毛玉濤 王明力 張 洪 和 岳

    (1.貴州大學(xué)化學(xué)與化工學(xué)院,貴州 貴陽(yáng) 550003;2.貴州省發(fā)酵工程與生物制藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,貴州 貴陽(yáng) 550003;3.貴州大學(xué)喀斯特山地果樹研究所,貴州 貴陽(yáng) 550003)

    豆?jié){中含有豐富的植物蛋白,磷脂,維生素B1、B2,煙酸和鐵、鈣等礦物質(zhì)[1],長(zhǎng)期以來(lái)備受國(guó)人青睞,被譽(yù)為21世紀(jì)“餐桌明星”,在歐美享有“植物奶”的美譽(yù)[2]。盡管豆?jié){和豆制品屬于高營(yíng)養(yǎng)低價(jià)位的食物,但患有消化性潰瘍和痛風(fēng)病的患者[3]卻因大豆中嘌呤含量較高(180mg/100g左右)而不宜長(zhǎng)期食用[4,5],因?yàn)猷堰视写龠M(jìn)胃液分泌的作用,且在人體內(nèi)最終代謝為尿酸,若嘌呤代謝紊亂使得過(guò)多尿酸沉積在體內(nèi)就會(huì)引起痛風(fēng)及其并發(fā)癥。因此去除豆?jié){中的嘌呤類物質(zhì),使其適合特殊人群食用,具有重要的研究意義。

    嘌呤是一類帶堿性有兩個(gè)相鄰碳氮環(huán)的含氮有機(jī)大分子物質(zhì),含有極性基團(tuán),可被某些吸附劑作用[6]。食品工業(yè)中常見的吸附劑有硅藻土、活性炭、沸石、殼聚糖和分子篩等。前人[7-9]曾分別成功應(yīng)用活性炭和殼聚糖吸附飼料和啤酒中的嘌呤類物質(zhì),取得了較為顯著的成果。但是對(duì)于豆?jié){中嘌呤物質(zhì)脫除的研究卻未見報(bào)道。本試驗(yàn)比較了不同的吸附劑對(duì)嘌呤物質(zhì)的吸附性能,篩選出效果最佳的吸附劑,并深入研究其對(duì)豆?jié){中嘌呤類物質(zhì)的吸附效果。

    1 材料與方法

    1.1 材料與儀器

    黃豆:產(chǎn)地安徽蚌埠;

    腺嘌呤標(biāo)樣、鳥嘌呤標(biāo)樣、黃嘌呤標(biāo)樣、次黃嘌呤標(biāo)樣:色譜純,鼎國(guó)生化試劑有限公司;

    食品級(jí)硅膠、硅藻土、尼龍66(聚己二酰己二胺)、PVPP(交聯(lián)聚維酮)、活性炭、殼聚糖、分子篩及人造沸石:天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)中心;

    甲酸、三氟乙酸、氫氧化鉀、磷酸:分析純,天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所;

    甲醇、異丙醇:色譜純,天津市登科化學(xué)試劑有限公司;

    高效液相色譜儀:Agilent 1100,美國(guó) Applied Biosystems公司;

    超聲波清洗器:SG2200HPT,上海冠特超聲儀器有限公司;

    豆?jié){機(jī):JYL-B050,九陽(yáng)豆?jié){機(jī)有限公司;

    恒溫磁力攪拌器:CJJ-781,江蘇省金壇市恒豐儀器廠;

    電子精密天平:AL204,奧豪斯儀器有限公司;

    精密酸度計(jì):PHS-25B,上海大普儀器有限公司;

    數(shù)顯恒溫水浴鍋:DF-101S,金壇市正基儀器有限公司;

    離心機(jī):TDL-40B型,上海安亭科學(xué)儀器廠。

    1.2 試驗(yàn)方法

    1.2.1 吸附劑的篩選 分別精確稱量50mg腺嘌呤、鳥嘌呤、黃嘌呤和次黃嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品溶于溶于1 000mL 0.1mol/L的鹽酸溶液中,取上述各溶液100mL,加入100mg吸附劑,振蕩均勻,靜置一定時(shí)間,過(guò)濾,比較不同吸附劑對(duì)4種嘌呤物質(zhì)的吸附效果。選出效果最佳的吸附劑對(duì)豆?jié){進(jìn)行嘌呤吸附的研究。

    1.2.2 豆?jié){中嘌呤物質(zhì)的脫除工藝 取50mL研磨好的豆?jié){于100mL燒瓶中,加入一定量的吸附劑,攪拌均勻,在一定的pH下吸附一段時(shí)間,冷卻后離心(2 500r/min),過(guò)濾,待分析。

    分別考察吸附劑添加量、吸附時(shí)間、吸附溫度及反應(yīng)pH值對(duì)豆?jié){嘌呤物質(zhì)吸附率的影響,并通過(guò)正交試驗(yàn)優(yōu)化工藝條件。

    1.2.3 分析方法 利用高效液相色譜[10,11]對(duì)豆?jié){中嘌呤的含量進(jìn)行測(cè)定。色譜分離條件:Zorbax C18反相柱(4.6mm×250mm,5.0μm)色譜柱,以0.02mol/L磷酸二氫鉀緩沖液(pH 3.6)作為流動(dòng)相,流速0.8mL/min,柱溫25℃,進(jìn)樣量10μL,檢測(cè)波長(zhǎng) (λ1)為254nm[11,12]。

    取10mL樣品于50mL燒瓶中,加入10mL三氟乙酸與甲酸1∶1的混合液,在98~101℃油浴鍋中水解1h,然后冰浴冷卻,并用15mol/L KOH溶液中和,直至pH調(diào)至7,再用H3PO4調(diào)pH至3,定容至50mL,用0.22μm濾膜過(guò)濾,在254nm波長(zhǎng)處測(cè)定,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線求出嘌呤的含量[13-16]。

    根據(jù) GB 5009.5——2010《食品中蛋白質(zhì)測(cè)定方法》,利用半微量凱氏定氮法分別對(duì)吸附處理前后的豆?jié){進(jìn)行蛋白質(zhì)含量的測(cè)定,并與QB/T 2132——2008《植物蛋白飲料 豆奶(豆?jié){)和豆奶飲料》標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行對(duì)照。

    1.2.4 嘌呤吸附率的計(jì)算 據(jù)報(bào)道[3]大豆中含腺嘌呤0.732 3mg/g,鳥嘌呤0.821 2mg/g,黃嘌呤0.020 2mg/g,次黃嘌呤0.031 8mg/g。由此可見大豆中的嘌呤物質(zhì)主要以腺嘌呤和鳥嘌呤為主,黃嘌呤和次黃嘌呤的含量微乎極微,因此本試驗(yàn)主要考察處理前后腺嘌呤和鳥嘌呤的含量變化。

    吸附處理前后腺嘌呤和鳥嘌呤含量總和的變化量稱為嘌呤吸附率。根據(jù)樣品中腺嘌呤和鳥嘌呤的峰面積,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出其濃度,豆?jié){中嘌呤物質(zhì)的吸附率按式(1)計(jì)算:

    式中:

    X——豆?jié){中嘌呤物質(zhì)的吸附率,%;

    C0—— 處理前豆?jié){中嘌呤的濃度,mg/mL;

    C——處理后豆?jié){中嘌呤的濃度,mg/mL。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 不同吸附劑對(duì)4種嘌呤的吸附結(jié)果

    8種吸附劑對(duì)4種嘌呤的吸附效果見表1。

    表1 不同吸附劑對(duì)4種嘌呤的吸附效果Table 1 Different types of sorbments on the removal of purine /%

    由表2可知,8種吸附劑對(duì)4種嘌呤都具有一定的吸附效果,活性炭的吸附效果尤其顯著,特別是對(duì)黃嘌呤和次黃嘌呤的吸附效果更加明顯,吸附效果次于活性炭的是殼聚糖。其它6種吸附劑對(duì)4種嘌呤物質(zhì)的吸附效果都不理想。故選擇活性炭作為豆?jié){嘌呤物質(zhì)的吸附劑,進(jìn)行深入研究。

    2.2 活性炭添加量對(duì)豆?jié){嘌呤吸附率的影響

    活性炭的添加量對(duì)豆?jié){中嘌呤吸附率的影響見圖1。

    圖1 活性炭的添加量對(duì)豆?jié){中嘌呤脫除率的影響Figure 1 Effect of removal yield of purine in Soya bean milk on the addition of activated carbon

    由圖1可知,隨著活性炭加入量的不斷增大,嘌呤的去除率逐漸增大,當(dāng)活性炭濃度達(dá)到1.5g/L時(shí),去除效果達(dá)到最大。

    2.3 反應(yīng)溫度對(duì)豆?jié){嘌呤吸附率的影響

    反應(yīng)溫度對(duì)豆?jié){中嘌呤吸附率的影響見圖2。

    圖2 反應(yīng)溫度對(duì)豆?jié){中嘌呤吸附率的影響Figure 2 Effect of removal yield of purine in Soya bean milk on temperature

    由圖2可知,隨著溫度的不斷升高,豆?jié){中嘌呤的去除率呈現(xiàn)先增加后減少的狀態(tài),在70℃時(shí)達(dá)到最高,繼續(xù)升高溫度,吸附率反而下降。這是由于活性炭吸附為物理吸附,吸附過(guò)程是放熱過(guò)程,溫度過(guò)高反而不利于吸附,因此,70℃時(shí)吸附效果最好。

    2.4 反應(yīng)pH對(duì)豆?jié){嘌呤吸附率的影響

    反應(yīng)pH對(duì)豆?jié){中嘌呤吸附率的影響見圖3。

    圖3 反應(yīng)pH對(duì)豆?jié){中嘌呤吸附率的影響Figure 3 Effect of removal yield of purine in Soya bean milk on pH

    由圖3可知,隨著pH的逐漸增大,嘌呤的吸附率先增大后減小,在pH為8時(shí)達(dá)到最大,但趨勢(shì)并不是很明顯,考慮到豆?jié){本身的pH為6.8左右,與最大值間差距不大,因此在深入活性炭對(duì)豆?jié){嘌呤進(jìn)行去除的探索中,可維持反應(yīng)pH值在豆?jié){本身pH值(6.8)左右來(lái)進(jìn)行研究。

    2.5 反應(yīng)時(shí)間豆?jié){嘌呤吸附率的影響

    反應(yīng)時(shí)間對(duì)豆?jié){中嘌呤吸附率的影響見圖4。

    由圖4可知,隨著反應(yīng)時(shí)間的增加,嘌呤吸附率呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),在50min時(shí)達(dá)到最大。

    2.6 正交試驗(yàn)結(jié)果

    選擇活性炭作為豆?jié){嘌呤物質(zhì)的吸附劑,分別考察活性炭的添加量、反應(yīng)溫度、pH值和反應(yīng)時(shí)間4個(gè)因素對(duì)豆?jié){中嘌呤物質(zhì)吸附率的影響。根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果,確定各因素對(duì)應(yīng)水平見表2。

    根據(jù)表2確定的各個(gè)因素,進(jìn)行正交試驗(yàn),得到結(jié)果見表3。

    圖4 反應(yīng)時(shí)間對(duì)豆?jié){中嘌呤吸附率的影響Figure 4 Effect of removal yield of purine in Soya bean milk on time

    表2 因素水平表Table 2 Different Levels of Fators

    表3 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析Table 3 Orthogonal experiment and results analysis

    由表3可知,影響豆?jié){中嘌呤去除率的因素主次為D>A>B>C,最佳配比為A3B1C1D3,但由單因素試驗(yàn)可知,當(dāng)活性炭的添加量大于1.5g/L時(shí),嘌呤吸附率的增加趨勢(shì)已不明顯,且考慮到活性炭濃度越高,其對(duì)豆?jié){的品質(zhì)影響也越大,所以確定最佳添加量為1.5g/L,pH值為6.0,60℃恒溫靜置60min。在此條件下進(jìn)行3次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),最終得到豆?jié){中嘌呤的平均去除率為48.878%。經(jīng)過(guò)凱氏定氮測(cè)得未經(jīng)處理的豆?jié){蛋白質(zhì)含量為6.826%,處理過(guò)的豆?jié){蛋白質(zhì)含量為5.122%,僅降低了1.135%。

    3 結(jié)論

    通過(guò)吸附作用的機(jī)理,采用不同的吸附劑對(duì)4種嘌呤物質(zhì)進(jìn)行吸附,活性炭的吸附效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于其它吸附劑。選擇活性炭作為吸附劑,對(duì)豆?jié){中的嘌呤類物質(zhì)進(jìn)行吸附研究。結(jié)果表明,在活性炭添加濃度為1.5g/L,pH值為6.0,60℃恒溫靜置60min時(shí),能有效去除豆?jié){中的嘌呤物質(zhì),吸附率達(dá)到48.878%。經(jīng)過(guò)凱氏定氮測(cè)得處理過(guò)的豆?jié){蛋白質(zhì)含量?jī)H降低了1.135%??煽紤]采用該方法,為痛風(fēng)及其并發(fā)癥患者研制低嘌呤保健豆?jié){,并擴(kuò)大豆制品的消費(fèi)市場(chǎng),創(chuàng)造更大的經(jīng)濟(jì)效益。

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    3 劉少林.大豆中嘌呤含量的測(cè)定及分離研究[D].安徽:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

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