布渣葉的薄層色譜鑒別及紅外光譜分析＊

孫冬梅 ，譚志燦 ，畢曉黎 ，羅文匯

(1.廣東省中醫(yī)研究所，廣東 廣州 510095;2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)，廣東 廣州 510405)

布渣葉，又名破布葉、麻布葉、泡卜布、爛布渣、山茶葉等，為椴樹科植物破布葉 Microcos paniculata L.的干燥葉，盛產(chǎn)于我國南方，尤以兩廣地區(qū)資源豐富。本品味微酸、性涼、無毒，是廣東涼茶的主要組成藥材之一，具有清熱利濕、健胃消滯的功效，用于感冒發(fā)熱、黃疸、食欲不振、消化不良、脘腹脹痛、泄瀉、瘡瘍、蜈蚣咬傷等[1－4]。作為兩廣地區(qū)民間藥物，布渣葉應(yīng)用廣泛，具有良好的藥用和食用價值。研究發(fā)現(xiàn)，布渣葉藥材含有黃酮類、生物堿、揮發(fā)油、有機(jī)酸、糖類、酚類等成分，具有保護(hù)心血管、調(diào)血脂、抗衰老及殺蟲等作用，其中黃酮類成分為布渣葉中主要活性成分[5－6]。目前，尚無文獻(xiàn)報道布渣葉的紅外光譜分析及其黃酮類成分的薄層色譜鑒別方法。本試驗中采用薄層色譜法和紅外光譜法對15個不同產(chǎn)地布渣葉進(jìn)行鑒別分析，建立了布渣葉黃酮類成分的薄層色譜鑒別方法，并對布渣葉藥材進(jìn)行了紅外光譜分析，旨在為藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。

1 儀器與材料

CAMAG Automatic TLC Sampler 4薄層自動點樣儀(瑞士);CAMAG Reprostar 3薄層成像系統(tǒng)(瑞士);CAMAG TLC Scanner 3薄層掃描儀;DHG－9203A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實驗設(shè)施有限公司);HWS26型電熱恒溫水浴鍋(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)。布渣葉(批號及產(chǎn)地來源見表1)，經(jīng)廣東省中醫(yī)研究所劉法錦教授鑒定為正品;布渣葉對照藥材(批號為121218－200402)、山柰素對照品(批號為110861－200808)、牡荊苷對照品(批號為111687－200602)均購于中國藥品生物制品檢定所;異牡荊苷(成都瑞芬思生物科技有限公司，批號為Y－127－110705);硅膠G薄層板(浙江省路橋四甲生化塑料廠);甲苯、乙酸乙酯、甲酸、甲醇等試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 山柰素的薄層色譜鑒別

取各批次布渣葉粉末各1 g，加水50 mL，加鹽酸2 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液濃縮至約30 mL，用乙酸乙酯振搖提取2次(30 mL，20 mL)，合并乙酸乙酯溶液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取布渣葉對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取山柰素對照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法[2010年版《中國藥典(一部)》附錄ⅥB]試驗，吸取上述溶液各2 μL，分別點于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸(9∶3∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，于105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜和對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，見圖1 A。

表1 布渣葉藥材來源

2.2 牡荊苷和異牡荊苷的薄層色譜鑒別

取各批次布渣葉粉末各1 g，加水50 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液濃縮至約30 mL，用乙酸乙酯振搖提取2次(30 mL，20 mL)，合并乙酸乙酯溶液，蒸干，殘渣加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取布渣葉對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。再取牡荊苷和異牡荊苷對照品，加甲醇分別制成每1 mL含0.2 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各2 μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇－水(100∶17∶13)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以3%三氯化鋁乙醇溶液，于105℃加熱數(shù)分鐘，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品溶液色譜中，在與對照藥材溶液色譜和對照品溶液色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，見圖1 B。

圖1 不同產(chǎn)地來源布渣葉薄層色譜圖

2.3 紅外光譜分析

儀器參數(shù):光譜范圍為4 000～400 cm－1，自動大氣背景扣除，分辨率為4 cm－1，信號掃描累加次數(shù)為32次，自動增益。

方法:取各批次布渣葉樣品粉末(過九號篩)約1 mg，加KBr 200 mg，置瑪瑙研缽中，在紅外光燈下混合研勻，均勻加入壓片模具內(nèi)，于35 MPa壓力下進(jìn)行壓片，持續(xù)1～3 min，取出，測定。每個樣品測定5次，作平均譜圖進(jìn)行分析。

結(jié)果:布渣葉平均譜圖(見圖 2)，在 3 412，2 921，2 852，1 731，1 632，1 518，1 445，1 376，1 318，1 245，1 155，1 062，896，781，584，474 cm－1處有吸收峰。3 412 cm－1處的吸收峰為締合羥基的伸縮振動，由黃酮、鞣質(zhì)等酚羥基、糖苷中的糖羥基和水分中的羥基疊加而成;2 921，2 852 cm－1處的吸收峰為亞甲基C=H反對稱伸縮振動吸收峰;1 731 cm－1處的吸收峰為黃酮、有機(jī)酸和揮發(fā)油中C=O伸縮振動的疊加峰;1 632，1 518 cm－1處的吸收峰為C=C或芳環(huán)骨架振動的疊加峰;1 445，1 376，1 318 cm－1處的吸收峰是羥基和亞甲基的彎曲振動;1 245～1 062 cm－1處的吸收峰主要為糖苷類成分的特征吸收;896～474 cm－1的吸收峰為布渣葉化學(xué)成分所含苯環(huán)面外彎曲振動與環(huán)彎曲振動引起的特征指紋吸收峰[5－11]。

圖2 布渣葉藥材紅外特征光譜圖

3 討論

山柰素的薄層色譜鑒別研究中，參考《中國藥典》中木賊和瓦松的薄層色譜鑒別中樣品制備方法，分別對比了75%甲醇和水兩種溶劑，結(jié)果表明，75%甲醇制備的供試品所得色譜圖中葉綠素斑點干擾嚴(yán)重，因此選擇后者作為提取溶劑，既安全可靠，又節(jié)約成本。另采用《中國藥典》中木賊、瓦松和金錢草的薄層色譜條件，結(jié)果均不理想。采用文中所述薄層色譜條件，斑點清晰，分離效果好，靈敏度高。

牡荊苷和異牡荊苷的薄層色譜鑒別研究中，由于布渣葉藥材含有較多葉綠素，對薄層色譜鑒別產(chǎn)生影響。文獻(xiàn)一般采用丙酮、乙醚及石油醚等溶劑進(jìn)行索氏回流，除去葉綠素。本試驗嘗試了上述方法，結(jié)果表明，采用丙酮除去葉綠素的同時，黃酮類成分也會大量丟失;采用乙醚或石油醚索式回流除去葉綠素，效果亦不佳。最終采用文中方法制備供試品溶液，去除葉綠素的效果較好，且薄層色譜熒光斑點清晰。

在展開劑的選擇中，由于黃酮類成分極性較大，因此采用極性較大的展開系統(tǒng)。本試驗分別對比了極性較大的酸性、堿性和中性展開劑，結(jié)果表明采用中性展開劑展開效果最佳，所得熒光斑點豐富，分離度好，牡荊苷和異牡荊苷熒光斑點 Rf值適中。

紅外光譜技術(shù)操作簡便易行，樣品處理簡單，是一種快速有效的分析鑒別方法。布渣葉藥材主要含有黃酮、生物堿、有機(jī)酸、揮發(fā)油、鞣質(zhì)、酚類等成分，其紅外光譜特征吸收峰是由上述成分疊加而成，具有專屬性。因此，通過比較布渣葉紅外光譜中16個特征吸收峰可以達(dá)到快速鑒別的目的。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:88－89.

[2]廣東省食品藥品監(jiān)督管理局.廣東省中藥材標(biāo)準(zhǔn)(第一冊)[M].廣州:廣東科學(xué)技術(shù)出版社，2004:66－68.

[3]江蘇新醫(yī)學(xué)院.中藥大辭典(下冊)[M].上海:上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1986:1 824.

[4]《中藥商品知識》編寫組.中藥商品知識(中冊)[M].廣州:廣東科學(xué)技術(shù)出版社，1989:129.

[5]石玲艷.破布葉的化學(xué)鑒別方法[J].廣西中醫(yī)藥，1993，16(2):40－41.

[6]曾聰彥，吳惠妃，郭展榮.布渣葉化學(xué)成分定性鑒別的實驗研究[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，4(3):175－176.

[7]羅集鵬.布渣葉黃酮類成分的研究[J].中草藥，1993，24(9):455.

[8]Bandara KA，Kumar V，Jacobsson U，et al.Insecticidal piperidine alkaloid from Microcos paniculata stem bark[J].Phytochemistry，2000，54(1):29－32.

[9]馮世秀，劉梅芳，魏孝義，等.布渣葉中三萜和黃酮類成分的研究[J].熱帶亞熱帶植物學(xué)報，2008，16(1):51－56.

[10]畢和平，韓長日，王 芳，等.破布葉葉片中揮發(fā)油的化學(xué)成分研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2006，27(3):124－126.

[11]羅集鵬，張麗萍，楊世林，等.布渣葉的生物堿類成分研究[J].藥學(xué)學(xué)報，2009，44(2):150－153.