系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者血漿干擾素α的表達及臨床意義＊

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種累及多系統(tǒng)的自身免疫病，患者體內(nèi)存在多種自身抗體，抗體與抗原結(jié)合形成免疫復合物，沉積于靶組織、激活補體，引起一系列炎癥介質(zhì)釋放從而造成器官組織的損傷。其中干擾素（interferon，IFN）-α與SLE發(fā)病及疾病活動密切相關(guān)。本研究通過檢測SLE患者血清IFN－α水平，進一步分析其臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 所選病例均為2010年7～12月本院風濕免疫科就診的SLE患者，共57例，診斷符合1997年美國風濕病協(xié)會標準［1］，其中，女55例，男2例；平均（34.03±12.81）歲；對照組31例為本院健康志愿者，其中，女30例，男1例，平均（32.94±7.46）歲。兩組性別、年齡均衡，差異無統(tǒng)計學意義。本實驗獲得本單位倫理委員會批準，所有受試對象均知情同意。SLE活動性指數(shù)（SLE disease activity index，SLEDAI）的評分標準參見文獻方法［2］。

1.2 方法 采清晨空腹靜脈血5mL，肝素抗凝。離心后，取血漿，置PC管中－80℃保存，IFN-α的檢測采用雙抗體夾心ELISA法，試劑盒購自美國Bender公司，具體操作步驟嚴格按試劑盒說明書進行。分別根據(jù)SLE患者特異性抗體和典型癥狀的有無，將其分成不同組別。

1.3 統(tǒng)計學處理 所有數(shù)據(jù)采用相關(guān)統(tǒng)計軟件處理，定量資料正態(tài)分布以±s表示，偏態(tài)分布以中位數(shù)（P25～P75）表示。兩樣本均數(shù)的比較采用t檢驗或Mann-Whitney檢驗。多樣本均數(shù)的比較采用ANOVA檢驗或Kruskal-Wallis檢驗。相關(guān)分析采用Pearson檢驗或Spearman檢驗。檢驗水準α取0.05。

2 結(jié) 果

SLE患者組血漿IFN－α表達水平高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＝0.021），見表1。根據(jù)SLEDAI將57例SLE分成兩組：低活動組（27例，SLEDAI＜10）和高活動組（30例，SLEDAI≥10）。將對照組、低活動組、高活動組患者血清IFN-α表達水平進行比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＝0.032），見表1。將60例SLE患者血漿IFN-α水平與臨床定量指標ESR、24h尿蛋白定量、補體（C3和C4）、血IgG、抗核抗體（antinuclear antibodies，ANA）半定量、抗ds-DNA抗體半定量、SLEDAI等作相關(guān)性分析。IFN-α水平與ANA半定量、抗ds-DNA抗體半定量、C3、IgG差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；而與 ESR、C4、SLEDAI、24h尿蛋白定量等差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。比較不同組別之間血漿IFN－α表達水平的差異，見表3。其中血漿IFN－α表達水平在抗核小體抗體、抗U1snRNP抗體陽性組要分別高于陰性組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。在SLE患者中，有肝酶升高組、有血液系統(tǒng)病變組要分別高于相應(yīng)的無癥狀組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。

表1 各組IFN－α表達水平

表2 IFN-α表達水平與臨床指標的相關(guān)性分析

表3 SLE患者不同組別之間血漿IFN-α表達水平的差異

3 討 論

SLE是自身免疫性疾病的原型代表，其患者體內(nèi)存在明顯的免疫調(diào)節(jié)紊亂及多種細胞因子的異常表達。其中IFN－α是一類具有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)作用的細胞因子。以往文獻報道，SLE患者IFN－α在血漿中水平升高［3］，而且一些本身不伴有自身免疫性疾病的患者經(jīng)IFN-α治療后會出現(xiàn)抗ANA、抗dsDNA 抗體，甚至 SLE 綜合征［4－5］。

本研究發(fā)現(xiàn)SLE患者組血漿IFN-α表達水平高于對照組，這與Ytterberg和Schnitzer［3］研究結(jié)果一致。雖未發(fā)現(xiàn)IFN-α與SLEDAI具有統(tǒng)計學意義的相關(guān)性，但發(fā)現(xiàn)IFN-α表達水平在病情高活動組與低活動組、對照組之間存在組間差異，說明IFN－α與SLE病情具有一定的相關(guān)性。這在鄧姍等［6］的研究中表現(xiàn)更加充分，他們發(fā)現(xiàn)IFN－α與SLEDAI具有統(tǒng)計學意義的相關(guān)性。

本研究顯示，IFN-α水平與ANA半定量、抗ds-DNA抗體半定量、C3、IgG有統(tǒng)計學意義相關(guān)性，而與紅細胞沉降率（erythrocyte sedimentatum rate，ESR）、C4、SLEDAI、24h尿蛋白定量等無相關(guān)性。另外，血漿IFN－α表達水平在抗核小體抗體、抗U1snRNP抗體陽性組要分別高于陰性組，有肝酶升高組、有血液系統(tǒng)病變組要分別高于相應(yīng)的無癥狀組。國內(nèi)外的相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)IFN-α水平與不同臨床指標的相關(guān)性。例如，顧鐳等［7］研究發(fā)現(xiàn)IFN－α水平與免疫學指標抗ds-DNA抗體水平亦呈正相關(guān)，與C3水平負相關(guān)。鄧姍等［6］發(fā)現(xiàn)血漿IFN－α水平與SLEDAI積分和抗dsDNA抗體水平呈正相關(guān)，與補體C3、C4和白細胞數(shù)量呈負相關(guān)；血漿IFN-α水平與患者發(fā)熱和面部紅斑有關(guān)。最新 Weckerle等［8］的研究也發(fā)現(xiàn)IFN-α水平與抗ds-DNA抗體、抗RNP抗體正相關(guān)。另外，Lovgren等［9］發(fā)現(xiàn)從狼瘡患者血漿中分離出的IgG同細胞壞死產(chǎn)物或純化snRNP抗體共同存在時可刺激漿細胞樣樹突狀細胞（plasmacytoid dendritic cells，pDC）產(chǎn)生IFN－α，這種激活I(lǐng)FN－α的作用是通過pDC內(nèi)涵體膜表面的Toll樣受體（Toll like receptor，TLR）7受體來實現(xiàn)的。全基因掃描也證實大多數(shù)狼瘡患者存在IFN基因標簽［10］，與一些嚴重的并發(fā)癥相關(guān)，比如狼瘡腎炎和血液系統(tǒng)損害。相對成年患者，兒童SLE患者通常更易合并系統(tǒng)損害，在疾病早期階段也顯示出IFN-α的高關(guān)聯(lián)性［10］。這些均提示IFN-α的活化在疾病早期進程中的重要作用。

關(guān)于IFN-α參與SLE發(fā)病的具體機制，現(xiàn)有的研究結(jié)果表明，Ⅰ型IFN信號對T細胞、B細胞及DC細胞具有調(diào)節(jié)效應(yīng)，通過打破自身抗原免疫耐受、促進自身抗體和免疫復合物的形成，在SLE發(fā)病過程中起著重要作用［11－12］。病毒感染或其他一些環(huán)境誘因可導致IFN－α的產(chǎn)生及死亡細胞成分的釋放。這些凋亡和壞死細胞的胞外自身抗原啟動B細胞產(chǎn)生自身抗體。同時會形成免疫復合物，作為內(nèi)源性的誘導劑，免疫復合物可以通過BCR和TLR激活B細胞分泌自身抗體，還可通過FcγR和TLR誘導pDC分泌更多的IFN－α。IFN-α可以促進B細胞分化以及向漿細胞的成熟，促進Ig類型的轉(zhuǎn)化，延長記憶細胞的生存。IFN-α還可以增加自身抗原（如Ro52［13］）的暴露，誘導DC細胞成熟，成熟的DC可以捕獲核抗原，并遞呈給CD4＋T細胞。活化的T細胞刺激自身反應(yīng)性B細胞產(chǎn)生自身抗體，結(jié)果導致核抗原耐受喪失、自身抗體分泌及自身免疫復合物的形成，免疫復合物又可以通過TLR7、TLR9進一步刺激pDC產(chǎn)生更多的IFN-α。另一方面成熟的DC細胞還可以激活CD8＋T細胞。細胞毒癥T細胞在細胞炎性因子的作用下趨化到病原體存在的部位導致組織損傷產(chǎn)生大量核小體，被pDC和成熟的DC捕獲，進一步增強自身免疫反應(yīng)過程。相應(yīng)的，傳統(tǒng)DCs和巨噬細胞上調(diào)表達共刺激分子，并更加有效地抗原呈遞。另外，IFN-α誘導的趨化因子也與SLE患者疾病活動密切相關(guān)［14］。基于IFN－α在SLE患者體內(nèi)的高表達以及在發(fā)病中的潛在機制，目前已有研究針對IFN－α對SLE進行干預［15－16］。

本研究采用經(jīng)典的雙抗體夾心ELISA法檢測到IFN-α在SLE患者中的異常表達，且與疾病活動程度及臨床特異性指標有一定的相關(guān)性。進一步闡明了IFN-α及相關(guān)信號通路在SLE發(fā)病機制中的作用，對SLE患者病情活動判斷、復發(fā)及治療具有一定價值，也為診斷和治療SLE了提供新的思路和方法。

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