RP－HPLC法測(cè)定刺五加片中綠原酸的含量

趙陶鈞，于風(fēng)平，代秀梅

(1.山東僑聯(lián)醫(yī)院，山東淄博255086;2.淄博市藥品檢驗(yàn)所，山東淄博255086)

刺五加片由刺五加浸膏加輔料適量壓制成片，其臨床上主要用于益氣健脾，補(bǔ)腎安神，在治療黃褐斑、低血壓等疾病及緩解海洛因成癮［1］方面療效顯著?！吨袊?guó)藥典》2010年版通過(guò)測(cè)定刺五加片中紫丁香苷的含量控制其質(zhì)量，但紫丁香苷的含量與生產(chǎn)過(guò)程有關(guān)［2］，因此其含量并不能很好地反映原料的投料量。有文獻(xiàn)對(duì)刺五加片中的總黃酮［3］、異嗪皮啶［4］的含量進(jìn)行測(cè)定，但是刺五加片中的總黃酮的測(cè)定方法準(zhǔn)確度低，而刺五加片中的異嗪皮啶的含量較低，這些方法都不能較好的控制刺五加片中刺五加浸膏的投料量。本文建立了刺五加片中綠原酸測(cè)定的高效液相色譜方法，為刺五加片的質(zhì)量控制提供了科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent Technologies 1200 Series;綠原酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào) 110753－200413);刺五加片(20070801、20080401、20071105，市售樣品);乙腈為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Zorbax SB C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)，流動(dòng)相:0.2%甲酸 －乙腈(94∶6)，流速:1.0 mL· min－1，檢測(cè)波長(zhǎng):327 nm，柱溫:30℃，進(jìn)樣量:20 μL，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 對(duì)照品(A)與樣品(B)色譜圖 1.綠原酸

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品儲(chǔ)備液 精密稱取綠原酸對(duì)照品(五氧化二磷減壓干燥12 h)13.75 mg，置200 mL量瓶中，用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.2.2 供試品溶液 取本品研勻，精密稱取細(xì)粉適量(相當(dāng)于原藥品10片量)，置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，超聲30 min，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.3 對(duì)照品溶液 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液4 mL，置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得。

2.3 線性關(guān)系考察 取對(duì)照品儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相分別稀釋成68.75、34.38、17.19、8.594、4.297 μg·mL－1的溶液，按照“2.1色譜條件”進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，記錄綠原酸的峰面積。綠原酸的濃度C(μg·mL－1)為橫坐標(biāo)，綠原酸的峰面積A為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A=55.13C－3.521(R2= 0.999 9)。試驗(yàn)結(jié)果表明，綠原酸濃度在4.297～68.75 μg ·mL－1范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，測(cè)定，計(jì)算。結(jié)果綠原酸峰面積RSD為0.2%。表明儀器精密度良好。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試品溶液，分別在0、1、2、4、6、8 h各進(jìn)樣1次，結(jié)果峰面積RSD為0.8%，說(shuō)明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 取本品(批號(hào)20080401，平均片重: 0.512 8 g，綠原酸含量為0.185 mg/片)研勻，精密稱取細(xì)粉適量(相當(dāng)于原藥品1片量)，置25 mL量瓶中，加流動(dòng)相適量，分別加對(duì)照品儲(chǔ)備液3、4、5 mL超聲30 min，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液進(jìn)行測(cè)定。記錄色譜圖，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.7 樣品測(cè)定 取樣品3批，按照上述方法制備供試品溶液進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 三批樣品含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 波長(zhǎng)的選擇 通過(guò)二極管陣列檢測(cè)器對(duì)綠原酸對(duì)照品溶液在190～400 nm之間進(jìn)行光譜掃描，選擇327 nm最大吸收波長(zhǎng)處作為檢測(cè)波長(zhǎng)(圖2)。

圖2 綠原酸對(duì)照品溶液的紫外光譜圖

3.2 流動(dòng)相的選擇 作者經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)綠原酸與紫丁香苷的保留行為較為接近，不易完全分離，本文流動(dòng)相中的有機(jī)相比例較小，主要是為了樣品中的綠原酸與紫丁香苷實(shí)現(xiàn)完全分離。同時(shí)在流動(dòng)相中加入0.2%的甲酸，能夠明顯改善綠原酸的峰形。

［1］ 黃德彬，劉希林，余昭芬，等.藿香正氣口服液合用刺五加片緩解海洛因成癮戒斷癥狀的療效觀察［J］.中成藥，2004，26(5):382－385.

［2］ 劉建娣，梁瓊麟，羅國(guó)安，等.刺五加注射液指紋圖譜的建立及其在質(zhì)量控制中的應(yīng)用［J］.中成藥，2006，28 (1):3－5.

［3］ 張正康.分光光度法測(cè)定刺五加片中總黃酮含量［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2001，12(1):41－42.

［4］ 張濤.刺五加片質(zhì)量考察［J］.中藥材，2001，24(8):597－598.