湖南省2006～2010年實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)結(jié)果分析

覃 迪，蔡 亮，湛志飛，劉建高，夏 昕，劉佳惠，劉運(yùn)芝，張 紅

（湖南省疾病預(yù)防控制中心，長(zhǎng)沙 410005）

二十一世紀(jì)是生物學(xué)的世紀(jì)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物是生命科學(xué)研究的基礎(chǔ)和支撐，是醫(yī)學(xué)教學(xué)和生物醫(yī)學(xué)研究不可缺少的實(shí)驗(yàn)材料，隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的發(fā)展和生命科學(xué)研究的突飛猛進(jìn)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技事業(yè)和職業(yè)健康與安全已越來越被人們所重視。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量可直接影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果和研究課題的成敗，決定課題的可行性、重復(fù)性和科學(xué)性。一些人獸共患性疾病，甚至直接威脅動(dòng)物飼養(yǎng)人員和科研人員的健康與生命安全。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量檢測(cè)是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量評(píng)估的主要手段，是對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)行科學(xué)管理、按質(zhì)論價(jià)的重要依據(jù)。定期對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行微生物學(xué)質(zhì)量監(jiān)測(cè)是對(duì)飼養(yǎng)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施及管理最終結(jié)果的檢驗(yàn)，是保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量的有效措施。依據(jù)我國(guó)《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》，我們對(duì)2006～2010年間湖南省相關(guān)科研單位和各大藥廠飼養(yǎng)、使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)抽樣檢測(cè)，為進(jìn)一步加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量管理提供了科學(xué)依據(jù)，現(xiàn)將微生物學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果報(bào)告如下：

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本來源

所有檢測(cè)標(biāo)本單純隨機(jī)抽取于2006～2010年湖南省相關(guān)科研單位和各大藥廠飼養(yǎng)和使用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（大鼠、小鼠、豚鼠及新西蘭兔）。（大鼠、小鼠的生產(chǎn)廠家為中南大學(xué)動(dòng)物學(xué)部（SCXK［湘］2006-0002）；大鼠、小鼠、兔的生產(chǎn)廠家為南華大學(xué)動(dòng)物學(xué)部（SCXK［湘］2004-0009及SCXK［湘］2010-004）；小鼠、豚鼠、豚鼠及兔的生產(chǎn)廠家為湖南紫光南岳制藥有限公司（SCXK［湘］2004-0005及SCXK［湘］2009-006）；大鼠、小鼠、豚鼠、兔的生產(chǎn)廠家為長(zhǎng)沙市開福區(qū)東創(chuàng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技服務(wù)部（SCXK［湘］2006-001）；大鼠、小鼠、豚鼠、兔的生產(chǎn)廠家為湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（SCXK［湘］2009-004）。

1.2 抽樣方法及數(shù)量

按照GB 14922.2-2001《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物等級(jí)及監(jiān)測(cè)》［1］進(jìn)行，在每一繁殖單元（群體 100只以上）在不同方位進(jìn)行多點(diǎn)采樣，按相應(yīng)級(jí)別包裝、運(yùn)輸，包裝箱上注明品種、級(jí)別、數(shù)量及檢測(cè)項(xiàng)目。

1.3 標(biāo)本采集與檢測(cè)項(xiàng)目

及時(shí)無菌采集，避免交叉污染。檢測(cè)項(xiàng)目包括病毒、細(xì)菌。

1.4 檢測(cè)方法與結(jié)果判定

所有檢測(cè)按照 GB/T 14926.1～64-2001《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 微生物學(xué) 寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法》［2］和 GB/T 14926.21-2008［3］進(jìn)行檢測(cè)，按照 GB 14922.2-2001《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物等級(jí)及監(jiān)測(cè)》進(jìn)行結(jié)果判定。

2 結(jié)果

2.1 合格率

SPF級(jí)大鼠、SPF級(jí)小鼠、普通級(jí)新西蘭兔和普通級(jí)豚鼠合格率分別為 85.09％、83.64％、69.70％、100％，批 合 格 率 分 別 為 73.68％，77.78％、60.61％、100％。

2.2 細(xì)菌和病毒的檢出率

對(duì)198只SPF級(jí)大鼠樣本進(jìn)行呼吸道和腸道致病菌檢測(cè)，致病菌總檢出率為0.96％；對(duì)228只SPF級(jí)大鼠樣本進(jìn)行 HV（漢坦病毒）抗體和Sendai（仙臺(tái)病毒）抗體檢測(cè)，總陽性率為5.26％。對(duì)306只SPF級(jí)小鼠樣本進(jìn)行呼吸道和腸道致病菌檢測(cè)，致病菌總檢出率為1.32％；對(duì)324只SPF級(jí)小鼠樣本進(jìn)行MHV（小鼠肝炎病毒）抗體、HV抗體和Ect（鼠痘病毒）抗體檢測(cè)，總陽性率為3.84％。對(duì)198只普通級(jí)新西蘭兔樣本進(jìn)行腸道致病菌檢測(cè)，檢出率為0；對(duì)102只普通級(jí)豚鼠樣本進(jìn)行腸道致病菌檢測(cè)，檢出率為0。詳見表2、表3。

2.3 感染病原體分析

按照規(guī)定項(xiàng)目檢測(cè)，在SPF級(jí)大鼠中檢出沙門菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌。SPF級(jí)小鼠中檢出沙門菌，未檢測(cè)出其他致病菌。SPF級(jí)大鼠中 HV抗體和Sendai抗體檢出陽性。SPF級(jí)小鼠中MHV抗體、Sendai抗體和 Ect抗體檢出陽性。在普通級(jí)新西蘭兔和普通級(jí)豚鼠中均未檢出沙門菌。見表2、表3。

表1 湖南省2006～2010年實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物（病毒學(xué)、細(xì)菌學(xué)）檢測(cè)結(jié)果Tab.1 Microbiological（virology，bacteriology）test results of laboratory animals in Hunan province from 2006 to 2010

表2 湖南省2006～2010年SPF級(jí)大鼠、SPF級(jí)小鼠、普通級(jí)豚鼠細(xì)菌學(xué)檢測(cè)結(jié)果Tab.2 Bacteriological test results of SPF rats，SPF mice and general level guinea pig in Hunan Province from 2006 to 2010

表3 湖南省2006～2010年SPF級(jí)大鼠、小鼠病毒學(xué)檢測(cè)結(jié)果Tab.3 Virological test results of SPF rats and SPF mice in Hunan Province from 2006 to 2010

2.4 普通級(jí)兔

普通級(jí)兔進(jìn)行兔出血癥病毒（RHDV）抗體檢測(cè)前對(duì)日齡30～60 d的兔進(jìn)行兔出血癥病毒疫苗的免疫接種，15 d后采樣進(jìn)行檢測(cè)。參照 GB/T 14926.21-2008，應(yīng)用血凝抑制試驗(yàn)（HAI）進(jìn)行抗體檢測(cè)，免疫后兔出血癥病毒HAI抗體滴度應(yīng)大于1∶10。2006～2010年共檢測(cè)普通級(jí)新西蘭兔 33批198只，其中兔出血癥病毒抗體滴度小于1∶10的有13批 60只，批次不合格率和只不合格率分別為39.39％和30.30％。未檢出沙門菌。

3 討論

隨著生命科學(xué)、生物技術(shù)、醫(yī)學(xué)、藥物研發(fā)和保健品等的快速發(fā)展，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技事業(yè)和職業(yè)健康與安全已越來越被人們所重視。AAALAC （Association of Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care International，國(guó)際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物評(píng)估和認(rèn)證協(xié)會(huì)）認(rèn)證主要評(píng)估4大部分，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的管理與使用，職業(yè)健康與安全，獸醫(yī)護(hù)理及設(shè)施。職業(yè)健康與安全的重要性是不言而喻的，與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相關(guān)的常見人獸共患病最常見病毒則有HV、痘病毒等，細(xì)菌則有革蘭氏陰性腸道病原菌等。人獸共患病的傳播主要有以下幾個(gè)途徑：與動(dòng)物相關(guān)的傳播（動(dòng)物咬抓傷、人員自身的傷害等）、組織、分泌物、被分泌物污染的儀器設(shè)備籠具等、氣溶膠、以及人與人之間的傳播。本文結(jié)果表明我省 SPF級(jí)大鼠HV抗體陽性率為2.63％，Sendai抗體陽性率為7.89％，沙門菌檢出率為1.01％，綠膿桿菌檢出率為6.67％，金黃色葡萄球菌檢出率為6.67％； SPS級(jí)小鼠MHV抗體陽性率為4.94％，Sendai抗體陽性率為5.10％，Ect抗體陽性率為1.36％，沙門菌檢出率為 1.32％ 。其檢出率均高于我省2004～2006年的監(jiān)測(cè)結(jié)果［4］。

漢坦病毒為人獸共患病，實(shí)驗(yàn)大鼠感染HV后可健康帶毒，可通過呼吸道、消化道和破損的皮膚年黏膜感染接觸者，成為實(shí)驗(yàn)室工作人員HFRS的主要傳染源。鑒于湖南省為 HFRS的高發(fā)省份之一，自然疫源地廣泛存在，曾發(fā)生多起實(shí)驗(yàn)室感染事件，值得引起相關(guān)單位的高度重視，繼續(xù)加強(qiáng)HV的預(yù)防意識(shí)。Sendai引起的一種呼吸道傳染病，臨床表現(xiàn)與流感相似。MHV和Ect是較難以控制的病毒性疾病，多數(shù)為隱形和慢性感染。沙門菌可致多種感染，輕者為自愈性胃腸炎，重者可引起致死性傷寒和副傷寒A、B沙門菌引起胃腸炎、菌血癥和腸熱癥；豬霍亂沙門菌引起胃腸炎和敗血癥，兒童多見。亦有報(bào)道本病病原體可致腦膜炎、心臟疾病、骨髓炎和其他局部感染。金黃色葡萄球菌能引起人和動(dòng)物機(jī)體局部、臟器的化膿性感染，重者可引起敗血癥、膿毒血癥等全身感染，屬于人畜共患病原菌，也是國(guó)內(nèi)外最常見的細(xì)菌性食物中毒病原之一。綠膿桿菌為條件致病菌，是醫(yī)院感染的主要病原菌之一。湖南省目前所使用的實(shí)驗(yàn)兔都是普通級(jí)，兔出血癥為必檢項(xiàng)目，兔出血癥能引起兔急性、高度致死性，病死率高大100％［5］，但是檢測(cè)結(jié)果不理想，只合格率為69.70％，批合格率為60.61％。

3 討論

隨著生命科學(xué)、生物技術(shù)、醫(yī)學(xué)、藥物研發(fā)和保健品等的快速發(fā)展，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技事業(yè)和職業(yè)健康與安全已越來越被人們所重視。為確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科技事業(yè)工作者的職業(yè)健康與安全，我省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)每年都組織開展了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量監(jiān)測(cè)，2006～2010年實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)結(jié)果表明我省SPF級(jí)大鼠、小鼠中均存在不同程度的細(xì)菌、病毒的感染，其中SPF級(jí)大鼠的HV抗體陽性率為 2.63％，Sendai抗體陽性率為7.89％，沙門菌檢出率為1.01％，綠膿桿菌檢出率為6.67％，金黃色葡萄球菌檢出率為6.67％；SPF級(jí)小鼠的MHV抗體陽性率為4.94％，Sendai抗體陽性率為5.10％，Ect抗體陽性率為1.36％，沙門菌檢出率為 1.32％。其檢出率均高于我省 2004～2006年的監(jiān)測(cè)結(jié)果［4］。不合格的動(dòng)物批次主要集中在2007年，為此，省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)加大了監(jiān)管力度，通過調(diào)查分析其感染來源主要集中在3個(gè)方面：一是飼料、墊料的質(zhì)量差，導(dǎo)致動(dòng)物質(zhì)量下降，如墊料保管不善受到污染等。二是部分單位設(shè)施構(gòu)造上有缺陷導(dǎo)致野鼠侵入。三是飼養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)人員的生物安全意識(shí)不強(qiáng)，消毒滅菌的操作不規(guī)范，廢棄物的散布和物品的交叉混用也成為病毒和細(xì)菌傳播的途徑。針對(duì)這種情況，省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理委員會(huì)對(duì)檢測(cè)不合格的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物所在區(qū)域的動(dòng)物采取了全部撲殺深埋的嚴(yán)格措施，同時(shí)組織飼養(yǎng)、實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行生物安全、消毒滅菌等專業(yè)知識(shí)的培訓(xùn)，要求飼養(yǎng)單位對(duì)飼養(yǎng)設(shè)施和環(huán)境進(jìn)行了整改。通過這些措施，我省的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物質(zhì)量得到很大改善，陽性動(dòng)物總數(shù)逐年減少，2010年實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物質(zhì)量監(jiān)測(cè)全部合格。

2006～2010年的監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示 SPF級(jí)大鼠的HV抗體陽性率為2.63％，提示存在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)和實(shí)驗(yàn)人員感染的風(fēng)險(xiǎn)，我省也曾發(fā)生過幾起實(shí)驗(yàn)室感染流行性出血熱（epidem ic hemorrhagic fever，EHF）的事件，值得引起相關(guān)單位的高度重視。我省為流行性出血熱的高發(fā)省份，自然疫源地廣泛存在，因此飼養(yǎng)單位要提高防范意識(shí)，加強(qiáng)管理，防止野鼠的侵入，對(duì)相關(guān)工作人員進(jìn)行免疫接種。兔出血癥能引起兔急性、高度致死性，病死率高達(dá)100％［5］，目前我省所使用的實(shí)驗(yàn)兔以普通級(jí)為主，兔出血癥病毒為必檢項(xiàng)目，檢測(cè)結(jié)果顯示只合格率為69.70％，批合格率為60.61％，提示飼養(yǎng)單位應(yīng)加強(qiáng)兔出血癥病毒疫苗的免疫，對(duì)疫苗低溫冷藏保證疫苗質(zhì)量，確保免疫接種效果，提高動(dòng)物質(zhì)量，防止動(dòng)物疫情的發(fā)生。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量不僅影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性和可靠性，而且關(guān)系到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物工作者的健康與安全，是一項(xiàng)常抓不懈的工作，我們認(rèn)為要消除實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群微生物感染，應(yīng)該做到以下幾個(gè)方面：1）飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的相關(guān)單位應(yīng)嚴(yán)格按《國(guó)家嚙齒類動(dòng)物種子中心引種、供種實(shí)施細(xì)則》進(jìn)行，對(duì)動(dòng)物進(jìn)行必要的預(yù)防接種，提高動(dòng)物抵抗疾病的能力。2）要加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)和管理，根據(jù)不同等級(jí)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別制定科學(xué)合理的飼養(yǎng)管理和預(yù)防醫(yī)學(xué)計(jì)劃，確保動(dòng)物的健康。內(nèi)、外環(huán)境應(yīng)進(jìn)行定期消毒，大、小鼠應(yīng)為屏障環(huán)境，防止野生動(dòng)物和昆蟲進(jìn)入飼養(yǎng)室和實(shí)驗(yàn)室。3）對(duì)飼養(yǎng)管理人員和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用者進(jìn)行全面培訓(xùn)，要通過教育和培訓(xùn)，讓其知曉人畜共患病及其危害，掌握這些疾病的基礎(chǔ)知識(shí)如病原學(xué)、臨床癥狀、傳播機(jī)制等。要建立和逐步完善個(gè)人防護(hù)設(shè)備的穿戴規(guī)程并嚴(yán)格執(zhí)行。如要按照危險(xiǎn)性分析和評(píng)估，適當(dāng)?shù)卮┐魅槟z手套、口罩/呼吸器、眼部的保護(hù)裝置、連體服、和安全鞋/靴等。按照既定的工作準(zhǔn)則和試驗(yàn)方案工作。要知曉并嚴(yán)格遵循暴露后應(yīng)采取的急救措施。4）加大實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的質(zhì)量監(jiān)測(cè)力度，嚴(yán)格執(zhí)行《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行長(zhǎng)期規(guī)律的質(zhì)量監(jiān)測(cè)。

［1］GB 14922.2-2001《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物等級(jí)及監(jiān)測(cè)》［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社出版.2002.

［2］GB/T 14926-2001《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 微生物學(xué) 寄生蟲學(xué)檢測(cè)方法》［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社出版.2002.

［3］GB/T 14926.21-2008《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 兔出血癥病毒檢測(cè)方法》［S］.北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社出版.2009.

［4］戴德芳，張紅，劉運(yùn)芝等.湖南省2004～2006年實(shí)驗(yàn)動(dòng)物病毒學(xué)質(zhì)量監(jiān)測(cè)結(jié)果分析［J］.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與比較醫(yī)學(xué)，2007，27 （1）：57-59.

［5］張玉穎，龍清光，吳潤(rùn)。兔出血癥病毒分子生物學(xué)研究進(jìn)展［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2006，27（3）：9-13.