阿莫西林與他唑巴坦聯(lián)用對400株致病菌株的體外抗菌活性研究

張 亮 余嘉銳 葉 琳

（中山大學孫逸仙紀念醫(yī)院，廣東 廣州 510000）

醫(yī)藥科技的進步帶來了抗菌藥物的發(fā)展。他唑巴坦作為β–內(nèi)酰胺酶抑制劑中的一種，其作用也很明顯，但如果與阿莫西林聯(lián)用又會是怎樣的一種效果呢？在醫(yī)學界這是一個值得去探討和研究的問題。所以，本文將采用二倍稀釋法檢測阿莫西林和他唑巴坦在調(diào)制成一定比例的情況下，觀察400株致病菌株的體外抗菌活性和試驗菌生長情況，然后計算藥物的最低抑菌濃度，即MIC[1-2]。最后再分析阿莫西林與他唑巴坦聯(lián)用，何種比例效果最佳，以及對單用阿莫西林和兩者聯(lián)用后的體外抗菌活性進行比較。以下將對本研究進行實驗，現(xiàn)報道如下。

1 實驗必備材料和實驗具體步驟

1.1 實驗必備材料

1.1.1 實驗必備藥品

阿莫西林，批號是02–284，由華北制藥集團提供，其效價為95.2%；他唑巴坦，批號是01010，由珠海聯(lián)邦制藥廠提供，其效價為98.3%。

1.1.2 實驗必備菌株

本次實驗采用菌株數(shù)目一共為400株，全部來自于某院的臨床標本，并且已經(jīng)由該院細菌室主任協(xié)助分離并對其鑒定。在這400株菌株里，耐甲氧西林金葡菌，英文簡稱為MRSA；耐甲氧西林表皮葡萄球菌，為MRSE；大腸埃希菌，為E.coli以及腸球菌均有56株；而甲氧西林敏感的金葡菌，即MSSA只有32株。其中，耐甲氧西林金葡菌（MRSA）全部產(chǎn)酶，耐甲氧西林表皮葡萄球菌（MRSE）有52株產(chǎn)酶，甲氧西林敏感的金葡菌（MSSA）有22株產(chǎn)酶。在本實驗中，質(zhì)控菌株是由某院生物制品檢定科提供的，而金葡菌，即ATCC26112有1株；大腸埃希氏菌，即ATCC44113同樣也是1株。

1.1.3 實驗必備培養(yǎng)基

是由法國某公司提供的批號為745301501的一種瓊脂，具體名稱叫做Mueller–Hinton瓊脂，簡稱是M–H瓊脂。

1.1.4 實驗測量儀器

采用的是由北京醫(yī)科大學昆侖藥物發(fā)展研究所生產(chǎn)的微量多點接種儀，來作為實驗測量儀器。

1.2 實驗具體步驟

1.2.1 M–H瓊脂培養(yǎng)基的準備方法

首先用天平稱量M–H粉末40g，再把稱好的粉末放到大椎形的瓶子里，并且倒進1000mL無菌蒸餾水，然后將該錐形瓶放在120℃溫度下進行高壓滅菌，切記在15min之后使用。

1.2.2 實驗菌懸液的制作方式

首先要從富含新鮮菌種的地方沾取少量的菌苔，再把它放在M–H瓊脂培養(yǎng)基中接種，隨后使用36℃的溫度將其培養(yǎng)大概20個小時，在20h后就會形成新的培養(yǎng)物，那么就用這新的培養(yǎng)物制成菌懸液。

1.2.3 實驗產(chǎn)酶菌的鑒定方法：對產(chǎn)酶菌進行鑒定的話，大多情況下是采用Nitrocefin試劑。首先，微量進樣器和Nitrocefin試劑是必須要準備妥當?shù)?，因為要使用該種進樣器來吸取大約10μL的Nitrocefin試劑，再將該試劑慢慢地滴在新鮮的菌苔上，將其靜至不動大概為1個小時，在1個小時之后，如果在加入Nitrocefin試劑后的菌苔顏色從黃色變成了紅色，那么就可以充分說明這個株菌是產(chǎn)酶菌；反之，如果不變顏色，則不是產(chǎn)酶菌。

1.2.4 最低抑菌濃度（MIC）的測定方式

實驗中首先需要準備好濃度不相同、并且是呈倍比的供試液，分別為10mL，將這些10mL的供試液逐個按順序分別加到試管中，然后將融化后的M–H瓊脂各加入90mL容量，在加入M–H瓊脂之后，最立刻要做的事情就是把平板傾注，實驗中最終將培養(yǎng)基抗生素的濃度值定下來，分別為64、32、16、8、4、2、1、0.5mg/L這幾個濃度值；另外，需要有一個參照物進行對比，所以實驗就需要準備一個只有培養(yǎng)基的平板，該平板需放置36℃溫箱1.5個小時左右。在這些程序都完成之后，就需要利用微量多點接種儀這個儀器，將各種菌懸液分別放在不同濃度抗生素的瓊脂表面，讓其進行接種，且保持在36℃溫箱中培養(yǎng)約20個小時，在20個小時之后觀察結(jié)果，我們需要觀察的是各個平板的接種部位是否存在菌生長。最低抑菌濃度，也就是MIC，它是試驗菌在不生長的情況下的最低抗生素濃度，我們可以通過實驗中得到的這些數(shù)據(jù)，然后計算出MIC、MIC、MIC、MIC 各個值。

2 實驗結(jié)果

2.1 阿莫西林一種藥品單用與阿莫西林、他唑巴坦兩種藥品聯(lián)用，對兩者體外抗菌效果進行比較。通過對阿莫西林單用與阿莫西林、他唑巴坦聯(lián)用的體外抗菌結(jié)果比較，我們可以發(fā)現(xiàn)阿莫西林和他唑巴坦聯(lián)用比阿莫西林單用的體外抗菌效果更好。見表1。

在醫(yī)學界，對于阿莫西林/他唑巴坦的比例調(diào)制問題，何為最佳，并不很明確。鑒此，本文就重在研究2個比例（為4∶1和2∶1比例），在確定研究比例的前提下，我們將進行這兩種比例的體外抗菌實驗測定，最終我們的實驗結(jié)果，可以明確而清晰地表明阿莫西林與他唑巴坦聯(lián)用的最佳比例為2∶1。請見表2。阿莫西林/他唑巴坦（2∶1）與阿莫西林/他唑巴坦（4∶1）。

表1 阿莫西林與阿莫西林/他唑巴坦體外抑菌情況比較

表2 體外抑菌情況比較

3 實驗結(jié)論

通過整個實驗，以及根據(jù)兩張表格的直接數(shù)據(jù)體現(xiàn)，我們最后可以得出以下結(jié)論：阿莫西林與他唑巴坦聯(lián)用比阿莫西林單用的體外抗菌效果更好；阿莫西林與他唑巴坦以2∶1的比例調(diào)制使用比阿莫西林單用和阿莫西林/他唑巴坦4∶1比例聯(lián)用對體外抗菌效果更好。

本文對阿莫西林與他唑巴坦聯(lián)用對400株致病菌株的體外抗菌活性研究是一項很大的成功，這將對醫(yī)學的發(fā)展有重要意義。

[1]趙耕云,李耘,李家泰.哌拉西林及三唑巴坦對β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定性研究[J].中國抗生素雜志,2000,1(28):28.

[2]李家泰.臨床藥理學[M].2版.北京:人民衛(wèi)生出版社,1998:586.