百蕊草對(duì)阿霉素腎病大鼠治療作用的實(shí)驗(yàn)研究

宣偉東，唐大海，卞 俊，胡水根，胡建峰，范正平(解放軍第411醫(yī)院藥學(xué)科，上海200081)

中藥百蕊草 Thesium chinensis Turcz，別名小草、細(xì)須草、一棵松等，為檀香科百蕊草屬植物，多年生寄生草本，常附著在其他活體植物根上而生長。百蕊草性寒，味辛、澀，歸肺、腎二經(jīng)，有清熱解毒、補(bǔ)腎固精之功效［1］。因其具有良好的抗菌、抗病毒和抗炎作用，臨床多用于治療急性扁桃體炎，上呼吸道感染，肺炎，咽炎等疾病，且無毒副作用。百蕊草在浙、皖民間，常以全草入藥，用于急、慢性腎炎的治療，且效果良好。本文采用大鼠阿霉素(ADR)腎病模型［2］，考察百蕊草提取物對(duì)阿霉素腎病的治療效果。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 SD大鼠，CL級(jí)，雄性，體重(180±10) g。由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)為SCXK(滬)2009-0005。分籠飼養(yǎng)，控制室溫在15～20℃，自由攝食、飲水。

1.2 藥物 百蕊草藥材于2009年5月購自安徽亳州，由第二軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院生藥教研室鄭漢臣教授鑒定為Thesium chinensis Turcz。百蕊草藥材經(jīng)水煎煮2次，每次2 h，水煎液合并后過濾，減壓濃縮，40℃真空干燥，得百蕊草提取物，臨用前折合成生藥給藥量，用蒸餾水配成混懸液。注射用多柔比星(ADR，俗名阿霉素，深圳萬樂藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào):0807E1，每支10 mg)，臨用前用生理鹽水配制。

1.3 方法

1.3.1 ADR腎病模型建立與動(dòng)物分組 40只健康雄性SD大鼠飼養(yǎng)7 d后，隨機(jī)抽取10只作為空白對(duì)照組，余下30只大鼠于實(shí)驗(yàn)開始當(dāng)天在非麻醉?xiàng)l件下一次性尾靜脈注射阿霉素6.0 mg/kg，并按體重隨機(jī)平均分為模型對(duì)照組，低劑量組(給藥劑量相當(dāng)于生藥1.0 g/(kg·d))，高劑量組(給藥劑量相當(dāng)于生藥5.0 g/(kg·d))。

1.3.2 給藥方法 各組于造模次日起，每天灌胃給藥1.0 ml，連續(xù)5周?？瞻捉M和模型組給予生理鹽水。

1.3.3 觀察指標(biāo)及檢測(cè)方法 各組每周稱重1次，記錄四肢、陰囊的浮腫情況及腹水狀況，同時(shí)觀察毛色、浮腫與精神狀態(tài)。各組每周1次置于代謝籠，收集24 h尿液，記錄尿量，采用考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定尿蛋白濃度，計(jì)算24 h尿蛋白。試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，腹主動(dòng)脈取血，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清總蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、總膽固醇(TCH)、甘油三酯(TG)、尿素氮(UREA)等各項(xiàng)血液生化指標(biāo)。另摘取腎臟，用10%福爾馬林液固定，石蠟包埋切片，蘇木素-伊紅(HE)染色，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。本實(shí)驗(yàn)血液生化指標(biāo)由解放軍第411醫(yī)院檢驗(yàn)科測(cè)定，病理切片由411醫(yī)院病理科完成。

2 結(jié)果與結(jié)論

2.1 百蕊草對(duì)ADR大鼠一般狀態(tài)的影響 空白組大鼠在整個(gè)試驗(yàn)過程中飲食活動(dòng)精神狀態(tài)良好，毛色有光澤。模型組大鼠在造模4 d后開始出現(xiàn)食欲不振、精神萎靡、怠倦少動(dòng)、消瘦、便溏等現(xiàn)象，并伴有一定程度的脫毛，14 d后下額出現(xiàn)褪毛。各組除空白組外，在造模2周后，均出現(xiàn)飲水減少，四肢浮腫明顯，爛尾，毛發(fā)無光澤，并有豎毛現(xiàn)象。與模型組相比，給藥組在用藥后上述表現(xiàn)有所改善，在藥物干預(yù)4周后，大鼠的浮腫癥狀明顯輕于模型組，爛尾癥狀均痊愈，而模型組無一只大鼠的癥狀得到改善，提示百蕊草可通過其良好的抗菌作用，有效地防止感染。

2.2 百蕊草對(duì)ADR大鼠體重和尿量的影響 各組與空白組比較，在造模1周后，體重均出現(xiàn)明顯的下降，并在以后的進(jìn)程中，體重增加緩慢。各組24 h尿量與空白組相比，在造模2周后，均顯著下降(P＜0.001)，尤以模型組為甚。與模型對(duì)照組相比，給藥組在給藥治療第3周以后，尿量顯著增加(P＜0.01)，提示百蕊草對(duì)ADR大鼠具有明顯的利尿作用。各組體重和尿量數(shù)據(jù)見表1、表2。

表1 百蕊草對(duì)ADR大鼠體重的影響(，n=10)

表1 百蕊草對(duì)ADR大鼠體重的影響(，n=10)

1)P＜0.05，2)P＜0.01，與空白組相比。

組別 造模前(g)造模后(g)第1周 第2周 第3周 第4周 第5周空白對(duì)照 250.1±10.95 290.0±22.80 318.4±27.87 345.3±31.46 361.4±34.30 375.9±37.28模型對(duì)照 248.3±11.35 231.0±15.952) 260.2±24.942) 268.4±25.732) 276.0±26.752) 284.4±29.892)低劑量組 240.7±6.67 227.8±17.032) 253.5±13.372) 261.1±15.952) 266.5±11.742) 274.3±14.302)高劑量組 244.5±8.43 243.6±15.671) 264.2±16.672) 274.0±20.682) 273.3±24.492) 275.6±30.462)

表2 百蕊草對(duì)ADR大鼠24 h尿量的影響(，n=10)

表2 百蕊草對(duì)ADR大鼠24 h尿量的影響(，n=10)

1)P＜0.01，與空白組相比;2)P＜0.05，3)P＜0.01，與模型組相比。

組別 造模前(ml/24 h)造模后(ml/24 h)第1周 第2周 第3周 第4周 第5周空白對(duì)照 49.17±6.11 44.33±7.00 48.67±7.81 33.00±8.94 40.83±14.41 40.67±16.29模型對(duì)照 50.2±14.51 6.25±3.211) 10.05±4.861) 6.75±2.581) 7.90±3.251) 10.90±3.511)低劑量組 41.9±17.95 9.85±8.551) 12.65±6.561) 15.25±3.361)，3) 15.20±4.521)，2) 19.60±8.141)，2)高劑量組 40.00±9.99 16.70±9.421) 12.65±6.561)，2) 14.11±3.141)，3) 12.89±4.041)，3) 15.33±5.051)，2)

2.3 百蕊草對(duì)ADR大鼠尿蛋白濃度的影響 造模后第1周開始，給藥組和模型組的24 h尿蛋白濃度開始上升，第2周開始大幅度上升，結(jié)合體重與尿量數(shù)據(jù)，表明在注射ADR 1周后，造模成功。與模型組相比，治療組在藥物干預(yù)藥2周后，24 h尿蛋白濃度下降(P＜0.05)，治療3周后，低劑量組尿蛋白濃度顯著下降(P＜0.01)(表3)。從表4可知，與模型組相比，百蕊草治療組的24 h尿蛋白總量不降反升，其原因可歸于百蕊草良好的利尿作用，隨著尿量的增加(表2)，增加了尿蛋白的總量排出。

表3 百蕊草對(duì)ADR大鼠24 h尿蛋白濃度的影響(，n=10)

表3 百蕊草對(duì)ADR大鼠24 h尿蛋白濃度的影響(，n=10)

1)P＜0.05，2)P＜0.01，與模型組相比。

組別 造模前(ml/24 h)造模后(ml/24 h)第1周 第2周 第3周 第4周 第5周空白對(duì)照 0.30±0.06 0.39±0.08 0.42±0.08 0.58±0.11 0.49±0.11 0.47±0.13模型對(duì)照 0.30±0.08 3.27±0.88 9.82±2.01 13.58±4.33 9.74±0.36 9.78±0.51低劑量組 0.41±0.22 3.40±1.55 7.00±2.561) 4.72±0.612) 6.85±1.692) 6.22±1.92)高劑量組 0.40±0.12 1.78±1.002) 7.18±2.181) 9.73±0.741) 9.32±0.351) 8.90±0.981)

表4 百蕊草對(duì)ADR大鼠24 h尿蛋白的影響(，n=10)

表4 百蕊草對(duì)ADR大鼠24 h尿蛋白的影響(，n=10)

1)P＜0.05，2P＜0.01，與模型組相比。

組別 造模前(ml/24 h)造模后(ml/24 h)第1周 第2周 第3周 第4周 第5周空白對(duì)照 58.73±7.64 59.19±7.47 63.65±7.25 53.80±3.54 53.32±5.91 46.27±7.15模型對(duì)照 57.56±10.26 80.42±26.76 347.97±87.82 290.56±45.31 276.08±104.27 371.23±108.6低劑量組 57.59±9.63 111.40±58.93 293.26±38.84 271.97±48.511) 377.98±90.71) 404.41±63.19高劑量組 61.49±11.79 96.48±40.32 368.37±87.53 493.48±84.822) 435.74±117.792) 477.08±63.541)

2.4 百蕊草對(duì)ADR大鼠血液生化指標(biāo)的影響 表5顯示，與空白組比較，模型組TP、ALB水平顯著下降，TCH與TG水平升高，提示造模5周后，ADR大鼠體內(nèi)蛋白流失嚴(yán)重，脂質(zhì)代謝紊亂，體質(zhì)較差。與模型組相比，低劑量組的血清TP、ALB顯著升高，TCH與TG水平顯著降低，已接近空白組水平，高劑量組ALB也較模型組有上升，TCH、TG水平下降，尿素氮水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。表明百蕊草有助于ADR大鼠各項(xiàng)生理指標(biāo)的恢復(fù)，治療效果明顯，低劑量組效果優(yōu)于高劑量組。

表5 百蕊草對(duì)ADR大鼠血液生化指標(biāo)的影響(，n=10)

表5 百蕊草對(duì)ADR大鼠血液生化指標(biāo)的影響(，n=10)

1)P＜0.01，與空白組相比;2)P＜0.05，3)P＜0.01，與模型組相比。

組別 TP(g/L) ALB(g/L) TCH(mmol/L) TG(mmol/L) UREA(mmol/L)空白對(duì)照 60.57±2.57 31.57±1.51 2.15±0.32 1.12±0.44 8 7.97±1.02.39±0.72模型對(duì)照 52.13±6.151) 16.18±3.461) 6.38±0.571) 4.15±0.231) 8.16±1.41低劑量組 58.16±4.42) 27.69±2.053) 2.63±0.573) 2.96±0.333) 8.36±0.69高劑量組 53.32±5.75 22.14±1.512) 4.31±0.852) 3.66±0.602)

2.5 百蕊草對(duì)大鼠腎組織的影響 各組大鼠腎臟肉眼觀察均無明顯異常?？瞻讓?duì)照組:腎小球、腎小管結(jié)構(gòu)正常(圖1)。模型對(duì)照組:腎小球呈現(xiàn)明顯萎縮(圖2)，有的球囊腔消失;腎小管管腔變窄，有的管腔閉塞，有的可見新生的腎小管;間質(zhì)細(xì)胞增生，間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤明顯。低劑量組:腎小球囊腔有不同程度的擴(kuò)張(圖3)，腎小管上皮細(xì)胞變性，管腔有擴(kuò)張現(xiàn)象，并有透明管型形成;間質(zhì)頭炎性細(xì)胞浸潤。高劑量組:腎小球囊腔擴(kuò)張(圖4)，偶見腎小球萎縮;腎小管有輕度擴(kuò)張，有的可見透明管型形成;間質(zhì)有炎細(xì)胞浸潤。

圖1 空白對(duì)照組:腎小球、腎小管形態(tài)與結(jié)構(gòu)正常。HE×400

圖2 模型對(duì)照組:腎小球萎縮，腎小管增生，腎間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤。HE×400

圖3 低劑量組:腎小球囊腔擴(kuò)張，間質(zhì)炎細(xì)胞浸潤。HE×400

圖4 高劑量組:腎小球囊腔擴(kuò)張，腎小管上皮腫脹、擴(kuò)張。HE×400

腎小球腎炎病理演變的最終結(jié)局是腎小球逐漸萎縮，導(dǎo)致腎功能降低，嚴(yán)重者可致腎功能衰竭。本實(shí)驗(yàn)表明，模型組動(dòng)物腎組織的病理變化，符合腎小球腎炎的病理變化過程。此外，造模后百蕊草高、低兩劑量組動(dòng)物腎組織的病理變化均出現(xiàn)了一定程度的減輕，雖然腎實(shí)質(zhì)出現(xiàn)有損傷的變化，如腎小球囊腔不同程度的擴(kuò)張、腎小管的變性以及透明管型生成等，但未導(dǎo)致腎小球的萎縮。因此，可以認(rèn)為，百蕊草能改善ADR大鼠腎臟病理組織變化，減輕對(duì)腎臟的損害，對(duì)腎小球腎炎有一定的治療作用。

3 討論

ADR誘導(dǎo)的大鼠腎病綜合征模型，已被廣泛應(yīng)用于中藥及中草藥成分對(duì)腎臟保護(hù)作用的藥物篩選與藥效學(xué)評(píng)價(jià)［3］。本研究通過對(duì)大鼠一次尾靜脈注射阿霉素6.0 mg/kg，模型動(dòng)物的腎病癥狀明顯，體重、尿量顯著下降，尿蛋白排出顯著上升，生化指標(biāo)及病理變化明顯，表明本次實(shí)驗(yàn)成功建立了ADR大鼠腎病模型。該模型基本類似人類微小病變型腎病，因此，基于此方法的藥物干預(yù)，可以有效進(jìn)行藥物對(duì)腎病綜合征的療效評(píng)價(jià)。

百蕊草是一種廣譜的抗菌中草藥，素有“植物抗生素”的美稱。其化學(xué)成分主要是以百蕊草素為代表的黃酮類化合物。藥理學(xué)研究表明除了抗菌作用外，百蕊草尚有良好的消炎鎮(zhèn)痛，鎮(zhèn)咳及抗腫瘤作用［4］。實(shí)驗(yàn)治療組大鼠爛尾現(xiàn)象得以痊愈的現(xiàn)象提示，百蕊草的抗菌作用可以有效防治ADR大鼠的感染，從而改善動(dòng)物的生存狀態(tài)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，百蕊草能夠顯著增加ADR大鼠尿排出量，消除水腫癥狀，療效確切。由于模型組大鼠24 h尿量極顯著地下降，因此，筆者認(rèn)為，尿蛋白濃度更適合作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)顯示，百蕊草雖然不能減少尿蛋白排泄，但可顯著降低ADR大鼠的尿蛋白濃度。百蕊草能顯著提高ADR大鼠血清蛋白含量，降低異常血脂、膽固醇水平，減輕對(duì)腎臟的損害，對(duì)腎病大鼠病理組織學(xué)變化有明顯改善作用，從而表現(xiàn)出對(duì)ADR腎病具有良好的治療作用，尤其以低劑量組效果顯著。

腎病綜合征屬中醫(yī)“水腫”病范疇，其發(fā)生與水液代謝及肺、脾、腎三臟功能失調(diào)有關(guān)，臨床以大量蛋白尿、低蛋白血征、高脂血征及不同程度水腫為特征。百蕊草的上述療效特征，為其臨床治療腎病綜合征提供了實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，其作用機(jī)制值得進(jìn)一步研究。

［1］ 國家中醫(yī)藥管理局，中華本草編委會(huì).中華本草［M］.上海:上海科技出版社，1999，2:595.

［2］ Bertani T，Poggi A，Pozzoni R，et al.Adriamycin-induced nephritic syndrome in rats［J］.Lab Invest，1982，46(1):16.

［3］ 李保春，崔若蘭，張曉英.大鼠阿霉素腎病模型的建立［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1992，13(5):485.

［4］ 王 崢，劉近明，李紹順.百蕊草的研究進(jìn)展［J］.中國藥師，2006，9(11):1059.